国家科技支撑计划(2006BAI16B04)
- 作品数：7 被引量：64H指数：5
- 相关作者：李丹刘民胡蕴玉毕龙张莉更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院中国人民解放军总医院华南理工大学更多>>
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- 胶原/羟基磷灰石骨软骨一体化支架的生物学特性研究被引量：18
- 2010年
- [目的]对体外条件下胶原/羟基磷灰石一体化复合材料的生物学特性进行评价,探讨其作为骨软骨组织工程支架的可行性。[方法]以胶原和羟基磷灰石为原料,研制出由胶原逐层过渡到羟基磷灰石为主的一体化支架材料,其软骨层主要成分为胶原,骨层主要成分为羟基磷灰石。通过扫描电镜观察材料内部结构及孔径大小,液体位移法测定材料的孔隙率。将材料与兔骨髓基质细胞复合培养,MTT法测定细胞的生长曲线,扫描电镜观察细胞在材料上的生长粘附情况。[结果]胶原/羟基磷灰石一体化复合支架具有疏松多孔结构,其中软骨层孔径大小(90±15)μm,骨层孔径大小(120±20)μm,孔隙率(75±5.0)%。细胞在材料上生长良好。[结论]胶原/羟基磷灰石一体化复合材料具有适宜的孔隙结构和良好的生物相容性,可用作骨软骨组织工程支架材料。
- 杨波胡蕴玉毕龙李丹刘民李静王迎军吴刚
- 关键词：胶原羟基磷灰石骨软骨
- 胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶复合去抗原松质骨支架的制备及特征被引量：3
- 2010年
- [目的]探索胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原松质骨的骨软骨一体化材料的制备方法及其特征。[方法]将胶原、透明质酸钠及纤维蛋白胶混匀,利用纤维蛋白胶的粘合性与去抗原牛松质骨复合,成为骨软骨一体化的支架材料。通过大体观察和扫描电镜观察了解材料的孔径和交通情况;分离、增殖仔兔骨髓基质细胞（BMSCs）,取第3代BMSCs接种至支架材料复合培养,1、3、5、7和10 d后,行MTT检测并绘制细胞生长曲线;取第7 d标本,行扫描电镜观察。[结果]经交联和复合的一体化骨软骨支架材料具有良好的三维多孔结构,骨相孔径约300~500μm,软骨相孔径约80~120μm,两部分连接紧密;电镜观察见骨相及软骨相均有细胞黏附,细胞周围有基质存在;MTT检测显示,各时间点的OD值在实验组与对照组之间无统计学差异（P〉0.05）。[结论]胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原牛松质骨的一体化材料具有良好的空间结构和生物相容性,可用于修复骨软骨联合缺损的组织工程支架材料的研究。
- 穆继宏胡蕴玉毕龙王军李丹吕荣刘民金静
- 关键词：骨软骨胶原透明质酸钠纤维蛋白胶去抗原牛松质骨
- 脱细胞软骨基质三维支架的制备及特性研究被引量：7
- 2010年
- [目的]探索脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备及其应用于关节软骨组织工程的可行性。[方法]新鲜牛膝关节软骨粉碎后,梯度离心法获取软骨微粒,采用改进的Courtman改良法处理细胞后,再冷冻干燥,制备脱细胞软骨基质三维多孔支架。然后,采用京尼平对三维支架进行交联,再次冷冻干燥后,对支架材料进行大体、组织学染色及扫描电镜观察,分别测定支架的孔隙率、溶胀率、降解率。最后,分离培养兔骨髓基质细胞(BMSCs),采用MTT法检测BMSCs在支架材料上的生长、增殖情况,以柱形图表示。[结果]大体观察显示支架呈疏松多孔状,京尼平交联后整体呈深蓝色。组织学观察显示支架材料无软骨细胞碎片残留,HE染色、甲苯胺兰染色观察均未见软骨细胞残留。测量示支架孔隙率为90%,溶胀率为(1314±337)%,降解率2周为(13.69±7.3)%,4周为(25.99±8.9)%。MTT法显示细胞在支架上生长良好,与对照组DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P>0.05),提示支架无细胞毒性。扫描电镜显示支架内孔洞较明显,BMSCs通过细胞突起黏附于支架表面,黏附良好,能较好地在其上生长。[结论]经改进的Courtman改良法处理的软骨基质三维多孔支架脱细胞更彻底,保留了软骨的天然细胞外基质成分,天然交联剂京尼平交联后支架的细胞相容性好,抗降解性得到了提高,是一种适用于软骨组织工程的良好载体。
- 于龙胡蕴玉毕龙李丹刘民白建萍吴拮王军
- 关键词：组织工程软骨脱细胞京尼平
- 细胞因子表达谱在人脐带Wharton胶间质干细胞诱导分化成软骨细胞的变化被引量：5
- 2009年
- [目的]观察从人脐带Wharton’s胶中分离的间质干细胞(WMSC)诱导分化成软骨细胞时表达细胞因子及生长因子的异同,从而为WMSC诱导的软骨细胞用于组织工程的构建以及其在临床的应用打下基础。[方法]从人正常足月分娩的脐带中分离间质干细胞,在体外以条件培基诱导分化成软骨细胞,免疫组化法鉴定其特性,应用细胞因子蛋白芯片方法检测WMSC及其诱导分化的软骨细胞所表达细胞因子及生长因子,并取成年人正常关节软骨为对照。[结果]78种细胞因子和生长因子在WMSC及其诱导分化的软骨细胞均有表达,两者表达谱相同,而表达量则多少有不同。诱导分化后表达量增多的因子为:MIP-3α,ENA-78,VEGF,PDGF-BB,SCF,FGF-7,GCP-2及SDF-1。减少的因子为MIP-1βHGF,NT-4,IL-10及MIP-δ。其共同表达的具免疫抑制作用的因子对降低异体移植时的免疫排斥可能有一定作用,其共同表达的金属蛋白酶抑制因子对其移植于体内时可具有保护作用。而共同表达的肿瘤生长抑制因子则可减少对干细胞移植后瘤变的担心。[结论]从人脐带wharton’s胶中分离的间质干细胞(WMSC)诱导分化成软骨细胞时表达细胞因子及生长因子谱相同,是一种理想的可替代自身软骨细胞的新型种子细胞,用于构建工程软骨组织。
- 侯克东郭全义张莉袁玫眭翔汪爱媛许文静刘舒云卢世璧
- 关键词：干细胞软骨细胞细胞因子蛋白芯片法
- 关节软骨源性多孔支架复合自体软骨细胞修复兔关节软骨缺损的长期疗效观察被引量：8
- 2010年
- [目的]对关节软骨源性多孔支架复合自体软骨细胞复合体修复兔膝关节软骨缺损的长期效果进行观察和评价。[方法]实验动物新西兰大白兔共10只,分两组:(1)关节软骨源性支架对照组:缺损内置入关节软骨源性支架;(2)关节软骨源性支架复合细胞组:缺损内置入关节软骨源性支架-自体软骨细胞复合体。手术后15个月取材做大体摄像,甲醛固定、10%EDTA脱钙,石蜡切片,采用四种组织化学染色法(HE、奥新兰(AB)、甲苯胺兰(TO)、藩红花"O"染色)和Ⅱ型胶原免疫组化染色,观察修复后的兔关节软骨组织细胞形态特征。[结果]关节软骨源性支架对照组,大体观察关节表面有凹陷。石蜡切片HE染色见未修复缺损处为梭形细胞,纤维软骨,缺损处AB、甲苯胺兰、藩红花"O"染色为阴性,Ⅱ型胶原染色为阳性;关节软骨源性支架复合细胞组,大体见关节软骨表面修复平整、光滑。常规HE染色镜下见软骨全层修复良好,为透明软骨细胞,可见软骨陷窝潮线排列结构。细胞外基质特染:AB、甲苯胺兰、藩红花"O",Ⅱ型胶原特种染色均为阳性。[结论]组织学观察结果发现,关节软骨源性支架组为纤维软骨组织结构,未能完全修复膝关节软骨缺损;而关节软骨源性支架复合细胞组关节软骨缺损修复良好,未见退变,具有软骨组织的特征。
- 赵斌王玉黄靖香眭翔张莉田明王鑫汪爱媛许文静卢世璧
- 关键词：软骨细胞关节软骨缺损组织学评价
- 猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性研究被引量：9
- 2010年
- 目的评价猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性。方法取猪四肢关节软骨,分别制备脱细胞和未脱细胞软骨支架。在人软骨细胞中分别加入浓度为100%、50%、25%的脱细胞软骨支架浸提液[无血清DMEM培养液与支架表面积按1ml:(3～6)cm2比例混合,37℃静置72h],计算相对增殖率,判定其体外细胞毒性。0.9%NaCl与支架表面积按1ml:(3～6)cm2比例混合,37℃静置72h制备脱细胞软骨支架浸提液,分别用于全身急性毒性实验(小白鼠)、溶血实验、热原检测实验、皮内刺激实验(大白兔),分别观察其体内毒性、溶血程度、热原和刺激情况。在大白兔体内分别埋植脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架,观察炎症反应和细胞免疫情况。结果猪脱细胞软骨支架浸提液对细胞生长无抑制作用,无细胞毒性。注射支架浸提液后小白鼠一般情况良好,无全身急性毒性反应。支架浸提液溶血程度为1.3%,无溶血作用。支架浸提液无热原存在且原发刺激指数为0分,皮内刺激实验阴性。脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架相比免疫原性小,无炎症反应和淋巴细胞浸润。结论猪来源关节软骨脱细胞支架具有良好的生物相容性,将有可能成为理想的天然生物材料,具有良好的应用前景。
- 鹿亮郭全义杨启友袁玫张莉黄靖香赵斌彭江许文静卢世璧
- 关键词：生物相容性材料细胞外基质
- 交联温度对京尼平交联胶原/壳聚糖组织工程支架的影响被引量：14
- 2009年
- [目的]通过研究材料的孔径、交联度、溶胀率、降解率、细胞毒性及组织相容性的变化,探讨交联温度对京尼平交联胶原/壳聚糖支架的影响。[方法]采用冷冻干燥法制备胶原/壳聚糖复合多孔支架,分别于4℃、20℃、36℃条件下,在0.5%京尼平水溶液中交联24h。以未交联的胶原/壳聚糖复合多孔支架作为对照,评价所得支架的孔径、交联度、溶胀率、降解率、细胞毒性及组织相容性特点。[结果]随交联温度升高,支架的交联度明显增大,溶胀率和降解率逐渐减小。4℃组支架交联度47.88%±6.4%,溶胀率为721%±46%,4周后降解3.95%±6.4%;20℃组支架交联度67.69%±3.6%,溶胀率为662%±72%,4周降解0.91%±5.9%;36℃组支架交联度70.32%±5.7%,溶胀率为635%±27%,4周降解0.66%±7.3%,三组上述观察指标均优于未交联组(P/0.01)。[结论]京尼平交联可以显著降低胶原/壳聚糖支架的降解率和溶胀率,且对支架结构和生物相容性无明显影响。交联温度增加可以提高支架的交联度和抗降解能力,较快获得具有良好生物相容性和降解率的组织工程支架。
- 曹峥胡蕴玉潘纬敏白雪东毕龙李丹杨小彬刘民
- 关键词：壳聚糖胶原京尼平
