河北省自然科学基金(396062)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：河北大学中国科学院滨州职业学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省生物工程重点学科资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人Jo-1自身抗原的克隆、原核表达及抗原特异性鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:旨在获得高纯人Jo-1抗原(即组氨酰-tRNA合成酶)。方法:利用RT-PCR从人胎盘总RNA中获得Jo-1的编码基因,并分别用IMPACT-CN和pMAL系统的pTYB11、pMAL-c质粒,构建了表达载体,转化至大肠杆菌ER2566、BL21。结果:经筛选与鉴定,得到阳性重组子诱导表达后均获得Jo-1融合蛋白。Western blot显示,这两种融合蛋白都具有Jo-1抗原特异性,即仅与含Jo-1抗体的多肌炎和皮肌炎自身免疫病患者血清反应,而与正常人以及188例含有其他自身抗体(分别为RNP阳性、Sm阳性、Ro/La阳性和RNP/Ro阳性)的患者血清均为阴性反应。结论:在两种表达载体中,pMAL-c-Jo-1的表达量超过菌体蛋白的50%,而且以可溶性形式存在,有利于分离纯化,为临床检测创造了条件。
- 赵晓瑜毕智丽吴亦红辛海涛
- 关键词：抗原特异性
- 重组人Jo-1抗原的表达、纯化以及免疫特异性检测
- 2006年
- 目的表达纯化重组人Jo-1抗原,免疫印迹和ELISA检测其免疫特异性。方法IPTG诱导含有Jo-1基因的重组菌,获得高表达的可溶性融合蛋白(MBP-Jo-1),亲和层析纯化该表达蛋白,免疫印迹和ELISA分别检测其抗原性并与生化提取的Jo-1抗原比对。结果表达的重组Jo-1蛋白具有Jo-1抗原的特异性。结论重组Jo-1蛋白与天然Jo- 1抗原具有相同的免疫原性和免疫原特异性。
- 辛海涛王卫宁张琳刘国振
- 关键词：融合蛋白ELISA
- 人R_O蛋白(60kD)编码序列的PCR产物在E.coli中的克隆与表达
- 2000年
- 通过聚合酶链反应 ( PCR)自人脾 c DNA扩增 RO 蛋白 ( 60 k D)编码 DNA片段 .将该片段定向插入麦芽糖结合蛋白 ( MBP)融合系统的 p MALTM- c载体中并转化 E.coli ( DH5α) ,通过酶联免疫印迹 ( IBT)筛选出具有 RO 抗原性的阳性克隆 .绝大部分阳性克隆表达完整的 RO 融合蛋白 ( 1 0 0k D) .但在传代过程中表达水平很快降低 ;少数阳性克隆虽然表达非完整 RO 融合蛋白 (分子量 <80k D) ,但表达水平却高而且稳定 .同时保留了很强的 RO 抗原性 .产生非完整融合蛋白的一个原因是 ,PCR碱基错配引起 RO 编码 DNA的序列缺失 ;
- 赵晓瑜刘建荣静天玉王会文王彦芳王锡民
- 关键词：PCR克隆免疫性疾病
- Jo-1蛋白在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：1
- 2006年
- 构建在E.coli中表达人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)的质粒。用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,将此片段定向克隆到麦芽糖融合蛋白表达载体pMAL-c中,诱导表达获得Jo-1的可溶性融合蛋白,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验表明,表达的融合蛋白能与含有抗Jo-1抗体的病人血清发生特异反应,重组融合蛋白具有Jo-1蛋白的免疫原性和免疫特异性。
- 辛海涛赵晓瑜刘国振王卫宁侯颖娜张峰
- 关键词：PCR克隆自身抗原
