重庆市科学技术委员会院士基金(2007AB5022)
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王军平王艾平粟永萍程天民邹仲敏更多>>
- 相关机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市科学技术委员会院士基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性。方法PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列,应用基因重组方法构建表达质粒,电击转化酵母菌株GS115,应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析重组mHD5(rmHD5)表达量,并采用Westernblot鉴定。选用琼脂扩散法检测rmHD5的抑菌活性。结果构建了pPIC9K-mHD5酵母表达质粒。筛选得到3株His+/Mut+表型,且耐受8mg/mlG418的多拷贝转化酵母菌株,成功获得表达量约120mg/L的发酵上清。rmHD5对大肠杆菌(EC25922)和金黄色葡萄球菌(SA25923)2种标准菌株均具有明显的抑菌活性。结论防御素基因可以在毕赤酵母中实现分泌型离表达,此策略可能是抗菌肽工业化开发的有效途径之一。
- 王艾平粟永萍申明强王崧程天民王军平
- 关键词：防御素酵母表达生物活性
- 人α防御素5在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究被引量：6
- 2008年
- 采用PCR扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mHD-5)密码子序列,并将其克隆至pMAL-p2x质粒,构建pMAL-p2x-mHD-5表达载体,转化大肠杆菌BL_(21)(DE_3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mHD-5(rmHD-5)多肽。采用浊度法测定rmHD-5对细菌的抑制活性。通过优化表达条件,获得约30%的可溶性目的蛋白表达量,并成功纯化rmHD-5。rmHD-5对大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)具有较强的抑制活性,在终浓度为62.5μg/mL时,90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略,在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。
- 王艾平粟永萍程天民邹仲敏王军平
- 关键词：防御素原核表达纯化
- 人防御素的抗病毒免疫作用及其研究进展被引量：3
- 2010年
- 人防御素是由中性粒细胞、小肠Paneth细胞以及粘膜上皮细胞等产生的一类内源性阳离子多肽。最早因其具有广谱抗菌作用而被广泛关注。近年来研究发现,防御素对病毒也具有显著抑制作用,其抗病毒效应表现在多个方面。除了能够直接作用于病毒外,此类多肽分子还可以通过介导免疫反应来间接发挥抗病毒作用。本文就人防御素的抗病毒作用机理及其研究进展进行了综述,期望能够加强人们对防御素生物学功能的认识,并为开发相关抗病毒药物提供参考。
- 耿放王军平
- 关键词：抗病毒作用免疫调节
- 防御素基因工程制备研究进展被引量：6
- 2008年
- 本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,将来的研究方向和开发前景。
- 王艾平王军平粟永萍
- 关键词：防御素纯化工艺生物活性
