广东省自然科学基金(C-010177)
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 相关作者：张镜方简旭华詹秋鹏王克学胡平更多>>
- 相关机构：广东省人民医院清华大学广东省心血管病研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组织工程心脏瓣叶的体外培养被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨瓣叶支架种植细胞后 ,不同体外培养时间瓣叶的生成情况。 方法 杂种猪 9只 ,取主动脉 ,分离内皮细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞 ,培养扩增。将成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞按顺序种植在预湿处理的支架材料上 ,以首次种植成纤维细胞、平滑肌细胞为起点 ,取 7天、14天和 2 8天样本使用戊二醛固定 ,用扫描电子显微镜 ( SEM)检测 ,对培养 2 8天的样本进行组织学检查。 结果 SEM检测显示 :随着培养时间的延长 ,细胞数量增加 ,细胞间连接出现 ,并有基质生成 ;至 2 8天 ,瓣膜支架上可见大量细胞黏附 ,细胞融合成片 ,表面可见基质形成。支架的细胞覆盖率也随时间的延长明显增加。组织学检测见大量细胞黏附材料 ,细胞已长入材料中部。 结论 体外培养的瓣叶存在生长活性 。
- 简旭华张镜方胡平唐毅肖学钧卢聪
- 关键词：体外培养平滑肌细胞细胞培养
- 胰蛋白酶法和Triton-X100法去除瓣膜细胞的效果比较被引量：12
- 2005年
- 目的比较胰蛋白酶法和Triton-X100法去除异种或同种心脏瓣膜上细胞的效果。方法选取新鲜猪主动脉瓣膜片分别置入0.05%胰酶溶液和0.25%Triton-X100溶液中处理48h,并以未经处理的新鲜瓣膜片作对照,行光镜及电镜观察,并作热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率测定。结果光镜和电镜下均显示,胰酶法和Triton-X100法均彻底去除了主动脉瓣膜上的细胞成分,但Triton-X100法对瓣膜支架结构的损伤较大。热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率在新鲜瓣膜组和胰酶组间无显著性差异,但Triton-X100组与新鲜瓣膜组及胰酶组相比均有下降。结论胰酶法去除猪主动脉瓣膜细胞彻底,保持了瓣叶支架结构,优于Triton-X100法。
- 王克学张镜方詹秋鹏简旭华
- 关键词：胰蛋白酶心脏瓣膜去细胞
- 静脉与动脉内皮细胞和肌成纤维细胞的比较被引量：1
- 2007年
- 目的比较大隐静脉和股动脉来源内皮细胞和肌成纤维细胞的培养结果,判断外周静脉是否可以作为组织工程心脏瓣膜的种子细胞来源。方法全麻后无菌条件下取下试验用猪的大隐静脉和股动脉各约5 cm长,用胶原酶浊获取细胞培养,用光学显微镜观察细胞生长情况,用荧光探针D IL AcLD l检测鉴定是否内皮细胞。将脱去内皮细胞的大隐静脉,剪成<1 mm3的组织碎片培养,光学显微镜观察细胞生长情况,免疫组化法检测α-actin确定是肌成纤维细胞。结果分别成功培养了静脉和动脉来源的内皮细胞和肌成纤维细胞,两种来源的细胞之间无明显差异。结论外周静脉可以作为组织工程心脏瓣膜种子细胞的来源。
- 王克学张镜芳简旭华
- 关键词：静脉动脉内皮细胞肌成纤维细胞
- 猪主动脉瓣去细胞的初步研究被引量：3
- 2004年
- 目的 对猪主动脉瓣进行了酶水化法去细胞的研究,探讨应用猪去细胞瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法 应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸去除猪主动脉瓣组织中的细胞,对处理后的组织进行组织学与免疫组化,扫描电子显微镜观察,并进行理化性能测定。结果 酶水化法去细胞效果良好,且能较好地保持胶原纤维和弹性纤维原有的排列和分布。与新鲜猪主动脉瓣比较,热皱缩温度、抗张强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 酶水化法去细胞效果良好,初步制造了猪主动脉瓣脱细胞基质材料,为进一步制作组织工程瓣膜提供了较合适的支架材料。
- 詹秋鹏张镜方林秋雄简绪华
- 关键词：心脏瓣膜生物材料去细胞基质
- 组织工程心脏瓣叶皮下包埋实验被引量：1
- 2006年
- 目的探讨体外生成的组织工程心脏瓣叶在体内可能存在的组织活性。方法裸小鼠12只,将体外培养的种植有平滑肌/成纤维及内皮细胞的瓣叶(实验组)和未种植细胞的支架片(对照组)包埋于裸小鼠背部皮下,观察支架片局部皮肤变化。分12、14、21、28d4个时间段各处死3只小鼠,大体观察、组织学检查。结果包埋12、14d,活体显示实验组局部皮肤色泽红润,大体标本呈自体组织色泽。对照组活体局部皮肤及大体标本均苍白。HE染色结果显示,包埋12d,实验组细胞数量比对照组多,材料中部有肌纤维形成。对照组细胞数少,无肌纤维形成。至第28天,两组细胞数量均明显增加,对照组细胞仍较少。实验组显示纤维包膜内有肌纤维形成,对照组无。VG染色结果显示,种植后第12天,实验组有红染胶原纤维形成。对照组无明显的阳性染色胶原纤维。结论组织工程心脏瓣叶在体内具有组织活性,如进行自体瓣叶原位移植可能具备生长能力。
- 简旭华张镜方胡平沈雁钟灿灿
- 关键词：裸小鼠心脏瓣膜
