云南省应用基础研究计划面上项目(2009CD142) 作品数:6 被引量:29 H指数:2 相关作者: 孙茂盛 易山 赵晓南 张光明 吴晋元 更多>> 相关机构: 中国医学科学院北京协和医学院 昆明医科大学 昆明医学院 更多>> 发文基金: 云南省应用基础研究计划面上项目 国家高技术研究发展计划 云南省社会发展科技计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
秋冬季婴幼儿轮状病毒感染分子流行病学调查 被引量:5 2012年 目的监测2010年云南昭通地区秋冬季腹泻患儿感染轮状病毒的流行趋势,了解流行毒株的基因型特征。方法 2010年9—12月在云南省昭通市第一人民医院采集94份就诊的腹泻患儿粪便,应用胶体金法、逆转录聚合酶链式反应及PAGE电泳等方法,对样品进行轮状病毒抗原检测,其中8份阳性样品进行VP7基因测序分析及基因型分型。结果腹泻病患排泄物中轮状病毒抗原阳性比例为54.3%(51/94);8份轮状病毒基因序列分析,其中7份为G1型,1份为G3型;核苷酸同源性分析发现检测样品中轮状病毒主要与在中国辽宁、印度和泰国发现的流行株相似。结论 2010年昭通地区秋冬季患儿腹泻主要由轮状病毒引起,其中以G1型为主,其次为G3型。 赵晓南 李鸿钧 吴晋元 张光明 易山 杨星 郜岩 贾琴妹 木国法 孙茂盛关键词:轮状病毒 婴幼儿 基因型 轮状病毒疫苗研究现状 被引量:2 2015年 轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗:其中包括单一血清型Rotarix、罗特威和重组5价疫苗RotaTeq。它们已在全球多国使用,有些国家已将其纳入免疫规划。疫苗的使用使人群轮状病毒感染下降,特别是死亡率明显减少。但也出现了一些问题,因此除了减毒活疫苗,也有一些实验室研究其他形式的疫苗,例如重组疫苗、灭活疫苗等。本文主要介绍轮状病毒疫苗的研究现状,为我国轮状病毒疫苗的研究、使用和推广提供一定理论依据。 孙晓琴 易山 解裕萍 米锴 孙茂盛关键词:轮状病毒 疫苗 婴幼儿 腹泻 两种层析方法纯化轮状病毒效果的比较 被引量:2 2012年 目的比较两种不同的凝胶层析纯化方法对人轮状病毒(Rotavirus,RV)的纯化效果及其对病毒抗原性和免疫原性的影响。方法病毒收获液经超滤浓缩后,分别采用Q Sepharose Fast Flow(QFF)离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶过滤层析纯化,采用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金)检测纯化病毒的抗原性;电镜观察病毒的形态;荧光灶法测定病毒纯化前后的感染性滴度;双抗体夹心ELISA法测定抗原含量;Lowry法测定纯化前后样品的蛋白含量;SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的病毒蛋白;纯化病毒经灭活后,PAGE分析病毒的核酸带型,免疫小鼠,检测纯化病毒的免疫原性。结果QFF洗脱峰1和4FF洗脱峰1为RV抗原阳性,电镜观察可见完整的、大小约70 nm的RV颗粒;经QFF和4FF层析纯化后,病毒的感染性滴度分别为7.10和4.50 lgCCID50/ml,最终抗原回收率分别为65.3%和11.8%,病毒液总蛋白去除率分别为99.68%和99.52%;SDS-PAGE分析显示,经QFF和4FF纯化的样品未见明显杂蛋白条带,且特异性良好;纯化病毒灭活后,病毒基因组带型未发生改变,且保持了良好的抗原性和免疫原性。结论两种凝胶层析方法均能纯化人轮状病毒,综合比较,QFF离子交换层析纯化效果优于4FF凝胶过滤层析。 杨星 吴晋元 易山 李鸿钧 张光明 郜岩 贾琴妹 赵晓南 孙茂盛关键词:轮状病毒 纯化 离子交换层析 凝胶过滤层析 一株人源灭活轮状病毒疫苗研制用毒株的分离和免疫学效果评价 目的评价一株人源性轮状病毒毒株的生物学,免疫学特性及用于轮状病毒疫苗制备的开发可行性。方法经细胞培养,分离到轮状病毒毒株ZTR-5株,并在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫... 吴晋元 李鸿钧 贾琴妹 易山 张光明 谢天宏 郜岩 杨星 赵晓南 孙茂盛关键词:人轮状病毒 VERO细胞 免疫试验 文献传递 两株灭活轮状病毒疫苗的免疫效果 被引量:1 2012年 目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用ELISA法和微量病毒中和试验检测大鼠和猕猴血清中RV特异性抗体效价和中和抗体效价,流式细胞术检测猕猴血液中CD4+和CD8+T细胞的数量。结果 P[8]G1和P[2]G3株疫苗样品的RV抗原含量分别为10 240和5 120 EU/ml;免疫2次后,P[8]G1和P[2]G3株疫苗诱导大鼠产生的血清IgG抗体GMT分别为(43 407.71±1 654.51)和(41 520.61±2 047.61),诱导猕猴产生的血清IgG抗体GMT分别为(13 654.45±3 125.27)和(10 350.68±997.83);单一血清型疫苗免疫后产生的中和抗体具有型间交叉识别作用;2株疫苗免疫猕猴后均能刺激其CD4+T淋巴细胞增殖,CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论 2株RV灭活疫苗均具有良好的免疫原性及型间交叉识别作用。 吴晋元 易山 张光明 李鸿钧 谢天宏 李思成 郜岩 贾琴妹 杨星 赵晓南 孙茂盛关键词:轮状病毒疫苗 灭活疫苗 免疫反应 miRNA参与肿瘤基因表达调控研究进展 被引量:18 2016年 调查表明,我国城乡居民恶性肿瘤死亡率属于世界较高水平,而且呈持续的增长趋势。近年来的研究发现在肿瘤的发生与发展过程中涉及到多种因素,其中mi RNA可能扮演了重要的作用。mi RNA是一种长度约为22 nt的非编码短序列RNA,通过介导特异性的基因沉默导致靶m RNA降解,促使相应蛋白质的转译受阻而失去原有编码蛋白质的功能。mi RNA在细胞分裂周期中影响着基因的表达调控,在此过程中基因表达的失控就可能导致疾病的发生。而肿瘤的发生是以细胞恶变为基础,细胞恶变则是与细胞周期调控因素失衡相关,由此提示了一些mi RNA可能参与了肿瘤的发生、发展过程并在其中发挥了重要作用。随着研究的深入,mi RNA逐渐成为肿瘤诊治的新研究方向。本文主要讨论mi RNA在肿瘤基因表达调控方面的研究进展。 孙晓琴 易山 牛香莲 米锴 孙茂盛关键词:MI RNA 肿瘤 基因表达调控 MicroRNA对干细胞调控作用的研究进展 被引量:1 2013年 干细胞是具有自我复制及更新能力的原始不成熟细胞,可向不同组织及器官分化,在胚胎和成体组织中都有存在。干细胞的应用作为组织修复和重建的一种新策略,近几年来受到了医学界和生物学界的广泛关注,而microRNA(miRNA)作为一种长约21~23个核苷酸的内源性非编码RNA的分子,其通过与靶mRNA结合,发挥负向基因转录调控作用的功能已在研究中被证实,其对细胞乃至生物体的影响也渐渐成为研究的热点。但干细胞与miRNA两者之间是否存在联系,miRNA是否在干细胞的分化、增殖中也具一定有作用,已逐渐成为一项值得研究的课题。这不仅可以使我们更加全面的了解miRNA的作用,也为干细胞的应用提供了新的研究途径和理论依据。因此本文就miRNA及其对胚胎干细胞和成体干细胞的调控做一综述。 曹颖 孙茂盛关键词:MICRORNA 干细胞 基因调控