新疆生产建设兵团博士基金(2011BB016)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：王业忠赵冬朱文学李晓天唐仕军更多>>
- 相关机构：石河子大学医学院第一附属医院石河子大学中国医科大学更多>>
- 发文基金：新疆生产建设兵团博士基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种简便的皮层神经元原代培养方法的建立及其培养结果分析被引量：3
- 2015年
- 目的建立一种简便的皮层神经元原代培养方法,并鉴定其培养效果。方法取出生24 h内的SD大鼠大脑皮层组织,采用胰酶消化法获取神经元细胞悬液,用10%FBS+DMEM高糖培养基接种在经多聚赖氨酸包被的培养板中,4 h后全量换用Neurobasal+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺培养液。培养后采用倒置相差显微镜观察神经元形态变化,连续观察8天。神经元培养7~8天进行免疫荧光染色,于激光共聚焦显微镜下对神经元进行鉴定,计算神经元密度和纯度。结果皮层神经元接种时体积小,透亮,呈圆形,单个散在分布。接种后有少量细胞开始贴壁,2 h左右贴壁较多,少量细胞伸出短小的突起;4 h左右已基本贴壁,大量细胞伸出突起,周围光晕明显;培养3天时神经元突起明显伸长,相互交织,细胞透亮,立体感强,呈圆形、椭圆形、梭形;培养5~6天时神经元体积增大,突起交织成网状;培养7~8天时,神经元细胞体饱满,细胞质透亮,细胞核大而明显,细胞体周围折光性强,立体感好,突起交织成致密的网络结构。经免疫荧光染色后鉴定,分离培养的是神经元,密度1.5×106个/m L,纯度>90%。结论成功建立了一种操作简便的皮层神经元培养方法,该方法培养的神经元纯度高、密度大,可为今后的相关学科研究提供良好的细胞模型。
- 唐仕军赵冬朱立仓李晓天朱文学杨鹏杨鹏
- 关键词：皮层神经元原代培养B27细胞模型新生大鼠
- 蛛网膜下腔出血后Caspase-12表达及海马细胞凋亡的研究被引量：6
- 2012年
- 目的检测内质网特异性因子Caspase-12及海马区神经元细胞凋亡的表达，分析内质网应激在自发性蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑损伤中的作用。方法54只大鼠分为手术组、假手术组、空白对照组；手术组、假手术组又分为3h、12h、24h、48h亚组。利用lit—PCR检测Caspase-12的表达，TUNEL测大鼠海马区神经元细胞凋亡，电镜及HE染色光镜下观察大鼠海马区神经元细胞形态学改变。结果Caspase-12在SAH后3h开始增高，24h达到高峰，48h开始降低，但48h时较假手术组、空白对照组仍高（P〈0．01），各组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。大鼠海马区神经元凋亡阳性细胞在3h时开始出现，但与假手术组、空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05），凋亡阳性细胞数在24h达高峰，48h开始降低，但较假手术组、空白对照组仍高（P〈0．01）。各组间比较差异有统计学意义。手术组大鼠海马区神经元细胞在光镜下可见明显核固缩。各组间Caspase-12的表达量与细胞凋亡阳性数量呈正相关（r=0．753，P〈0．01）。结论内质网应激在SAH后早期脑损伤中发挥重要作用。
- 姚俊岭赵冬戴晶刘祺许晖姬云翔赵瑾王业忠
- 关键词：蛛网膜下腔出血脑损伤细胞凋亡内质网CASPASE-12
- 氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮(NO)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响。方法 2014年11月—2015年7月选取新生24 h内SD大鼠12只,分离及培养大鼠皮质神经元,取原代培养8 d的皮质神经元,分为3组:正常对照组、氧-糖剥夺组、氨基胍组。正常对照组皮质神经元采用Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养,氧-糖剥夺组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后,换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养;氨基胍组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后,换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养的同时加入终浓度为10 mmol/L的氨基胍溶液。各组培养2、6、12 h,采用硝酸还原法检测细胞上清液中NO表达水平,采用Western blotting法检测Caspase-3表达水平。结果各组培养2、6、12 h时细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中氧-糖剥夺组、氨基胍组不同时间点细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平较正常对照组升高(P<0.05);氨基胍组不同时间点细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平较氧-糖剥夺组降低(P<0.05)。结论氨基胍可抑制氧-糖剥夺大鼠皮质神经元NO及神经元凋亡相关基因Caspase-3表达水平,从而抑制皮质神经元的凋亡,对皮质神经元具有保护作用。
- 唐仕军赵冬朱立仓李晓天朱文学杨鹏王业忠
- 关键词：神经元一氧化氮半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3氨基胍
- 氧-糖剥夺致皮层神经元一氧化氮的变化及对Caspase-3的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察氧-糖剥夺致皮层神经元一氧化氮(NO)的变化及对Caspase-3的影响。方法体外原代培养神经元,选取培养7d的神经元随机分为3组:正常对照组(A组),氧-糖剥夺损伤组(B组),细胞损伤+L-N-硝基精氨酸甲脂(L-NAME)干预组(C组)。采用硝酸还原法检测各组培养液中NO的含量,Western blot检测Caspase-3、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)蛋白表达,半定量RT-PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果 B组培养液中NO的含量为(1.77±0.17)μmoL/L,与A组(0.93±0.15)μmoL/L和C组(0.99±0.10)μmol/L比较差异有统计学意义(均P<0.05);同时,B组的Caspase-3蛋白和mRNA表达明显高于A组和C组,B组的NSE蛋白表达明显低于A组和C组。结论氧-糖剥夺可导致皮层神经元NO产生过量,并造成神经元的损伤;L-NAME能减少NO的产生,从而减弱氧-糖剥夺导致皮层神经元损伤。
- 王西冉杨传豪赵冬王业忠
- 关键词：一氧化氮神经元特异性烯醇化酶CASPASE-3
