海外青年学者合作研究基金(30628018)
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 相关作者：吴炳义胡子有张兰兰曹琼漆松涛更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学渥太华大学更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 阿司匹林对人胶质母细胞瘤U87细胞系放射敏感性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察阿司匹林（ASA）对人胶质母细胞瘤U87细胞系放射敏感性的影响并探讨其可能机制。方法常规培养U87细胞，CCK-8法检测16、8、4、2、1、0．5mmol／LASA对细胞抑制率和1minol／LASA预处理对2、4、8Gy6MV—X射线单次照射后细胞抑制率的影响，计算ASA对这3种剂量射线的放射增敏比；选取1mmol／LASA和8Gy照射剂量进行实验，分为对照组、照射组、ASA组、ASA＋照射组，流式细胞仪检测细胞凋亡和NF-κB的含量，激光共聚焦显微镜观察NF—κB的表达。结果与空白对照组比较，0．5、1mmol／LASA组细胞抑制率的差异无统计学意义（P〉0．05）；ASA对8Gy射线的放射增敏比高于2、4Gy，差异有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果显示，与照射组比较，ASA＋照射组细胞凋亡率较高，NF-κB含量较低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。激光共聚焦显微镜下观察显示，照射组细胞NF-κB在细胞质、细胞核均有表达，与ASA＋照射组细胞比较表达较强。结论ASA可提高胶质母细胞瘤的放射敏感性，它可能通过抑制NF-κB的表达而增加由射线介导的胶质瘤细胞的凋亡，从而增强细胞对射线的反应。
- 张兰兰彭苹吴炳义
- 关键词：胶质母细胞瘤阿司匹林
- 星形胶质细胞体外缺血缺氧损伤后炎症模型的建立及应用被引量：1
- 2009年
- 目的建立SD大鼠星形胶质细胞缺血缺氧损伤后炎症模型，探讨亚低温对星形胶质细胞缺血缺氧及损伤后炎症反应的影响。方法体外原代培养新生SD大鼠星形胶质细胞，免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。实验分正常对照组（C组）、单纯缺氧组（H组）和缺氧＋白细胞组（H＋W组），以无糖DMEM培养基、5％CO2＋95％N2混合气体培养4h诱导细胞缺氧模型，H＋W组加入1mL SD大鼠外周血白细胞（1×10^6／mL），C组加入等量培养液。将3组细胞分别置入37℃、34cc、32℃、30℃ CO2孵箱中作用24h，应用速率法和LIVE／DEAD染色分别检测3组细胞在不同温度下乳酸脱氢酶（LDH）释放率的变化和形态学变化。结果缺氧4h即可造成星形胶质细胞的损伤，37℃时C组、H组、H＋W组细胞LDH释放率依次升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；与37℃相比，亚低温状态（34℃、32℃）下H组、H＋W组细胞LDH释放率均降低；但在30℃时，则有明显升高，与32℃相比差异具统计学意义（P〈0．05）。结论亚低温状态可明显降低星形胶质细胞的缺血缺氧性损伤及炎症性损伤，其机制可能并非通过单纯的抑制代谢来实现的。
- 曹琼张兰兰吴炳义
- 关键词：星形胶质细胞亚低温
- 大鼠δ阿片受体基因的pIRES2-EGFP质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2009年
- 目的构建大鼠δ阿片受体基因的pIRES2-EGFP表达质粒,并实现其在HEK293细胞的表达。方法提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增δ受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切、连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-pIRES2-EGFP重组子转染入HEK293细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP和δ基因表达情况。结果酶切和测序结果表明δ基因正确构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,转染了重组子的HEK293细胞在荧光显微镜下可以观察到绿色荧光,应用细胞免疫荧光,可以观察到δ基因高强度表达。结论利用巢式RT-PCR等成功构建了δ-pIRES2-EGFP表达质粒,并在HEK293细胞中实现了高效表达。
- 胡子有漆松涛张遐曹琼吴炳义
- 关键词：Δ阿片受体巢式PCRPIRES2-EGFPHEK293
- 阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达。结果测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光。应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。
- 胡子有漆松涛张遐颜晓慧吴炳义
- 关键词：受体阿片样绿色荧光蛋白质类CHO细胞
- 阿片受体μ-Myc-pIRES2-EGFP的构建及其在CHO细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建带Myc标签的大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(μ-Myc-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法:以含大鼠全长μ阿片受体基因的μ-pMD20T载体为模板,通过引物设计和扩增,在μ基因C端引入Myc标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的μ-Myc-pIRES2-EGFP转染入CHO细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测μ-Myc的表达。结果:测序及酶切结果表明获得带Myc标签的μ基因,构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹观察到目的基因表达。结论:成功构建了μ-Myc-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。
- 胡子有漆松涛张遐曹琼吴炳义
- 关键词：Μ型阿片受体PIRES2-EGFPCHO
- 星形胶质细胞划痕或缺血损伤后亚低温保护作用的研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨亚低温对大鼠星形胶质细胞不同类型损伤的保护作用。方法体外原代培养SD大鼠星形胶质细胞,分别以划痕和厌氧培养代表机械损伤和缺血缺氧损伤类型。实验分为对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)、缺氧+白细胞组(H+W组)、划痕组(S组)和划痕+白细胞组(S+W组)。将各组细胞置入37、34、32℃CO2孵箱中培养24h,应用速率法和LIVE/DEAD染色分别检测和观察各组细胞在不同温度下的乳酸脱氢酶(LDH)释放率和细胞形态学变化。结果与37℃相比,H组乳酸脱氢酶(LDH)释放率从(33.02±3.58)%分别下降为34℃时的(11.48±1.53)%和32℃时的(3.79±0.45)%(P<0.05);H+W组LDH释放率从(51.14±2.17)%分别下降为34℃时的(19.53±4.37)%和32℃时的(16.68±1.47)%(P<0.05),而S组与S+WBC组LDH释放率在34℃和32℃时与37℃相比均无显著差异(P>0.05)。结论亚低温可明显减轻缺血缺氧对星形胶质细胞的损伤,但对单纯划痕损伤的保护作用不显著。
- 曹琼张兰兰胡子有吴炳义
- 关键词：亚低温星形胶质细胞划痕缺氧
- 槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的影响被引量：8
- 2011年
- 目的观察槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区(SVZ)细胞增殖的影响。方法线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,术后6h腹腔注射槲皮素(50mg/kg,1次/3d),术后4h腹腔注射BrdU(50mg/kg,1次/d),分别于缺血第7、14、21天采用免疫荧光染色观察侧脑室SVZBrdU阳性细胞数。结果脑缺血第7天,缺血侧SVZBrdU阳性细胞较假手术组明显增多,第14天达峰值,第21天减少(P<0.01)。槲皮素组第7天时,缺血侧SVZBrdU阳性细胞亦明显增多,并随着缺血时间延长明显增加;与缺血组比较,槲皮素组7、14和21d缺血侧SVZBrdU阳性细胞数均显著增加(P<0.01),至21d仍保持高水平。结论槲皮素可维持成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室SVZ的细胞增殖在较高水平。
- 张兰兰曹琼胡子有颜晓慧吴炳义
- 关键词：槲皮素侧脑室室管膜下区细胞增殖脑缺血
- 大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP质粒构建及其在HEK293细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 提取大鼠脑组织总RNA,通过逆转录巢式PCR,扩增μ型阿片受体全长cDNA,克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,纠正点突变后,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,测序及酶切结果表明μ基因正确,μ-pIRES2-EGFP质粒构建成功.用脂质体法将μ-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫组化荧光可以观察到μ基因的高强度表达.
- 胡子有漆松涛张遐张兰兰吴炳义
- 关键词：Μ型阿片受体巢式PCRHEK293细胞
- 大鼠κ-HA-pIRES2-EGFP的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建带HA标签的大鼠κ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(κ-HA-pIRES2 EGFP),并实现其在HEK293细胞中的表达。方法提取大鼠脑组织总RNA,通过巢式RT-PCR扩增κ型阿片受体全长cDNA,将其克隆至pMD20-T载体中并进行测序鉴定,通过PCR引入HA标签,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的κ-HA-pIRES2-EGFP转染入HEK293细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测κ-HA表达。结果测序及酶切结果表明成功获得带HA标签的κ基因,并构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下可观察到转染细胞内有绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论利用巢式RT-PCR等技术成功构建了κ-HA-pIRES2-EGFP表达质粒,并在HEK293细胞中实现了高效表达。
- 胡子有漆松涛张遐颜晓慧吴炳义
- 关键词：巢式PCRPIRES2-EGFPHEK293
