卫生部卫生公益性行业科研专项(201002016) 作品数:29 被引量:157 H指数:7 相关作者: 王宝玺 冯素英 陈敏 张洁尘 杨永红 更多>> 相关机构: 北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院 更多>> 发文基金: 卫生部卫生公益性行业科研专项 国家自然科学基金 协和青年科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
银屑病患者皮肤中T细胞与黑素细胞的检测及临床意义 被引量:2 2015年 目的 研究银屑病患者皮肤中CD4+和CD8+T细胞与黑素细胞的关系和临床意义.方法 取29例进行期银屑病患者皮损和非皮损、5例消退期患者皮损和非皮损及6例健康人皮肤.免疫组化检测CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量和分布,并对比基底层黑素细胞和色素颗粒情况.采用SPSS18.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),两组间比较采用最小显著差异法(LSD),相关性分析采用Pearson检验.结果 银屑病患者皮损中每个高倍(&#215;200)视野CD4+T细胞平均数(表皮5.29±4.66,真皮77.50±43.66)明显高于非皮损(表皮为0,真皮9.67±7.73),皮损与非皮损比较,均P< 0.05;而CD8+T细胞的数量(表皮7.83±6.27,真皮46.08±34.26)亦明显高于非皮损(表皮0.71±1.20,真皮5.54±4.43),皮损与非皮损比较,均P< 0.05.与健康对照皮肤相比,银屑病患者皮损中CD4+T细胞和CD8+T细胞均明显增多,差异有统计学意义(均P< 0.05).银屑病皮损处基底层黑素细胞数量(103.45±16.96)明显高于非皮损(43.62±14.20,P<0.05)及健康人皮肤(P<0.05),但色素颗粒阳性细胞比例(7.45%±3.86%)明显低于非皮损(43.10%±14.91%,P< 0.05)及健康人皮肤(P<0.05).非皮损处CD8+T细胞、CD4+T细胞、黑素细胞数量及色素颗粒阳性细胞比例与健康人比较差异均无统计学意义.消退期皮损黑素细胞数量高于消退后白斑(P<0.05),色素颗粒阳性细胞比例略低于消退后白斑,但差异无统计学意义;与健康人比较,消退期皮损黑素细胞数量高,而色素颗粒阳性细胞比例低,均有统计学差异(均P< 0.05),消退后白斑的黑素细胞数量与健康人比较差异无统计学意义,而色素颗粒阳性细胞比例降低(P<0.05).进行期患者皮损中CD4+、CD8+T细胞数与黑素细胞数及色素颗粒阳性细胞比例均无相关性(均P> 0.05),而非皮损中CD4� 栾超 陈浩 杨永红 姜祎群 刘毅 陈敏 王宝玺关键词:银屑病 T淋巴细胞 黑素细胞 CD8阳性T淋巴细胞 CD4阳性T淋巴细胞 胆碱能受体激动剂逆转天疱疮棘层松解的机制研究 被引量:6 2015年 目的 研究胆碱能受体激动剂对天疱疮棘层松解的逆转作用及其机制.方法 将HaCaT细胞与寻常型天疱疮IgG(PV-IgG)共培养建成天疱疮细胞模型后,再加入胆碱能受体激动剂卡巴胆碱共培养,以PV-IgG诱导的天疱疮细胞模型作为对照,通过细胞解离实验定量分析卡巴胆碱对棘层松解的逆转情况,用免疫荧光方法定性观察桥粒蛋白变化;分别用RIPA和Triton X-100裂解细胞,得到总蛋白和胞质蛋白,用蛋白免疫印迹灰度值定性分析HaCaT细胞表面与黏附相关的桥粒芯蛋白3(Dsg3)、桥斑珠蛋白(PG)的变化,不同时间点p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化水平;用定量聚合酶链反应(qPCR)检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化;通过免疫共沉淀方法定性分析Dsg3与PG相互作用的变化情况.结果 PV-IgG组细胞碎片数为46.67±2.03,卡巴胆碱组为18.67±2.52,两组比较,t=11.22,P< 0.01;免疫荧光实验发现,卡巴胆碱可以逆转PV-IgG所致的桥粒分子内化.在天疱疮细胞模型中,细胞总的Dsg3和PG含量下降,非桥粒部分的Dsg3下降,非桥粒PG含量增加,且Dsg3与PG的相互作用减弱,加入卡巴胆碱后可逆转上述变化.卡巴胆碱也可使Dsg3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct)由1.428±0.215增加至4.974±0.948(t=3.65,P=0.01),PG mRNA的相对表达量由1.563±0.247增加至13.420±1.715(t=6.85,P<0.01).磷酸化实验中,卡巴胆碱可以抑制EGFR磷酸化,而对p38 MAPK磷酸化无明显影响.结论 胆碱能受体激动剂卡巴胆碱具有逆转棘层松解的作用,这种逆转作用的机制可能包括:抑制Dsg3和PG内化并增加其表达,增强Dsg3与PG的相互作用,抑制棘层松解关键信号EGFR的磷酸化. 李志量 张洁尘 徐浩翔 杨永红 冯素英 王宝玺关键词:天疱疮 胆碱能激动剂 HACAT细胞 不同亚型天疱疮患者血清对HaCaT细胞桥粒芯糖蛋白3表达的影响 被引量:5 2015年 目的:确定3例不同亚型天疱疮患者(寻常型、副肿瘤型和落叶型天疱疮)血清对HaCaT细胞桥粒芯糖蛋白1、3(DSG1、3)及mRNA表达的影响。方法:采集3例患者血清,ELISA测定抗DSG1抗体和抗DSG3抗体;血清培养HaCaT细胞,直接免疫荧光检测细胞表面DSG1、3荧光强度,qPCR测定DSG3 mRNA的表达。结果:寻常型天疱疮患者血清抗DSG1抗体及抗DSG3抗体均阳性,副肿瘤型天疱疮患者血清抗DSG3抗体阳性,落叶型天疱疮患者血清抗DSG1抗体阳性。3例患者血清分别作用后,HaCaT细胞表面DSG3荧光强度均降低;寻常型及副肿瘤型天疱疮患者血清作用后,HaCaT细胞DSG3 mRNA表达增加,落叶型天疱疮患者血清作用后,HaCaT细胞DSG3 mRNA表达降低。结论:抗DSG1抗体血清可以降低DSG3表达;抗DSG3抗体血清可以增加细胞中DSG3的表达,但血清中的抗DSG3抗体存在以及KC细胞对DSG3的内吞等作用会将其表达的蛋白减少。 李惠 林麟 张洁尘 冯素英 周武庆 弓娟琴 王宝玺关键词:HACAT细胞 天疱疮 药物超敏反应的体外检测 被引量:1 2013年 药物引起的超敏反应(drughypersensitivityreactions)约占药物不良反应的15%,分为免疫性及非免疫性机制介导两种。非免疫反应机制为药物直接刺激效应细胞产生过敏介质引起临床症状。免疫性机制由获得性免疫系统介导,可检测到特异的免疫反应细胞及炎症因子,再次暴露于致敏药物后可引发相同症状。因为较难获得准确病史及超敏反应的复杂性,临床诊断药疹困难重重且易被误诊及忽略。 张宇 姚煦 王宝玺关键词:药物不良反应 超敏反应 体外检测 非免疫性 免疫反应细胞 临床症状 白芍总苷联合左西替利嗪及他克莫司软膏治疗严重面部激素依赖性皮炎的疗效和安全性评价 被引量:22 2014年 目的 评估白芍总苷联合左西替利嗪及他克莫司软膏治疗严重面部糖皮质激素(简称激素)依赖性皮炎的疗效和安全性.方法 共入组98例严重面部激素依赖性皮炎患者,其中63例(试验组)口服白芍总苷胶囊联合左西替利嗪并外用他克莫司软膏治疗,35例(对照组)单纯口服左西替利嗪及外用他克莫司软膏治疗.治疗后第2和4周、停药后2周随访观察患者面部症状及体征,并进行评分,计算有效率.结果 临床随访过程中脱落8例,其中试验组脱落3例,对照组脱落5例,最后完成治疗患者共90例.治疗2周后试验组和对照组的有效率分别为50.0%(30/60)和16.7%(5/30),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗4周后试验组和对照组的有效率分别为93.3%(56/60)和60.0% (18/30),两组比较差异有统计学意义(P<0.05).停药2周后,所有试验组患者症状总积分持续下降,对照组中53.3%(16/30)患者症状总积分持续下降,26.7%(8/30)患者症状总积分不变,20.0%(6/30)患者症状总积分较停药时上升.两组均无严重不良反应.结论 白芍总苷胶囊可以提高左西替利嗪及他克莫司软膏治疗面部严重激素依赖性皮炎的疗效. 毛红群 栾超 宗文凯 姚煦 刘毅 林麟 崔盘根 陈敏关键词:白芍 甲损害在泛发性脓疱型银屑病中的临床意义 被引量:3 2015年 目的探讨甲损害在泛发性脓疱型银屑病发病中的临床意义。方法回顾性分析2010年1月-2013年12月在中国医学科学院皮肤病研究所皮内科收治的206例泛发性脓疱型银屑病患者的临床资料,比较伴有和不伴有甲损害患者的一般资料、实验室检查结果及治疗方法和疾病预后等临床资料。结果男性患者甲损害多于女性患者,有甲损害组患者平均年龄、体重均明显高于无甲损害组患者(P均<0.05);甲损害组患者住院期间体温降至正常时间、无新发脓疱时间及住院天数明显高于无甲损害组患者(P均<0.05)。结论泛发性脓疱型银屑病患者伴有甲损害可能预示病情较严重,对于评估病情及临床用药具有指导意义。 王彩梅 汤洁 向志 崔盘根 林麟 顾恒 陈敏 王宝玺关键词:甲损害 银屑病 泛发性 脓疱型 银屑病病情相关的实验室指标 2015年 采用银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分来判断寻常性银屑病的病情从1987年沿用至今。但在临床实践中, PASI 评分存在诸多不足:受主观因素影响较大,尤其是在皮损泛发时;特殊部位的银屑病(如间擦部位、指甲),使用 PASI较困难;对于特殊类型银屑病(关节病性、脓疱性)无法评估其病情严重程度。事实上,PASI 法已不能满足临床的需求,需要寻找与病情相关的客观实验室指标辅助 PASI 判断银屑病病情严重程度。分子生物学及免疫学技术的发展为寻找客观评价指标提供了条件。 郝志敏 陈敏关键词:寻常性银屑病 病情严重程度 PASI 免疫学技术 乙酰胆碱受体对HaCaT细胞黏附功能的影响及作用机制 2014年 目的研究乙酰胆碱途径药物对Ha Ca T细胞黏附功能的影响及其作用机制。方法培养Ha Ca T细胞至融合状态后,分别加入适当浓度的乙酰胆碱途径药物(M受体抑制剂阿托品,N受体抑制剂筒箭毒碱,乙酰胆碱受体激动剂卡巴胆碱),用细胞黏附检测方法检测细胞黏附的变化情况,结果以细胞碎片数表示;分别用Triton X-100和RIPA裂解细胞,得到胞浆蛋白和总蛋白,用蛋白免疫印迹测定细胞表面与黏附相关的蛋白桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白、E-钙黏素的变化;用定量多聚酶链反应(q PCR)检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化。结果对照组、阿托品、筒箭毒碱、卡巴胆碱作用后细胞碎片数目分别为6.33±1.15,35.00±2.65,6.33±1.53,6.00±1.00;阿托品在蛋白质和mRNA水平减少桥粒芯蛋白3表达,并使桥粒芯蛋白3从胞膜脱离,卡巴胆碱可增加桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白表达,并促使桥粒芯蛋白1、桥斑珠蛋白黏附于胞膜。筒箭毒碱对各种细胞表面蛋白均无明显影响。结论 Ha Ca T细胞表面的乙酰胆碱受体可以调节细胞间黏附分子,尤其是桥粒分子的表达,并影响这些分子在细胞膜上的稳定性,从而介导细胞间黏附,这种作用主要通过M受体实现。 李志量 张洁尘 杨永红 冯素英 王宝玺关键词:乙酰胆碱受体 HACAT细胞 抗Ⅶ型胶原抗体ELISA辅助确诊一例获得性大疱性表皮松解症及文献复习 2014年 目的 报道抗Ⅶ型胶原抗体酶联免疫吸附实验(ELISA)辅助确诊1例获得性大疱性表皮松解症(EBA).同时复习文献,分析在大样本中该方法诊断EBA的敏感性和特异性.方法 对1例临床表现、组织学特点、免疫学特点符合EBA的患者,应用抗Ⅶ型胶原抗体ELISA试剂盒检测其血清中Ⅶ型胶原抗体滴度;以4例健康人、5例大疱性类天疱疮和3例寻常型天疱疮患者为对照.查阅既往关于ELISA法诊断EBA的文献,总结各研究中患者入组标准、包被的抗原、敏感性、特异性,并与其他血清学方法对比.结果 ELISA法检测该患者血清中抗Ⅶ型胶原抗体滴度为136 U/ml,对照组均为阴性.既往文献中,敏感性和特异性有区别,但总体而言,ELISA法诊断EBA的准确性高于免疫印迹.结论 ELISA法诊断EBA简单快捷,具有较高准确性. 李志量 王光平 佘晓东 李筱芳 王宝玺 冯素英关键词:酶联免疫吸附测定 药物斑贴试验与药疹 被引量:1 2014年 药疹是指正常剂量的药物经过多种途径进入人体后引起的皮肤黏膜的损害,其病理生理学发病机制不明.药疹的临床表现多样,了解药疹的分类及发病机制对其诊断和寻找可疑致敏药物至关重要.药物斑贴试验的目的是寻找引起药疹的致敏药物,提供患者可能的致敏药物信息.近年来应用于临床的药物斑贴试验安全性较高、操作简便,为药疹的诊断提供了重要的依据.有关药物斑贴试验的相关研究较多,但结果不一. 陈京京 姚煦 王宝玺关键词:药疹 外用药