国家自然科学基金(39900149)
- 作品数：11 被引量：104H指数：6
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- 一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨缺损修复影响的形态学研究被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂S 甲基异硫脲 (SMT)对关节软骨修复的影响。方法 将 2 0只新西兰大白兔双侧股骨髁关节面造成全层软骨缺损。随机分为 2组 :对照组 10例 ,缺损软骨面用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填 ;给药组 10例 ,缺损软骨面用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填后 ,皮下注射SMT(5mg·kg-1·12h-1)。术后 8周、16周、1年处死动物 ,按组织形态学分级标准 ,双盲法行 16周和 1年修复组织评价 ;化学比色法检测修复组织NO释放量和NOS活性。结果 形态学观察证实 ,术后 8周、16周及 1年后 ,给药组软骨缺损修复在缺损区结构、细胞形态和基质染色等评分方面优于对照组 (P <0 0 5 )。术后 16周及 1年对照组NO释放量和NOS活性明显高于给药组 (P <0 0 5 )。结论 iNOS抑制剂SMT可减少NO释放 ,降低iNOS活性 ,提高软骨修复质量。
- 孙炜王吉兴刘晓霞冯岚秦立赟金大地
- 关键词：一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲软骨缺损
- 一氧化氮合酶抑制剂对软骨修复组织胶原表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨应用苦味酸-天狼猩红染色观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响及胶原定量表达的新方法。方法24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损,随机均分为对照组、骨形态发生蛋白(BMP)组和iNOS抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)组。术后16周及1年各组分别处死4只动物。应用苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量。结果图像分析结果经GLM-GeneralFactorialANOVA作均数的显著性检验,显示术后16周SMT组Ⅰ型胶原表达量为61.8%,明显少于BMP组的83.6%,和对照组的89.4%相比,差异有统计学意义(F=23.562);术后1年SMT组Ⅰ型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组88.5%和对照组94.6%,差异有统计学意义(F=36.747)。术后16周SMT组Ⅱ型胶原表达量为36.5%,明显多于BMP组12.6%和对照组8.2%,差异有统计学意义(F=68.326);术后1年SMT组Ⅱ型胶原30.7%的表达量多于BMP组的10.8%和对照组的4.5%,差异有统计学意义(F=83.876)。术后16周及1年后SMT组软骨厚度(2.08±0.6,1.85±0.56),与BMP组(1.56±0.38,0.67±0.31)和对照组(0.64±0.43,0.24±0.10)相比,差异有统计学意义(F值分别为57.836,45.087)。结论iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加Ⅱ型胶原表达和软骨厚度,对于维持软骨表型有积极意义。而苦味酸-天狼猩红染色是一种观察软骨修复组织中胶原表达的理想方法。
- 孙炜王吉兴金大地江建明刘安庆邱旻
- 关键词：软骨S-甲基异硫脲胶原
- 一氧化氮合酶抑制剂调控白细胞介素1β和脂多糖对关节软骨的损害被引量：7
- 2002年
- 目的 评价兔膝关节内注射白细胞介素 1β (IL 1β)和脂多糖 (LPS)混合液后 ,一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂S 甲基异硫脲 (SMT)调控关节软骨代谢的作用。方法 实验分为 3组 ,正常组 :不使用任何干预药物 ;对照组 :皮下注射生理盐水后 ,膝关节内给予白细胞介素 1(IL 1)和LPS ;实验组 :SMT持续皮下注射 72h后 ,关节内注射同浓度IL 1β和LPS。经 8h后通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察膝关节滑液、滑膜和软骨NO的释放量以及iNOS的活性 ;用原位杂交检测软骨iNOSmRNA的表达。 48h后 ,通过Na2 3 5SO4 掺入法检测关节软骨蛋白多糖的合成率。结果 IL 1β和LPS混合液可诱发iNOSmRNA显著表达 ,使兔膝关节滑液、滑膜和软骨释放大量NO和增加NOS活性。关节软骨是关节内NO的主要来源。SMT减少了NO释放 ,降低了NOS活性 ,抑制了iNOSmRNA表达 ,并且部分逆转了蛋白多糖的抑制作用。结论 iNOS抑制剂SMT对关节软骨的损伤具有部分保护作用 ;
- 王吉兴孙炜金大地
- 关键词：一氧化氮合酶酶抑制剂关节软骨白细胞介素1Β脂多糖类
- 一氧化氮合酶抑制剂长期作用对兔关节软骨缺损修复的影响被引量：13
- 2002年
- 目的 探讨长期给予诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂对关节软骨修复的影响。方法 2 4只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损。随机分为 (1)对照组 8只 ,关节软骨缺损不充填任何物质 ;(2 )骨形态发生蛋白 (BMP)组 8只 ,缺损应用BMP纤维蛋白凝胶复合物充填 ;(3)S 甲基异硫脲 (SMT)组 8只 ,缺损应用BMP纤维蛋白凝胶复合物充填 ,皮下注射iNOS抑制剂SMT(5mg·kg-1·12h-1) ,术后 1年处死动物。按组织形态学评分标准 ,作修复组织评价 ;化学比色法检测软骨修复组织一氧化氮 (NO)释放量和 (NOS)活性 ;天狼猩红和免疫组织化学染色检测胶原的分布 ;3 5S掺入法检测蛋白多糖的合成率 ;BrdU掺入法检测修复组织细胞活性。结果 形态学观察证实 ,1年后SMT组关节软骨缺损修复在边缘修复结合度、细胞形态和缺损区结构等评分方面均优于BMP组和对照组 (P <0 0 1) ;天狼猩红和免疫组织化学染色显示SMT组Ⅰ型胶原明显少于BMP组和对照组 ,Ⅱ型胶原多于BMP和对照组 ;3 5S检测显示SMT组蛋白多糖的合成率明显高于BMP组和对照组 (P <0 0 1) ;BrdU掺入显示SMT组术后 1年仍有增殖活力较强的细胞。结论 iNOS抑制剂SMT的应用能明显提高软骨修复的质量 。
- 孙炜王吉兴金大地刘晓霞
- 关键词：一氧化氮合酶酶抑制剂软骨缺损关节疾病NOS
- iNOS抑制剂对兔关节软骨修复组织胶原表达的影响被引量：7
- 2009年
- 目的观察诱导型一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响。方法24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损。随机抽签均分为对照组、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)组和一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲组(S-methylisothiourea,SMT)组。术后1年处死动物。应用苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量。应用免疫组织化学技术检测型胶原的表达和分布。结果图像分析显示,1年后SMT组型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组88.5%和对照组94.6%的表达量,型胶原30.7%的表达量明显多于BMP组10.8%和对照组4.5%的表达量。1年后SMT组软骨厚度(1.85±0.56)mm明显高于BMP组(0.67±0.31)mm和对照组(0.24±0.10)mm。SMT组缺损区型胶原含量明显高于BMP组和对照组。结论iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加型胶原表达和软骨厚度,对于维持软骨表型有积极意义。
- 孙炜王吉兴金大地刘晓霞刘安庆
- 关键词：一氧化氮酶抑制剂软骨S-甲基异硫脲胶原
- 一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复的影响被引量：7
- 2003年
- 目的观察一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea,SMT)对关节软骨修复的影响,探讨NO在软骨修复过程中的作用。方法36只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面制成全层软骨缺损,随机分为3组:(1)对照组12只,软骨缺损区旷置;(2)rhBMP组12只,缺损区充填rhBMP纤维蛋白凝胶复合物;(3)SMT组12只,缺损区充填rhBMP纤维蛋白凝胶复合物后,皮下注射iNOS抑制剂SMT。术后16周处死动物,按组织形态学分级标准,作修复组织质量评价;天狼猩红-苦味酸染色观察修复组织内Ⅰ、Ⅱ型胶原分布;化学比色法检测NO释放量和NOS活性;35S掺入法检测蛋白多糖合成率;RT-PCR检测iNOS和MMP9mRNA的表达情况。结果术后16周,形态学评分表明,SMT组和rhBMP组在缺损区充填程度方面与对照组差异无显著性意义(F=2.32,P >0.05),在边缘修复结合度、细胞形态和缺损区结构以及软骨下骨修复等方面均优于对照组(P<0.05),其中SMT组优于rhBMP组(P<0.05)。化学比色法显示SMT组NO释放量(24.97±3.95)μmol/L和NOS活性(1.17±0.31)U/ml显著低于rhBMP组和对照组(F=21.287,F=15.932,P<0.05)。SMT组Ⅰ型胶原明显少于rhBMP组和对照组,Ⅱ型胶原多于rhBMP和对照组。SMT组35S掺入量(48276±5791.58)cpm明显高于对照组(10285±867.5)
- 王吉兴孙炜金大地刘晓霞冯岚江建明
- 关键词：一氧化氮合酶抑制剂关节软骨INOSSMT
- 一氧化氮合酶抑制剂在实验性兔关节软骨修复中的作用被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂S 甲基异硫脲在实验性关节软骨修复中的作用。方法 2 0只新西兰兔随机分为对照组和实验组 ,在双侧股骨髁间滑车关节面作全层软骨缺损。对照组应用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填缺损 ;实验组同样充填缺损后 ,并皮下注射iNOS抑制剂S 甲基异硫脲。术后 16周处死动物 ,作修复组织质量评价 ;天狼猩红 苦味酸染色检测Ⅰ型和Ⅱ型胶原分布 ;反转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测iNOS和MMP 9mRNA基因表达 ,BrdU检测软骨细胞增生情况 ,并利用图像仪进行分析。结果 形态学观察证实 ,术后 16周 ,实验组关节软骨缺损修复在评分方面优于对照组 (P <0 0 5 ) ;天狼猩红 苦味酸染色显示实验组Ⅰ型胶原明显少于对照组 ,Ⅱ型胶原多于对照组 ;术后 16周RT PCR在对照组检测到iNOSmRNA和MMP 9mRNA表达 ,实验组仅检测到少量MMP 9mRNA表达。实验组BrdU阳性细胞 8 5个 /m2 明显多于对照组 3 2个 /m2 。结论 iNOS抑制剂S
- 孙炜王吉兴秦立赟刘晓霞卢晓金大地
- 关键词：一氧化氮合酶酶抑制剂S-甲基异硫脲
- Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶抑制剂对骨关节炎患者软骨基质金属蛋白酶表达的影响
- 2010年
- 目的应用Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶（NOS）抑制剂对骨关节炎（OA）患者软骨基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响，以及NOS抑制剂改善OA代谢的途径。方法研究经本院医学伦理委员会批准并获取患者的知情同意。无菌条件下，取15例重度OA需行关节置换术患者的关节软骨，置人体外培养系统。应用随机数目表法分为：①对照组：不加药物干预；②L—N^6-亚氨乙基-赖氨酸（L-NIL）组：加入NOS抑制剂L-NIL干预。培养72h后，通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察软骨一氧化氮（NO）的释放量和NOS的活性；应用Luminex液相蛋白芯片检测OA患者软骨中MMPs（MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-9，MMP-13）表达量的变化。数据采用配对t检验作均数的显著性检验。结果对照组软骨培养72h后，在其上清液中可检测到高浓度NO[（216±47）μmol／L]和高活性的NOS[（5．7±1．3）U／ml]，L—NIL组NO释放量[（55±20）μmol／L]较对照组明显减少，NOS活性[（1．7±0．7）U/ml]显著降低（P均〈0．01）。Luminex液相蛋白芯片显示对照组OA软骨中MMPs[（MMP-1（10．8±5．4）ng／ml，MMP-2（9．2±3．3）ng／ml，MMP-3（11．6±4．2）ng／ml，MMP-9（1．27±1．07）ng／ml，MMP-13（3．6±1．3）ng／ml]的表达异常，而L—NIL组OA软骨中MMPs表达量明显被抑制[分别为（3．6±1．8）ng／ml，（2．3±1．2）ng/ml，（3．6±1．4）ng／ml，（0．65±0．21）ng／ml，（1．8±0．5）．g／ml，P均〈0．05]。结论Luminex液相蛋白芯片检测系统表明NOS抑制剂通过减少NO的过度释放和降低NOS活性，进而抑制MMPs的过度表达来改善OA软骨的代谢。
- 孙炜刘安庆江建明王吉兴金大地
- 关键词：骨关节炎软骨液相蛋白芯片
- 软骨修复组织蛋白多糖代谢与一氧化氮合酶抑制剂的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:应用一氧化氮合酶抑制剂可改善骨性关节炎和风湿性关节炎软骨的代谢,作者前期的实验也证明一氧化氮合酶抑制剂能提高软骨修复组织的质量。实验进一步观察一氧化氮合酶抑制剂对软骨修复组织蛋白多糖代谢的影响。方法:实验于1999-06/2002-02在南方医科大学完成。①实验分组:取雄性新西兰兔24只,8月龄,体质量(2.5±0.2)kg。随机抽签法分为对照组、骨形态发生蛋白组和S-甲基异硫脲组,每组8只。②实验方法:将大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损,对照组:软骨缺损不充填任何物质;骨形态发生蛋白组:缺损用骨形态发生蛋白纤维蛋白凝胶复合物充填;S-甲基异硫脲组:缺损应用胶原复合骨形态发生蛋白充填,术后按5mg/(kg·12h)皮下注射S-甲基异硫脲。术后1年麻醉后处死动物。③实验评估:应用组织切片番红O-快绿染色和图像分析技术,按照染色百分率、平均灰度(平均染色程度)和染色厚度(软骨厚度)指标来检测糖胺聚糖含量;应用Na235SO4掺入法检测软骨修复组织蛋白多糖合成。结果:纳入新西兰兔24只,均进入结果分析。①术后1年,对照组几乎无红色染色区域;骨形态发生蛋白组可见到少量的不均匀红色区域;S-甲基异硫脲组可见到较多均匀一致的红色染色区域。②S-甲基异硫脲组软骨修复组织番红O染色百分率为89.28%,明显高于骨形态发生蛋白组36.54%和对照组13.4%,S-甲基异硫脲组修复组织番红O-快绿染色平均灰度值134.5,分别为骨形态发生蛋白组平均灰度值56.8的2.5倍,为对照组26.4的7倍。软骨平均厚度S-甲基异硫脲组1.75cm分别为骨形态发生蛋白组0.76cm和对照组0.25cm的2倍和6倍。③Na235SO4掺入法结果显示,S-甲基异硫脲组[35S]摄入量明显高于骨形态发生蛋白组和对照组(P<0.01)。结论:诱导型一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲的应用能明显增加软骨修复组织糖�
- 孙炜王吉兴金大地刘晓霞杨欣建
- 关键词：一氧化氮合酶酶抑制剂软骨蛋白多糖
- 一氧化氮合酶抑制剂对骨关节炎的潜在治疗意义被引量：59
- 2002年
- 目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-N6-亚氨乙基-赖氨酸(L-NIL)和S-甲基异硫脲(SMT)对骨性关节炎(OA)软骨和滑膜代谢的影响,为NOS抑制剂的临床应用提供理论依据。方法无菌条件下,取17例OA患者关节软骨和滑膜,置入体外培养系统,随机分为(1)对照组:不加药物干预;(2)L-NIL组:加入NOS抑制剂L-NIL干预;(3)SMT组:加入iNOS抑制剂SMT干预。培养72h后,通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察软骨NO的释放量以及NOS的活性;原位杂交检测软骨iNOSmRNA和MMP9mRNA的表达。培养10d后,化学比色法观察软骨蛋白多糖含量和羟脯氨酸释放量的变化。结果对照组软骨和滑膜培养72h后,在其上清液中均可检测到高浓度NO和高活性NOS。其中软骨NO释放量和NOS活性明显高于滑膜NO释放量和NOS活性(P<0.05);原位杂交也检测到软骨iNOSmRNA和MMP9mRNA的高表达。L-NIL组和SMT组软骨和滑膜NO释放量较对照组明显减少,NOS活性明显降低(P<0.01);而L-NIL组和SMT组NO释放量和NOS活性之间的差异无显著性意义(P>0.05)。同时,未检测到iNOSmRNA和MMP9mRNA表达。培养10d后,L-NIL和SMT组OA软骨蛋白多糖的含量比对照组明显增加(F=86.3,P<0.01),羟脯氨酸释放量比对照组显著减少(F=38.1,P<0.01)。结论NOS抑制剂L-NIL和SMT能抑制过量NO的释放。
- 金大地孙炜王吉兴史占军刘晓霞
- 关键词：软骨一氧化氮合酶抑制剂骨关节炎
