国家重点基础研究发展计划(2006CB504402)
- 作品数：14 被引量：78H指数：6
- 相关作者：祝令伟冯书章刘军王全凯于录更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪链球菌2型荚膜多糖cps2J基因的克隆与原核表达被引量：4
- 2009年
- 利用PCR方法从猪链球菌2型(SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体,经酶切与表达质粒pMAL-p2x构建重组表达质粒pMALp2x-cps2J,转化至宿主菌TB1中诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了约80ku的可溶性目的蛋白MBP-cps2J,约占菌体蛋白总量的13.5%。表达蛋白用Amylose树脂层析柱纯化,将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔制备抗血清,经ELISA和协同凝集试验检测,其与SS2呈特异性阳性反应。
- 刘燕刘军冯书章郭学军孙洋祝令伟
- 关键词：猪链球菌2型协同凝集试验
- 抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因被引量：6
- 2009年
- 以猪链球菌2型四川分离强毒株458#为检测子,国际参考无毒菌株1330#为驱动子,用抑制性消减杂交方法寻找其基因组水平的差异。采用3种不同的限制性内切酶分别酶切458#与1330#基因组获得3套酶切片段,经消减杂交后构建猪链球菌2型强毒株458#特异DNA的差异文库,并对差异序列进行比较分析。结果表明,试验获得了3套差异文库共计42个特异性差异片段,所有差异片段均与已发表的猪链球菌2型05ZYH33株全基因组序列高度同源。构建了具有代表性的猪链球菌2型强毒株与国际无毒参考菌株基因组差异DNA文库,差异片段通过Blast比对,部分差异片段与已知功能基因如转座子、耐药基因、I型限制酶修饰系统、表面蛋白和毒力相关蛋白等有同源性,尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或假定蛋白,其中可能包括与猪链球菌2型毒力相关的基因,为进一步分析猪链球菌2型可能的毒力相关基因奠定了基础。
- 齐翀刘军祝令伟王文东孟福强冯书章
- 关键词：猪链球菌2型抑制性消减杂交毒力相关基因
- 猪链球菌2型新基因岛SSGI4的发现被引量：5
- 2009年
- 目的通过比较猪链球菌2型强毒株与弱毒株和无毒株的基因组差异,发现新的基因岛,探讨猪链球菌的基因群水平转移及其与致病性之间的关系。方法在已知猪链球菌2型强毒株全基因组序列和对可能基因岛的分析基础上,通过DNA测序和生物信息学分析,对基因岛的结构进行分析鉴定,并预测其功能。结果发现了一个只存在于猪链球菌2型中国强毒株,而在弱毒株和无毒株中整体缺失的新基因岛,命名为SSGI4。基因岛全长11 269bp,G+C含量(36.8%)明显低于基因组总G+C含量(41.1%),基因岛两端均有10bp的正向重复序列,并且末端携带有噬菌体整合酶基因,显示很可能是通过溶原性噬菌体整合入基因组。基因岛包含11个编码基因,部分基因推测为可能的膜表面蛋白基因或氨基酸结合蛋白基因。结论新发现的基因岛SSGI4具有致病性基因岛的各项典型特征,可能与猪链球菌2型强毒株的致病性有关,具有深入研究的价值。
- 祝令伟蔡雪辉刘军齐翀孙洋田园纪雪李鹏冯书章
- 关键词：猪链球菌2型
- 猪链球菌2型新毒力相关基因lin0523的克隆表达及生物信息学分析
- 2011年
- lin0523是新鉴定出的猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,SS2)毒力相关基因。利用PCR方法扩增SS2野生强毒菌株ZY458的lin0523基因,并克隆到pMD18-T载体上。经限制性内切酶EcoRⅠ、PstⅠ双酶切后,将目的基因与大肠杆菌表达载体pMAL-p2x连接,构建重组表达载体pMAL-p2x::lin0523,并将其转化至宿主菌TB1中。经IPTG诱导后,表达出约为90 000的重组蛋白MBP-lin0523,目的蛋白主要以包涵体形式存在。应用同源性比对、信号肽预测、跨膜区预测及蛋白亚细胞定位等生物信息学方法对目的蛋白进行分析表明,lin0523蛋白与SS2 05ZYH33的限制性核酸内切酶S亚基100%同源,可能含有信号肽并存在于细胞外;这些结果表明lin0523蛋白可能是一种分泌性蛋白。
- 何永聚刘军李鹏孙洋祝令伟周博王文东冯书章
- 关键词：猪链球菌2型克隆表达
- 应用Alamar Blue法与试管法测定α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核杆菌活性被引量：3
- 2010年
- 选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。
- 赵全民于录邓旭明王春雨曾凡丽王全凯
- 关键词：结核分枝杆菌最低抑菌浓度活性
- MABA法与二倍稀释法测定齐墩果酸体外抗结核菌活性被引量：10
- 2010年
- 为筛选有开发价值的抗结核中草药,通过儿拉姆兰微板分析法(MABA)与二倍稀释法分别测定齐墩果酸对结核分支杆菌H37Rv(ATCC 27294)和H37Ra(ATCC 25177)的体外抗菌活性,测定最低抑菌浓度(MIC),同时对两种方法的检测结果进行了比较;以噻唑蓝(MTT)法进行了齐墩果酸对Balb/c小鼠的脾细胞和肝细胞的细胞毒性试验。结果表明,齐墩果酸对这两种结核菌的最低抑菌浓度均为16μg/mL,对Balb/c小鼠的脾细胞和肝细胞均无毒性。MABA法与试管法相比较,完全符合率为90%(9/10),具有较好的一致性。本研究结果为齐墩果酸作为抗结核菌药物的开发及其抗菌机制研究奠定了一定的基础。
- 曾范利于录葛发金晶王全凯
- 关键词：齐墩果酸结核分支杆菌最低抑菌浓度抗菌活性细胞毒性
- 猪链球菌2型新毒力相关基因lin0523的功能研究
- 本研究利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458△lin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染实验表明...
- 李鹏刘军祝令伟齐翀周博孙洋纪雪刘爽冯书章
- 关键词：猪链球菌2型毒力因子
- 文献传递
- 猪链球菌2型感染家兔模型的研究
- 研究建立猪链球菌2型感染的家兔模型,以评价猪链球菌2型的毒力,探索猪链球菌病的发病机制。利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458撑通过腹腔注射接种大耳自家兔,观察其临床症状和病理变化,对猪链球菌2型感染家兔的动物模型做了系...
- 尹铁勇冯书章刘军祝令伟夏志平高丰
- 关键词：猪链球菌2型动物模型
- 文献传递
- 猪链球菌2型新毒力相关基因lin缺失菌株的构建被引量：6
- 2010年
- 利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458Δlin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染试验表明,接种ZY458菌株的家兔体质量下降,出现明显的临床症状,5只家兔4d内全部死亡;而458Δlin感染组家兔生长正常,未出现任何明显临床症状。结果表明,lin基因是猪链球菌2型新发现的一种毒力相关基因,在猪链球菌2型的致病过程中具有重要作用。
- 李鹏刘军祝令伟齐翀周博孙洋纪雪刘爽王文东冯书章
- 关键词：猪链球菌2型毒力因子
- 猪链球菌2型新毒力相关基因lin0523的功能研究
- 本研究利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458Δlin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染实验表明...
- 李鹏刘军祝令伟齐翀周博孙洋纪雪刘爽冯书章
- 关键词：猪链球菌2型毒力因子
- 文献传递
