国家自然科学基金(30800988)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- RhoA蛋白对结核杆菌侵袭A549细胞的影响
- 2013年
- 探讨结核杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)侵袭A549细胞过程中RhoA蛋白功能。构建靶向RhoA基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体si-RhoA,转染A549细胞,36 h后进行MTB黏附和侵袭细胞实验,蛋白印迹法(Western blot)检测RhoA蛋白表达水平,电镜观察细胞超微结构改变,激光共聚焦显微镜观察细胞微丝骨架变化并计算F-actin重排指数,定量PCR法测量细胞黏附和内吞的MTB数量。结果显示,si-RhoA转染A549细胞后,RhoA蛋白表达下降84.7%,细胞对MTB的黏附能力未改变。MTB侵袭细胞实验显示,si-RhoA转染组细胞F-actin重排指数和内吞细菌数量分别是(63.0±3.1)%和(3.19±0.26)×103拷贝,无关siRNA组分别是(84.5±1.8)%和(4.45±0.29)×103拷贝,前者均少于后者(P<0.01)。由此可见,结核杆菌侵袭A549细胞需要RhoA蛋白参与,可能通过"拉链"机制介导结核杆菌侵袭非吞噬细胞。
- 邵圣文周洪昌徐伯赢张慧薛利军
- 关键词：结核杆菌RHOA基因A549细胞
- 靶向CDC42基因小干扰RNA分子的制备
- 2011年
- 目的制备靶向CDC42基因的小干扰RNA分子(siRNA)并检测其对CDC42基因表达的抑制效果。方法针对CDC42基因的不同区域设计4条siRNA分子,体外转录法合成siRNA分子,将siRNA与CDC42基因真核表达载体共转染HEK293T细胞,Westernblot法测定CDC42蛋白含量。结果合成了siR1、siR2、siR3、siR4共4条siRNA分子,siR3对CDC42基因表达的抑制率为95%,siR1、siR2以及siR4对CDC42基因表达的抑制作用不明显。siR3对HEK293T细胞生长无明显影响。结论体外转录法制备的siR3分子能够高效特异地抑制CDC42基因表达。
- 邵圣文薛利军周洪昌段劲王洁卢添宝徐菊玲
- 关键词：小干扰RNA体外转录
- 结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法建立被引量：5
- 2011年
- 目的探讨结核分枝杆菌实时定量检测方法并进行评价。方法针对结核杆菌(Mycobacterium tuberculo-sis,Mtb)16S rDNA基因设计引物,应用SYBR Green I建立荧光定量PCR(FQ-PCR)反应体系;提取Mtb基因组DNA,PCR扩增16S rDNA片段,构建重组质粒pMD-TB16S;检测11份肺结核患者痰标本;以甲型链球菌、大肠杆菌等基因组DNA作对照,检验方法特异性,对同一份Mtb DNA模板进行批内和批间检测,计算变异系数(CV)。结果靶向Mtb 16SrDNA基因引物能够特异扩增Mtb 16S rDNA基因,对照组细菌基因未见扩增,灵敏度为(Mtb基因组DNA)1.2 pg/μL,即(38.9±3.54)拷贝/μL的16S rDNA基因,批内和批间Ct值变异系数分别为0.27%和1.26%。结论以16S rDNA为靶基因的FQ-PCR技术,能够对Mtb进行快速、敏感而特异的定量检测。
- 徐菊玲徐伯赢周洪昌张慧段劲薛利军邵圣文
- 关键词：结核杆菌RDNA荧光定量PCR
