山东省科技攻关计划(2005GG3202068)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：于红刘宗涛庞峰吕锐张文卿更多>>
- 相关机构：青岛大学青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组蓝藻抗病毒蛋白N的纯化复性及其抗单纯疱疹病毒1型活性的研究被引量：1
- 2008年
- 目的纯化复性重组蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin-N,CV-N)并研究其抗病毒活性。方法将诱导表达的重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化并以稀释法复性,在Vero细胞中进行CV-N抗单纯疱疹病毒1型(herpes si mplex virus type1,HSV-1)活性的研究。通过观察细胞病变效应(CPE)及MTT比色法检测细胞活性,以判断CV-N的抗病毒效应。结果重组CV-N经Ni Sepharose柱纯化后,SDS-PAGE显示11KDa处清晰的单一条带,复性的重组CV-N对Vero细胞毒性极低,对HSV-1无直接灭活作用,CV-N对病毒的吸附及生物合成均有抑制作用,且强于阳性对照药物阿昔洛韦。结论经纯化复性的CV-N具有良好的抗HSV-1活性,值得进一步研究和开发。
- 刘宗涛于红尹延梅李丹张文卿
- 关键词：纯化复性单纯疱疹病毒1型抗病毒
- 重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用。方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果。结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用。结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物。
- 吕锐于红阎博民
- 关键词：柯萨奇病毒抗病毒作用
- 蓝藻抗病毒蛋白N的研究进展被引量：2
- 2006年
- 蓝藻抗病毒蛋白N(Cyanovirin-N)简称CV-N,相对分子质量11kD,含有101个氨基酸残基,主要是由β-叠片结构形成的链状蛋白,其中有2个内部二硫键。通过基因重组表达纯化的产物,其结构和活性均与天然CV-N相同。CV-N与人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋白120(gp120)具有高度亲和性,并能够阻断由包膜蛋白介导的细胞融合过程从而阻止病毒的扩散。CV-N不仅能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒1(HIV-1),2(HIV-2),猴免疫缺陷病毒(SIV),而且对单纯疱疹病毒、流行性感冒病毒及其他一些包膜病毒也有抑制作用。CV-N的若干特性使其有可能成为一种非常有价值的新型抗病毒药物。
- 庞峰于红
- 关键词：基因重组抗病毒活性
- 重组蓝藻抗病毒蛋白N抗单纯疱疹病毒2型作用的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)并探讨其抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的作用。方法以不同剂量的CV-N分别作用于HSV-2病毒复制的各个环节,通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖。判断CV-N的抗病毒效果。结果重组CV-N对Vero细胞毒性较低,对HSV-2无直接灭活作用,可干扰病毒向宿主细胞的吸附,其抗病毒生物合成的活性优于阳性对照药物阿昔洛韦。结论重组CV-N在体外具有良好的抗HSV-2病毒作用。
- 安立冰刘宗涛于红
- 关键词：单纯疱疹病毒2型抗病毒
- 蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性被引量：8
- 2007年
- 目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。
- 吕锐于红刘宗涛庞峰张文卿
- 关键词：基因原核表达蛋白纯化复性
