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氨基树脂固定化S-腺苷蛋氨酸（SAM）合成酶制备sAM及光亲和标记探针: S-腺苷蛋氨酸（SAM）是生物体内核酸和蛋白质甲基化的甲基供体,被广泛地用于肝炎、抑郁症以及关节炎等疾病的治疗。酵母发酵法是目前工业化生产SAM的主要途径,但存在底物转化率低、生产周期长、纯化工艺复杂等问题;体外酶促转化...; 牛卫宁曹珊珊羊梦林许乐钦传光; 关键词：氨基树脂重组大肠杆菌; 文献传递

人胱硫醚β-合酶及其截短型片段的表达、纯化和活性测定被引量：2: 2011年; 将人胱硫醚β-合酶(CBS)基因克隆至质粒pGEX-4T-1中,获得的重组质粒pGEX-4T-1-CBS转入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)菌株,构建了高效表达CBS的重组菌E.coli Rosetta(pGEX4T-1-CBS)。重组菌在0.1mmol/L的IPTG于30℃诱导16h,可溶性CBS表达量达到28mg/L培养基。将重组菌破碎后上清液经GSTrap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBS融合蛋白,在凝血酶柱上切割缓冲液中加入3%甘油和0.1%CHAPS可以有效抑制酶切后CBS聚沉,酶活性回收率为54.8%,蛋白质产率为15.2mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为143U/mg,终浓度为1mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使CBS单位酶活提高5.1倍,达到735U/mg。同时构建了表达CBS1-413(删除了CBS羧基端调控域138个氨基酸残基)的重组菌E.coli Rosetta(pETDuet-1-CBS1-413),经过一步HisTrap Fast Flow亲和层析,酶活性回收率为74.3%,蛋白质产率为12.8mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为965U/mg;还表达和纯化了胱硫醚β-裂解酶(CBL),并在此基础上建立了一种新的CBL偶联的CBS酶活性测定方法。; 牛卫宁羊梦林曹珊珊许乐钦传光; 关键词：表达纯化酶活性测定

海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究被引量：5: 2012年; 研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为:海藻酸钠质量分数3%、CaCl2质量分数4%、SAM合成酶加量(以每克海藻酸钠计)75mg、固定化时间30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42%。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69%的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7.5～9.0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84%以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82%的酶活力。; 尹春丽曹珊珊牛卫宁; 关键词：海藻酸钠固定化 S-腺苷甲硫氨酸合成酶生物催化

胱硫醚β-裂解酶的表达纯化及性质研究被引量：5: 2011年; 通过PCR从大肠杆菌(E.coliK12)基因组DNA中扩增出胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-lyase,CBL)基因,构建了能高效表达CBL的重组菌E.coliBL21(pETDuet-1-CBL)。重组菌在30℃、0.5 mmol.L-1IPTG存在条件下诱导9 h,可溶性CBL的表达量达18 mg.L-1,占到菌体可溶性总蛋白的23%。将重组菌超声破碎后上清液经His-Trap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBL,回收率为71%,纯度达到94%,纯化后的CBL单位酶活为134.6 U.mg-1。为防止CBL溶液冻融后发生聚沉,向纯化后的酶液中加入5%甘油,-20℃保存。重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃。重组酶的最适反应pH值为8.0,4℃下在pH值8.0的缓冲溶液中保温10 h酶稳定性最高。重组酶的KmL-cystathionine值为3.78 mmol.L-1,VmaxL-cystathionine值为0.928 mmol.L-1.h-1。本研究建立了基于CBL催化反应产物丙酮酸与2,4-二硝基苯肼显色原理测定CBL酶活性的新方法。; 曹珊珊牛卫宁羊梦林钦传光; 关键词：大肠杆菌表达纯化酶活性测定同型半胱氨酸

化学生物学中光敏分子微阵列的表面构建与应用被引量：1: 2013年; 分子微阵列是有机合成(特别是组合化学合成)方法应用于生物和医学研究而发展起来的高科技集成技术,通过把微电子、微加工技术和有机化学合成反应相结合,在固体基质(如硅片、玻片、瓷片等)表面构建微型的生物有机化学分子系统,以实现对细胞、蛋白质、核酸及其他生物组分进行快速、敏感、高效地处理.近年来,随着表面化学构建策略研究的不断深入和迅猛发展,分子微阵列技术的应用领域不断拓展,已从最初用于核酸分子的杂交测序延伸到基因组功能研究的各个方面.本文着重综述了光敏分子微阵列的表面化学构建策略研究及其在化学生物学分析中应用的最新进展,并展望了其发展的未来趋势.内容主要包括:小分子与多肽分子微阵列、蛋白质分子微阵列、核酸分子微阵列和糖分子微阵列等.; 钦传光张媛李琳尚晓娅牛卫宁徐春兰; 关键词：蛋白质芯片

海藻酸钠明胶协同固定S-腺苷甲硫氨酸合成酶被引量：5: 2013年; 以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。; 尹春丽许乐曹珊珊牛卫宁; 关键词：海藻酸钠明胶固定化 S-腺苷甲硫氨酸合成酶生物工程

壳聚糖固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶被引量：5: 2013年; 在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究.结果表明,最佳固定化条件为：壳聚糖质量浓度为2.5g/dL、戊二醛体积分数为0.8％、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件下所得固定化酶活性回收率为76％,固定化酶热稳定性较好,在55℃下保温5h仍保留53％的活力,而游离酶在50℃下保温5h则完全失活.固定化酶在碱性溶液环境的稳定性较高,在pH 7.5～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留80％以上.将固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应5批次后,酶活性仍保留64％.在底物三磷酸腺苷（ATP）浓度为30 mmol/L的条件下,固定化酶催化底物ATP的转化率超过95％.; 尹春丽陶贵荣许乐牛卫宁; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶壳聚糖固定化酶酶学性质

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陕西省科技攻关计划(2011K08-12)