国家自然科学基金(81171111)
- 作品数：14 被引量：33H指数：3
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- 相关机构：辽宁医学院附属第一医院辽宁医学院更多>>
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- 人胆固醇酯水解酶基因慢病毒载体构建及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的构建含有人胆固醇酯水解酶(hCEH)基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP,为hCEH基因治疗缺血性脑卒奠定基础。方法应用聚合酶链反应方法扩增目的片段,在目的基因进行上、下游分别加上Pac I和Asc I两个酶切位点,经双酶切后,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得重组质粒。将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接,获得慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP,并进行测序。抽提慢病毒载体,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。结果目的基因与慢病毒表达载体pLenti6.3-IRES-EGFP连接,慢病毒表达载体pLenti6.3-hCEH-IRES-EGFP构建与预期相匹配,包装细胞293T呈绿色荧光。结论成功构建了携带hCEH基因的慢病毒载体。
- 关宁罗俊生霍晓川顾立学王瑞张兴海冯旭
- 关键词：慢病毒表达载体
- 大蒜素通过增强转化生长因子β1的表达抑制平滑肌细胞增殖
- 2013年
- 目的观察大蒜素是否能够通过增强转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达抑制血管平滑肌细胞的增殖。方法构建表达TGF-β1 siRNA的载体、转染平滑肌细胞,通过RT-PCR和Western Blot观察TGF-β1的表达情况;通过MTT比色法检测空白组、TGF-β1 siRNA、大蒜素10μg/ml+TGF-β1 siRNA组和大蒜素10μg/ml组在24 h,48 h和72 h内对平滑肌细胞增殖的影响;通过Western Blot检测各组在48 h后TGF-β1、激活蛋白-1(AP1)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况;通过对细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成的检测观察各组在作用48 h后血管壁氧化应激反应情况。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示TGF-β1 siRNA明显下调TGF-β1的表达;与其他组相比Allicin组细胞的生长显著降低(P<0.05),并且随时间的延长抑制作用明显加大,抑制率分别为25.13%、33.12%和43.05%;Western blot检测结果显示与其他组相比大蒜素组TGF-β1表达明显增强,而增殖相关基因AP1和PCNA的表达明显被抑制;作用48 h大蒜素组细胞内ROS为64,与其他组相比大蒜素组ROS生成明显降低。结论大蒜素可以通过增强TGF-β1的表达抑制平滑肌细胞增殖。
- 张凤香关宁李晨光孙大鹏罗俊生
- 关键词：转化生长因子-Β1大蒜素SIRNA血管平滑肌细胞
- 白藜芦醇对胆固醇酯水解酶的调节作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察白藜芦醇对胆固醇酯水解酶(carboxylic ester hydrolase,CEH)的调节作用及对动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 8周龄ApoE-/-小鼠分为空白对照组、CEH siRNA组、白藜芦醇+CEH siRNA组及白藜芦醇组,高脂饲料同时给予白藜芦醇和(或)CEH siRNA干预,喂养10周后检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;取主动脉,常规HE染色,观察主动脉形态学变化;通过qRT-PCR和Western Blot观察血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和补体因子H(complement factor H,CFH)表达情况。结果与对照组比较,白藜芦醇组LDL-C显著降低(P<0.01),CEH siRNA组LDL-C显著升高(P<0.01);与对照组比较,白藜芦醇组的内膜和中膜的厚度明显减轻(P<0.01),而CEH siRNA组内膜厚度明显增厚(P<0.01);qRT-PCR和Westernblot检测结果显示与对照组相比白藜芦醇组VCAM-1的表达被抑制,CFH的表达增强,而CEH siRNA组VCAM-1的表达明显被增强,CFH的表达明显被抑制。结论白藜芦醇可能通过对CEH表达的调节抑制LDL-C的含量,减少内膜厚度。
- 张凤香贺成业关宁李晨光罗俊生
- 关键词：白藜芦醇血管细胞黏附分子1补体因子H
- CTGF-siRNA转染对血管平滑肌细胞MMP-2、MMP-9表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的通过特异性下调结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,观察其对大鼠血管平滑肌细胞中金属蛋白-2(MMP-2)、金属蛋白-9(MMP-9)表达的影响。方法培养大鼠血管平滑肌细胞,免疫组化方法对细胞进行鉴定,用脂质体法将以CTGF第483号编码区为起始设计的小片段干扰核糖核酸(CTGF483-siRNA)对细胞进行转染,Western blot法检测细胞中结缔组织生长因子(CTGF)、MMP-2、MMP-9的表达。结果经免疫组化鉴定,细胞特异性染色呈阳性反应。转染组的CTGF表达明显降低,MMP-2、MMP-9的表达也受到抑制(P<0.05)。结论大鼠血管平滑肌细胞中下调CTGF的表达,可以抑制VSMC中MMP-2、MMP-9的表达,延缓动脉粥样硬化的发展过程,有望成为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点。
- 罗俊生冯旭关宁霍晓川张振兴郭闻师
- 关键词：结缔组织生长因子平滑肌细胞金属蛋白酶-2金属蛋白酶-9
- microRNA-125a-5p对巨噬细胞THP-1泡沫化过程的影响及其机制被引量：2
- 2014年
- 目的探讨microRNA-125a-5p(miR-125a-5p)对巨噬细胞THP-1泡沫化过程的影响及其机制。方法在Lipao2000的介导下,将miR-125a-5p的增强剂(mimics)/抑制剂(inhibition)(终浓度均为50 nmol/L)分别转染THP-1细胞24 h后,加入终浓度为100 mg/L的低密度脂蛋白(oxygenized-low density lipoprotein,ox-LDL),继续培养48 h,同时设空白对照组(未转染)及ox-LDL组(仅加入终浓度为100 mg/L的ox-LDL)。采用油红O染色和脂质染色的半定量分析法检测miR-125a-5p对THP-1细胞泡沫化的影响;Cholesterol/Cholesteryl Ester Quantitation Kit检测miR-125a-5p对THP-1细胞泡沫化过程中脂质蓄积的影响;Real-time PCR和Western blot法检测miR-125a-5p对THP-1细胞中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(acyl-coenzyme A:cholesterol acyltrasferase-1,ACAT-1)、ATP结合盒转运体A1(ATP binding casstte transporter A1,ABCA1)及细胞清道夫受体-A1(scavenger receptor-A1,SR-A1)mRNA及蛋白表达水平的影响。结果与ox-LDL组比较,ox-LDL+mimics组巨噬细胞泡沫化程度及脂质蓄积量均明显下降(P均<0.05),ox-LDL+inhibition组均明显增加(P均<0.05);ox-LDL+mimics组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P均<0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P均<0.05);ox-LDL+inhibition组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显增加(P均<0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P均<0.05)。结论 miR-125a-5p可通过调解ACAT-1、ABCA1和SR-A1的表达水平,减少巨噬细胞内脂质类的堆积,抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,从而发挥抗动脉粥样硬化(atheroscler-osis,As)的作用。
- 张凤香关宁李晨光司忠义
- 关键词：巨噬细胞泡沫细胞ATP结合盒转运体A1
- 羧酸酯酶1对大鼠颈动脉损伤后血管狭窄及炎性反应的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)对大鼠颈动脉内膜损伤后血管狭窄及炎症反应的影响。方法随机将大鼠分为3组,CES1组使用球囊导管制备颈总动脉损伤模型,在术后0 d、1 d、2 d尾经脉注射载有CES1的慢病毒载体促进CES1高表达;空载病毒组颈动脉损伤后注射空载病毒;空白对照组给予假手术处理。于术后第14天取材,HE染色后计算内膜增生情况,免疫组化和Western Blot检测TLR-4蛋白表达,实时荧光定量PCR测定TRL-4基因表达。结果HE染色表明CES1高表达能够明显抑制血管内膜损伤后的内膜增生,降低炎症反应,减少血管狭窄,免疫组化及实时荧光定量PCR和Western blot结果显示CES1高表达能够降低血管内膜中TLR-4的蛋白及基因表达。结论 CES1高表达能够下调损伤血管内TLR-4的表达从而抑制炎症反应,减轻血管损伤后狭窄。
- 甄为罗俊生霍晓川关宁王之赫邱建武
- 关键词：羧酸酯酶TLR-4血管损伤TLR-4
- 瑞舒伐他汀对TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD_(36)、SR-AⅠ表达的影响
- 2011年
- 目的观察瑞舒伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的TPH-1巨噬细胞清道夫受体CD36和SR-AⅠ表达的影响。方法体外培养TPH-1巨噬细胞,分三组置6孔培养板中。对照组为正常生长的TPH-1巨噬细胞;ox-LDL组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化;瑞舒伐他汀组加入100 mg/L的ox-LDL培养24 h,诱导巨噬细胞泡沫化,然后加入瑞舒伐他汀10μmol/L培养2 h。检测各组细胞内清道夫受体CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA。结果与对照组相比,ox-LDL组CD36、SR-AⅠ蛋白及其mRNA表达增加(P均<0.05);与ox-LDL组相比,瑞舒伐他汀组CD36、SR-AⅠ蛋白及mRNA表达明显降低(P均<0.05)。结论瑞舒伐他汀可降低ox-LDL诱导的TPH-1巨噬细胞中清道夫受体CD36、SR-AⅠ的表达。
- 苗野罗俊生冯旭关宁霍小川
- 关键词：瑞舒伐他汀氧化低密度脂蛋白泡沫细胞清道夫受体
- 人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究
- 2014年
- 目的探讨人胆固醇酯水解酶（hCEH）表达对泡沫细胞的影响及相关机制。方法利用含hCEH的慢病毒转染RAW264．7小鼠单核巨噬细胞，转染成功后巨噬细胞泡沫化。油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响；Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）、ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达情况。结果转染72h后，荧光细胞数量最多，接近50％，hCEH在细胞内大量表达；随着时间的延长，油红O染色阳性细胞数逐渐减少，细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降；Western blot显示在0～8h，ABCA1和ABCG1表达逐渐增加，8h达高峰，以后逐渐减少。结论hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达，并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性，从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积，抑制泡沫细胞形成。
- 关宁王超霍晓川顾立学罗俊生
- 关键词：游离胆固醇泡沫细胞
- MicroRNA-29a对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究MicroRNA-29 a对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能机制。方法通过MTT法和划痕法分别观察microRNA-29a对VSMCs活力和迁移能力的影响;通过Realtime-PCR和Western印迹检测分别观察micro-RNA-29 a对MMP-9、MMP-2和PCNA表达的影响。结果与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组VSMC体外增殖能力和迁移能力明显被抑制(P<0.05);Real-time-PCR和Western印迹检测发现与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组MMP-9、MMP-2和PCNA表达明显降低。结论 microRNA-29a可以影响VSMC增殖和迁移,其机制可能是通过调节MMP-9、MMP-2和PCNA的表达来得以实现的。
- 张凤香关宁李晨光孙大鹏罗俊生
- 关键词：平滑肌细胞迁移增殖
- miR-146a促进动脉粥样硬化斑块形成调控机制研究被引量：7
- 2014年
- 目的探讨miR-146a对动脉粥样硬化斑块的影响及其机制。方法利用miR-146a增强剂(miR-146a mimic)和miR-146a拮抗剂(miR-146a inhibitor)转染大鼠外周血单核巨噬细胞,转染成功后予巨噬细胞泡沫化。油红O染色和脂质染色的半定量分析miR-146a对细胞的脂质堆积情况的影响。Western blot检测胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)、ABCA1和ABCG1的表达情况。结果 Western blot检测显示,miR-146a mimic转染组的CEH表达明显降低,miR-146a inhibitor转染组的ABCA1和ABCG1表达量较对照组和miR-146a mimic转染组明显增多。油红O染色显示miR-146a mimic转染组、对照组和miR-146a inhibitor转染组的阳性细胞比例分别为82.1%±3.1%、73.2%±0.16%和16.25%±2.1%。结论miR-146a能够抑制大鼠外周血单核巨噬细胞细胞内CEH的表达,进而阻碍游离胆固醇的外流,最终导致动脉粥样硬化斑块的形成。
- 孟凡磊王超霍晓川关宁罗俊生
- 关键词：泡沫细胞ABCA1ABCG1微小RNA
