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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z187): 作品数：19 被引量：84H指数：5; 相关作者：夏立秋丁学知赵新民胡胜标孙运军更多>>; 相关机构：湖南师范大学湖南城市学院华中农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学理学化学工程更多>>

聚酮化合物β-酮酰-ACP合酶的计算机对比分析与组合生物合成: 2010年; 为了合理地设计新的聚酮化合物提高组合生物合成的效率,本文使用ClustalW、Mega4.0分析了26种来自不同聚酮合酶的β-酮酰-ACP合酶结构域的序列特征,并用ProtParam、Phdsec、Swiss-Model等工具对其中9种具有不同底物专一性的β-酮酰-ACP合酶的一级结构、二级结构和三级结构及活性位点进行了分析与预测。发现它们结构上的相似性大于序列上的相似性;活性位点都富含丝氨酸;底物含有2个羧酸基团的β-酮酰-ACP合酶的理论pI均小于5.0且其形式电荷总量也偏低;序列V303ELHGTGTPLGDPIEAGA320是这26种β-酮酰-ACP合酶的一段保守序列,但它并不与活性位点相邻。这些研究对进行聚酮合酶的模块或结构域替换以及定点突变具有重要的指导意义,也为探讨其的进化机制提供了参考。; 唐滢夏立秋王海龙胡胜标余子全孙运军; 关键词：组合生物合成底物专一性

W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性被引量：2: 2008年; W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9 h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值.; 王发祥夏立秋丁学知赵新民单世平莫湘涛张友明喻子牛; 关键词：定点突变色氨酸苯丙氨酸稳定性

杀线虫苏云金芽孢杆菌研究进展被引量：10: 2007年; 简述了近年来对线虫有杀灭活性的苏云金芽孢杆菌(B.t.)及其晶体蛋白的研究进展,主要包括具有杀灭线虫活性的B.t.种类、B.t.所杀线虫的种类、杀线虫晶体蛋白结构特点和作用机理以及有关的专利。讨论了杀线虫基因的克隆、表达和B.t.制剂的应用。展望了B.t.生物杀虫剂在线虫的生物防治中的应用前景。; 赵新民黄璠付祖姣王发祥丁学知夏立秋; 关键词：苏云金芽孢杆菌线虫晶体蛋白生物杀虫剂

应用计算机对比分析苏云金杆菌Cry1A类晶体蛋白被引量：1: 2007年; 蛋白质的结构数据量目前还远落后于其序列数据量。本文利用蛋白质数据库和CLUSTAL W、SWISS-MODEL、ExPASy工具等对已知序列的9种Cry1A的一级结构及基本性质、二级结构、三级结构进行预测分析对比,发现其序列和结构的均高度相似,从而找出序列上的主要突变区域和三维结构的差异部位,有助于进一步认识Cry1A蛋白的作用模式和功能异同、分析其进化关系,并为重新设计Cry1A蛋白提供参考。; 王发祥黄璠夏立秋赵新民丁学知; 关键词：CRY 数据库

Flexibility Analysis of Bacillus thuringiensis Cry1Aa: 2015年; Objective To investigate the flexibility and mobility of the Bacillus thuringiensis toxin Cry1 Aa. Methods The graph theory-based program Constraint Network Analysis and normal mode-based program NMsim were used to analyze the global and local flexibility indices as well as the fluctuation of individual residues in detail. Results The decrease in Cry1 Aa network rigidity with the increase of temperature was evident. Two phase transition points in which the Cry1 Aa structure lost rigidity during the thermal simulation were identified. Two rigid clusters were found in domains I and II. Weak spots were found in C-terminal domain III. Several flexible regions were found in all three domains; the largest residue fluctuation was present in the apical loop2 of domain II. Conclusion Although several flexible regions could be found in all the three domains, the most flexible regions were in the apical loops of domain II.; ZHAO Xin MinXIA Li QiuYANG Xiao PingPENG Xiao Yun; 关键词：苏云金芽孢杆菌 CRY1 网络分析结构刚度正常模

外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达被引量：10: 2008年; 【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。; 刘萍夏立秋胡胜标严礼丁学知张友明喻子牛; 关键词：苏云金芽孢杆菌同源重组 CRY1AC基因

大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建及其应用被引量：2: 2010年; 【目的】构建能定点整合到链霉菌（Streptomyces）染色体上的高效表达载体。【方法】以链霉菌自杀型表达载体pLSB2为基础,通过插入链霉菌噬菌体ΦC31整合酶基因int和attP位点（Phage attachment site）,构建了能在大肠杆菌和链霉菌之间进行接合转移并定点整合到链霉菌染色体上的表达载体pMF。将pMF转化大肠杆菌ET12567（pUZ8002）,并分别接合转移天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolorM145）、变铅青链霉菌（Streptomyces lividansTK24）和红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea2338）,挑取接合子进行PCR和Southern杂交检测。将来自刺糖多孢菌S08-4的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（SAM-s）克隆到载体pMF的启动子下游,接合转移到天蓝色链霉菌中。【结果】表明pMF成功整入链霉菌染色体,并且检测到目的蛋白的表达。【结论】构建的pMF载体可作为外源基因定点整合表达的有效工具,为后续的基因功能研究以及链霉菌的遗传改造奠定了基础。; 全梅芳余凯夏立秋丁学知曾凡军寇笑笑王海龙胡胜标余子全李敬业; 关键词：链霉菌整合酶

苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Aa，Cry2Aa，Cry3Aa和Cry4Aa结构的计算机对比分析被引量：8: 2008年; 运用生物信息学软件对苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Aa,Cry2Aa,Cry3Aa和Cry4Aa的基本参数、一级结构、二级结构、三级结构、跨膜区和表面电势进行了预测比较.它们在一级结构上有较大差异,但二级结构和跨膜区相似,三级结构中各毒素的结构域I之间基本相似,结构域II之间差异较大,其中Cry2Aa为差异最大成员.4种毒素的表面电势分布不同.毒素之间的结构相似性和差异性与其作用机理和杀虫特异性有关.; 赵新民夏立秋王发祥丁学知单世平张友明; 关键词：苏云金芽孢杆菌毒素生物信息学计算机

杀虫球孢白僵菌菌株筛选及类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆被引量：3: 2008年; 在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白.; 贺小红曾智付祖姣丁学知胡胜标孙运军夏立秋; 关键词：RT-PCR 球孢白僵菌

核型多角体病毒p74基因在苏云金芽胞杆菌中的表达: 2009年; 【目的】利用核型多角体病毒(NPV)的p74基因与苏云金芽胞杆菌(Bt)的cry1Ac基因构建融合基因cry1Ac-p74,构建具有广谱杀虫作用的工程菌【。方法】从Bt4.0718菌株中克隆cry1Ac基因及其终止子cry1Act,从苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中克隆p74基因,以pMD-T作为大肠杆菌亚克隆载体,分别构建含有目的基因片段的T载体pT1Ac、pTp74、pT1Act以及中间载体pT1Act、pTp74Act,获得携带有目的融合基因cry1Ac-p74的表达载体pH1Acp74;该表达载体电转化至Bt无晶体突变株XBU001,得到目的重组菌株XBU-H1Acp74。【结果】XBU-H1Acp74可表达130kD的Cry1Ac蛋白和50kD的P74蛋白,生测显示P74蛋白可以协同Cry1Ac的杀虫效果。【结论】本研究成功构建了cry1Ac基因与p74基因融合的Bt工程菌,为进一步研究和构建新型生物杀虫剂的工程菌株,研制出高效、广谱、安全的杀虫剂提供了新的技术途径。; 叶湘漓夏立秋; 关键词：苏云金芽孢杆菌核型多角体病毒 CRY1AC基因融合基因

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