四川省卫生厅科研基金(100051)
- 作品数：5 被引量：12H指数：1
- 相关作者：张优仪程德云胡晓波林大勇胡晓波更多>>
- 相关机构：四川省人民医院成都市第一人民医院四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：四川省卫生厅科研基金成都市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- JNK通路对周期性机械牵拉刺激人肺泡上皮A549细胞ICAM-1表达的影响
- 2016年
- 目的探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在周期性机械牵拉刺激人肺泡上皮A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)中的作用。方法建立离体A549细胞机械牵拉刺激模型:以大小为1 000μstrain的牵拉力刺激细胞,机械牵拉刺激前(0 min)和机械牵拉刺激后5、15、30、60 min时间点进行观察。选用JNK特异性阻断剂SP600125,实验分空白对照组(0 min),机械牵拉5、15、30、60 min组,阻断剂预处理组,阻断剂预处理+机械牵拉5、15、30、60 min组,共10组,每组3皿细胞。采用Western blot检测细胞内JNK、磷酸化JNK、ICAM-1蛋白的表达变化。采用RT-PCR检测ICAM-1的mRNA表达变化。结果与空白对照组比较,A549细胞经单纯机械牵拉刺激后,磷酸化JNK蛋白水平增加,以30 min时间点最为明显(P<0.05);随着机械牵拉刺激时间的延长,在60 min时间点磷酸化JNK蛋白水平下降至约基线水平,与基线水平差异无统计学意义(P>0.05)。单纯机械力作用后,ICAM-1蛋白及其mRNA水平在60 min时间点有较明显增加(P<0.05)。阻断剂SP600125预处理后再经机械刺激磷酸化JNK蛋白的表达水平升高不明显(P>0.05),同时ICAM-1蛋白及mRNA水平在60 min时间点增加亦不明显(P>0.05)。结论机械牵拉刺激通过激活A549细胞JNK蛋白信号通路,从而引起细胞ICAM-1的表达变化,提示JNK信号通路有可能参与了A549细胞的机械力信号转导过程。
- 胡晓波张优仪程德云
- 关键词：机械牵拉A549JNK
- 人肺泡上皮细胞A549中细胞间粘附分子-1的siRNA构建探讨被引量：1
- 2017年
- 目的构建A549细胞中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的小干扰RNA,探讨ICAM-1特异性siRNA能否抑制LPS诱导A549细胞ICAM-1的表达。方法采用化学合成法构建A549细胞ICAM-1的小干扰RNA。LPS诱导A549细胞ICAM-1表达,用RT-PCR和流式细胞仪分别从mRNA和蛋白水平检测ICAM-1的表达。使用阳离子脂质体Lipofectamin2000转染ICAM-1siRNA到A549细胞,再用LPS刺激A549细胞,RT-PCR和流式细胞仪分别检测RNA干扰A549细胞后ICAM-1的mRNA和蛋白表达。结果 LPS可以诱导A549细胞ICAM-1的表达,但LPS浓度过大损伤细胞。10ng/ml的LPS组和100ng/ml的LPS组OD值相比,两组OD值之间差异有显著性(P<0.001)。10ng/ml的LPS作用A549细胞8h左右,细胞无明显损伤;10ng/ml LPS作用A549细胞1h后,ICAM-1mRNA的表达上调(P<0.05),而ICAM-1蛋白水平增加不明显;10ng/ml LPS作用A549细胞4h后,ICAM-1mRNA表达水平明显增加(P<0.05),ICAM-1蛋白水平也增加明显。通过化学合成法构建ICAM-1的siRNA,筛选出最优siRNA。转染ICAM-1siRNA后,LPS刺激A549细胞的ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平增加不明显。结论通过化学合成法构建的ICAM-1siRNA,可以有效地干扰ICAM-1的表达,ICAM-1siRNA降低了LPS诱导的ICAM-1的表达。
- 胡晓波张优仪程德云
- 关键词：细胞间黏附分子1小干扰RNA
- 瑞芬太尼缓解氧化应激对内毒素诱导的SD大鼠急性肺损伤的保护作用被引量：10
- 2019年
- 目的:探究瑞芬太尼对大鼠急性肺损伤(ALI)的作用及作用机制。方法:腹腔注射脂多糖(LPS)复制大鼠ALI模型,并于造模前1 h尾静脉注射瑞芬太尼或生理盐水进行预处理。用TUNEL检测细胞凋亡情况,免疫组化检测Ki67及Caspase-3的含量,ELISA检测血清炎症因子浓度,试剂盒检测MDA和SOD浓度; Western blot法检测PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:瑞芬太尼能显著抑制肺组织细胞凋亡及Caspase-3的表达(P<0. 05),并促进Ki67的表达(P<0. 05);同时,瑞芬太尼还可明显降低ALI血清炎症因子(IL-6、IL-1β、IFN-γ)及MDA含量(P<0. 05),并能显著促进SOD的分泌(P<0. 05);此外,瑞芬太尼还可显著降低p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比值(P<0. 05)。结论:瑞芬太尼可通过缓解炎症反应和氧化应激减轻ALI大鼠肺损伤,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。
- 高聪林大勇刘兵陈峰
- 关键词：急性肺损伤氧化应激炎症瑞芬太尼
- 周期性机械牵拉诱导A549细胞p38MAPK的表达被引量：1
- 2012年
- 目的探讨p38蛋白激酶（p38MAPK）是否参与周期性机械牵拉刺激在人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的信号转导过程。方法实验分对照组（刺激前）、机械牵拉（刺激后）5、15、30、60min共5组，每组3皿细胞。建立离体的A549细胞机械牵拉模型：以大小为1000μstrain的牵拉力刺激细胞，在刺激前和刺激后5、15、30、60min时间点进行观察。结果A549细胞经机械牵拉刺激后，磷酸化p38蛋白水平增加，以30min时间点最为明显。随着机械牵拉时间的延长，在60min时间点磷酸化p38蛋白水平下降至约基线水平。结论机械牵托刺激信号可激活A549细胞p38MAPK，从而引起继发细胞信号转导及功能改变。
- 胡晓波张优仪程德云
- 关键词：机械牵拉A549P38信号转导
- 机械力刺激对人肺泡上皮A549细胞JNK蛋白表达的影响
- 2016年
- 目的探讨机械力刺激对人肺泡上皮A549细胞c-Jun氨基末端激酶/促分裂原活化蛋白激酶(JNK/MAPK)表达的影响。方法建立离体的A549细胞机械刺激模型:分别以大小为1 000μstrain的张应力或压应力刺激细胞,在刺激前和刺激后0、5、15、30、60min时间点进行观察,共10组,每组3皿细胞。采用Western blot检测机械刺激后细胞内磷酸化JNK/MAPK蛋白、总JNK/MAPK蛋白的表达变化。结果 A549细胞经机械力刺激后,磷酸化JNK/MAPK蛋白水平增加。张应力组在30min时间点增加最明显,压应力组在15min时间点最明显。之后随着机械刺激时间延长,张应力和压应力刺激组的磷酸化JNK蛋白水平均出现下降,在60min时下降至基线水平。结论 1 000μstrain张应力或压应力刺激,均激活A549细胞JNK/MAPK,提示JNK通路可能参与了机械力诱导的A549细胞信号转导。
- 胡晓波张优仪程德云
- 关键词：肺泡蛋白质类A549
