国家自然科学基金(30901608)
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 相关作者：徐祥波王介东贺斌张树成陈西华更多>>
- 相关机构：国家人口计生委科学技术研究所中国医学科学院北京协和医学院遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 孕酮回植时间对小鼠月经样模型中子宫内膜基质细胞凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨在小鼠月经样模型中孕酮回植对子宫内膜基质细胞凋亡的影响。方法:在月经模型小鼠月经发生关键时期的前后,即孕酮撤退后的12h和16h回植孕酮,24h收集小鼠子宫角,TUNEL法原位检测小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果:孕酮撤退后12h回植孕酮,小鼠子宫内膜中发生凋亡的基质细胞数远低于16h回植组和对照组;而16h回植孕酮则子宫内膜基质细胞的凋亡仅仅稍低于对照组。凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,12h回植组明显高于16h回植组和对照组(P<0.01),而后两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。凋亡促进蛋白Bax和Caspase-3的表达,12h回植组均低于16h回植组和对照组(P均<0.01),而后两组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:在月经发生关键时期之前,即孕酮撤退后12h回植孕酮可能通过上调Bcl-2/Bax比例而阻断Caspase-3的蛋白表达,从而有效抑制小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡,阻断月经发生的进程,而16h回植则不能阻断小鼠月经的发生。
- 王乾兴郎楠贺斌徐祥波王介东
- 关键词：小鼠凋亡凋亡基因
- 低氧和低氧诱导因子在月经样小鼠模型中对子宫内膜崩解的作用被引量：1
- 2021年
- 目的探究低氧和低氧诱导因子(HIF1A)在小鼠子宫内膜崩解过程中的表达及作用。方法构建药理性小鼠月经样模型。根据月经样小鼠给药处理方式不同分为4组:(1)PW^(-)CoCl_(2)^(-)组(n=5):孕酮(P_(4))维持,不添加二氯化钴(CoCl_(2));(2)PW^(-)CoCl_(2)^(+)组(n=6):P_(4)维持,CoCl_(2)给药;(3)PW^(+)CoCl_(2)^(-)组(n=5):P_(4)撤退,不添加CoCl_(2);(4)PW^(+)CoCl_(2)^(+)组(n=6):P4撤退,CoCl_(2)给药。P4撤退后0 h、8 h、12 h、16 h、24 h处死小鼠并收集子宫组织,通过低氧探针和免疫组化检测P4撤退后不同时间点小鼠子宫低氧定位和HIF1A蛋白的表达情况;P4撤退后24 h,观察各组小鼠的子宫大体,HE染色法观察各组小鼠子宫组织形态,免疫组化染色法观察PW^(+)CoCl_(2)^(-)组和PW^(+)CoCl_(2)^(+)组小鼠子宫低氧定位和HIF1A蛋白的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测P_(4)撤退后24 h子宫组织细胞质和细胞核中HIF1A的表达情况。结果免疫组化染色显示,小鼠子宫组织在P4撤退后低氧持续时间为0~24 h,P4撤退12 h和16 h时小鼠子宫低氧探针染色面积占比和HIF1A表达水平均显著高于P4撤退0 h时(P<0.05),低氧探针和HIF1A表达位置有很强的相关性。子宫大体和组织形态学观察显示,P4撤退后24 h,PW^(-)CoCl_(2)^(-)组和PW^(-)CoCl_(2)^(+)组小鼠子宫内膜保持完整,PW^(+)CoCl_(2)^(-)组和PW^(+)CoCl_(2)^(+)组子宫崩解出血。免疫组化染色结果显示,PW^(+)CoCl_(2)^(+)组子宫内膜的低氧染色面积占比和HIF1A核染色细胞百分比均显著高于PW^(+)CoCl_(2)^(-)组(P<0.05)。Western blot结果显示,P4撤退后24 h,PW^(-)CoCl_(2)^(-)组子宫组织细胞质HIF1A表达较高,在细胞核中几乎检测不到;与PW^(-)CoCl_(2)^(-)组相比,PW^(-)CoCl_(2)^(+)组细胞质HIF1A的表达显著降低而在细胞核中显著升高(P<0.05),PW^(+)CoCl_(2)^(-)组细胞质HIF1A的表达无显著变化而在细胞核中显著升高(P<0.05),PW^(+)CoCl_(2)^(+)组细胞质、细胞核HIF1A的�
- 梁敏陈西华王树芳张欣张欣武斌武斌张博男南楠徐祥波
- 关键词：低氧诱导因子低氧
- 肿瘤坏死因子在小鼠药理性孕酮撤退月经样模型中的定位和表达
- 2013年
- 目的在药理性撤退小鼠月经样模型中,观察孕酮撤退后,肿瘤坏死因子(TNF-α)的定位和表达情况。方法卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮即通过拮抗孕酮受体的方法(药理性撤退),导致孕酮撤退,并用免疫组化的方法观察米非司酮处理的不同时相,TNF-α在小鼠子宫内膜的定位;用实时PCR的方法观察TNF-α表达情况。结果免疫组化结果显示米非司酮处理后0～8 h,TNF-α主要存在于腔周围的血管内皮细胞;12～16 h,主要存在于内流的白细胞;24～48 h,主要存在于崩解组织边缘的间质细胞区域和修复好腺上皮细胞周围的间质细胞。实时PCR结果显示TNF-αmRNA在孕酮撤退后24 h内都有表达,并且TNF-α表达量逐渐增高,在12 h、16 h达到峰值。结论在此小鼠月经样模型中,米非司酮处理即孕酮撤退后TNF-α在此模型子宫中定位呈区域性分布,并诱导TNF-α表达升高,可能参与了子宫内膜的崩解。
- 李云峰陈西华徐丙元刘建兵张树成贺斌徐祥波王介东
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α
- 小鼠药理性月经模型中孕酮撤退激活NF-κB状态研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究在小鼠药理性月经样模型中,阻断孕酮作用后子宫内膜组织崩解过程中核转录因子NF-κB激活状态。方法:切除卵巢后小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理模拟月经样出血,取部分子宫组织采用免疫组织化学、蛋白质印迹方法检测米非司酮处理(即孕酮撤退)后不同时期NF-κB激活及NF-κB上游信号分子的表达。结果:免疫组化结果显示,阻断孕酮作用后NF-κBp65显著入核,p50入核不明显。蛋白印迹实验显示,p50和p65蛋白发生了核浆转移,在孕酮撤退12h后核蛋白中表达量最高。NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β、磷酸化IκB-α在阻断孕酮作用后的各个时期都有表达,且各时相表达均有差异。结论:孕酮撤退可能通过NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β,继而磷酸化IκB-α通路激活NF-κB。
- 李云峰王菊惠王树芳徐丙元刘建兵张树成徐祥波贺斌王介东
- 关键词：米非司酮
- 金属基质蛋白酶在月经发生中的作用被引量：2
- 2014年
- 子宫内膜在精确的雌激素和孕激素的作用下,经历了增殖,分化以及在分泌晚期孕酮撤退情况下的子宫内膜周期性的崩解、脱落以及其后的再生修复过程。子宫内膜的快速崩解脱落现象是月经发生的显著特征。孕酮撤退是引发月经发生的始动因子,金属基质蛋白酶则是最终作用因子。金属基质蛋白酶(MMP)为水解酶,其家族成员众多。将对金属基质蛋白酶结构种类、剪切与活化、调节以及其在月经发生中灵长类和小鼠月经样模型中子宫内膜中的定位、表达与酶活进行阐述。
- 徐祥波刘书言王乾兴陈西华张树成贺斌王介东
- 关键词：金属基质蛋白酶月经胞外基质
- 雌激素对小鼠子宫内膜崩解后修复的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨假孕小鼠月经模型中,雌激素水平对子宫内膜崩解后修复再生进程的影响。方法对假孕小鼠一侧子宫人工诱导内膜间质细胞发生蜕膜化,并通过双侧卵巢切除的方式实现孕酮撤退,建立小鼠月经模型;将实验动物随机分为雌激素组以及溶剂组,在孕酮撤退后分别给以17β-雌二醇油溶液和溶剂;在孕酮撤退后24 h及48 h检测各组子宫重量改变、并进行形态学观察和评级。结果比较孕酮撤退48 h两组形态学评级,雌激素组子宫内膜修复率显著高于溶剂组(P<0.01)。结论在假孕小鼠月经模型中,溶剂组小鼠较雌激素组小鼠出现明显的修复延迟,说明雌激素水平对于子宫内膜崩解后修复进程有一定影响。
- 关硕徐祥波贺斌王介东
- 关键词：雌二醇小鼠
- 日本血吸虫4个基因启动子相关序列的克隆和初步研究
- 2013年
- 目的比较4个日本血吸虫基因启动子相关序列对荧光素报告基因的表达情况。方法利用PCR技术扩增4个日本血吸虫基因启动子的相关序列,并利用常规分子生物学技术将PCR产物克隆到荧光素酶报告基因的上游。利用脂质体转染和电穿孔技术将纯化的重组质粒分别转染到HEK293细胞和日本血吸虫体内,并以荧光素酶检测系统测定了报告基因表达情况。结果PCR扩增获得了日本血吸虫卵壳蛋白(Eggshell protein,ESG-2A)、延伸因子1(Elongation factor 1 alpha 1,EF)、烯醇酶(Enolase,EN)和抱雌沟蛋白(Gynecophornal canal protein,GCP)基因的启动子相关序列,并将它们成功地克隆到pGlu-Basic载体。重组质粒转染表明4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达。其中含有GCP和EN启动子相关序列的重组质粒可在HEK293细胞及其培养基中检测到较高的荧光素酶活性,含有GCP和ESG的重组质粒可在日本血吸虫虫体培养基中检测到较高的荧光素酶活性。结论获得的4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达,为进一步利用这些启动子相关序列开展血吸虫基因操作研究奠定了初步基础。
- 罗荣郭素霞石耀军程国锋
- 关键词：日本血吸虫启动子基因操作报告基因克隆
- 金属基质蛋白酶MMP3和MMP7在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位
- 2012年
- 目的本研究旨在研究金属基质蛋白酶(MMPs)在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位。方法卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理,免疫组化检测金属基质蛋白酶MMP3和MMP7定位。结果 MMP3从米非司酮处理后0 h到24 h,存在于腔上皮下的局部基质、上皮、蜕膜化区域以及基底层和功能层的交界处;从32 h到48 h存在于腔上皮以及其下基质区域。MMP7从0 h到24 h存在于基底层,上皮和中间蜕膜化区域,从32 h到48 h与MMP3的定位相一致。结论 MMP3和MMP7蛋白质在此模型中定位呈区域性分布。
- 徐祥波陈西华王介东贺斌
- 关键词：小鼠月经金属基质蛋白酶
