山东省博士后创新项目(200803029)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：山东农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定被引量：3
- 2011年
- 本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coliBL21中,在IPTG的诱导下进行表达。用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究。建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用。结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区。表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000。优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100。临界值为0.4。血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%。为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础。
- 马利宏肖一红吕军华王伟伟董施伟周恩民
- 关键词：PRRSVNSP2免疫学ELISA
