国家自然科学基金(81271886)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：山东省农业科学院山东大学青岛农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率。结果重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率。结论通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变。
- 牛卫卫白华王进文颜世敢齐静骆延波李璐璐贾纪美李靖冉黄娟单虎刘玉庆
- 关键词：LEXA大肠埃希菌恩诺沙星
- 抑制E.coli的SOS应答对恩诺沙星抗药性的影响
- 2015年
- 通过敲除SOS应答启动蛋白基因rec A,探讨SOS应答对E.coli恩诺沙星抗药性的影响,并体外评价Rec A抑制剂和恩诺沙星联用对细菌协同抑制作用的影响.利用Red重组系统,构建E.coli ATCC 25922的rec A缺失菌株E.coli ATCC 25922/?rec A;在恩诺沙星压力下,利用荧光定量PCR测定SOS应答系统相关基因rec A和umu C表达量的变化.用微量肉汤稀释法测定恩诺沙星等常用抗生素对两个菌株的MIC变化;利用梯度平板法测定恩诺沙星对两个菌株抗药性变异的影响;合成Rec A抑制剂,并评估其与恩诺沙星联合抑制E.coli生长及其抗药性的作用.结果表明,E.coli ATCC 25922/?rec A菌株对恩诺沙星的最低抑菌浓度值降低至原始菌株的1/8;经药物处理后,在梯度平板上,rec A缺失菌株较野生型不易产生抗药性;荧光定量PCR表明,rec A缺失菌株或在Rec A抑制剂作用下,SOS应答系统受到一定的抑制.敲除rec A,使菌株对恩诺沙星的抗药性和抗药率均明显降低;Rec A抑制剂在一定程度上能抑制SOS应答,起到协同抑菌作用.
- 王进文胡明白华颜世敢李璐璐骆延波齐静韩哲刘玉庆
- 关键词：E.COLIRECA恩诺沙星抗药性RECA抑制剂
- 表征抗菌药物抑菌动力学的等效线药敏试验方法被引量：5
- 2015年
- 以抗菌药物作用浓度与时间对抑菌率的协同作用，改进通行的药敏试验方法．采用Bioscreen全自动生长曲线分析仪，在线测定连续时间、连续固定浓度抗菌药物作用下禽致病性大肠杆菌BBZ6-3g在MHB中生长量（A600），建立了抑菌动力学检测体系．用Sigmaplot构建以相对抑菌率RBR=1—At-i／At_0对抗菌药物浓度和作用时间的等效线图．等效线图全面地反映了药物浓度和时间对抑菌量的影响过程及趋势，兼具二维曲线的量化和三维曲面的直观特点，而且RBR通过归一化处理，消除了细菌群体的自然增殖的本底、不同接种量、不同抗菌药物的差异影响，可以直接比较不同抗菌药物的抑菌率，专门比较浓度和时间对抑菌率的影响．抑菌作用本质上是抗菌药物抑制细菌对营养物质的利用效率和程度，与细菌死亡是不同但是相关的过程。0．5RBR为传统的目测最低抑菌浓度（MIC），以此为界，等效线图可以直观地分为3部分：分化区（O．5纵向等效线以左，全部浓度）、生长区（0．5以上的等效线）、抑菌区（0．5纵向等效线以右延伸且0．5以下的等效线）．分化区边界时间在100～300min，因此传统的药敏试验以8—12h的终态来判断抑菌率，确定MIC是可靠的；抑菌区和生长区之间的等效线疏密，实际上是浓度依赖性和时间依赖性的依据．抑菌动力学检测体系和反映RBR的等效线图，改良了传统药敏试验方法，有望分析不同接种量对抑菌率和菌群变异的影响、不同浓度的抗菌药物后效应（PAE），比较不同菌种或不同抗药性水平菌株的抑菌动力学．
- 刘玉庆胡明刘焕奇王进文赵敏李靖冉付晓杰骆延波齐静李璐璐高培基
- 以梯度平板法改进药敏试验方法及其药物浓度质量控制
- 2017年
- 药敏试验是临床选择敏感抗生素的精确检测工作,其成败在于质量控制的可靠性和最低抑菌浓度(MIC)的精确性、前瞻性.本文结合质控试验和药敏试验对梯度平板法进行验证,梯度平板法所测得的MIC与微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测得的MIC结果一致,且因为线性设置的药物浓度,MIC更加精确,能推算抗菌药物的原始浓度,更好地保证质控试验的可靠性.同时,按照美国临床实验室标准委员会或欧盟药敏试验委员会的敏感(S),中介(I)以及抗药(R)范围标准设置0-S,S-R,R-8R这样3个线性梯度,首先判断菌株敏感性范围,然后精确测定细菌群落的MIC值,并能有效分离出抗性菌株,预警该抗生素使用后可能出现的抗药性,进而指导临床抗菌药物的选择和应用.梯度平板的主要困难在于手工制备的繁琐和不稳定性,如果自动化生产即用型梯度平板,将便利临床药敏试验,改进抗药性筛选技术.
- 王杰张庆李璐璐胡明骆延波齐静张印刘玉庆
- 关键词：药敏试验琼脂稀释法微量肉汤稀释法
- 噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析及对鸡大肠杆菌的疗效被引量：6
- 2017年
- 为了解决目前严重的抗生素耐药性,寻找抗生素的替代品,作者探究了大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的基本生物学特性及其对致病性大肠杆菌1019的治疗效果。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析显示其效价可达到10~9pfu·mL^(-1),透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。热稳定性较好,在60℃保温1h后噬菌体效价仍可达到10~7pfu·mL^(-1)以上。对pH值的适应范围较宽,在pH4~10内仍能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适pH在7.0左右。最佳感染复数(MOI)为0.1,感染宿主菌的潜伏期20min,爆发期70min。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3对大肠杆菌1019有较强的裂解能力,可使SPF鸡肠道内大肠杆菌1019的数量降低96.5%。该大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3在治疗特定的大肠杆菌感染中具有较大的应用潜能。
- 王杰李璐璐张庆
- 关键词：大肠杆菌噬菌体生物学特性
- SOS应答系统及其对细菌耐药性和毒力的调控作用与在治疗细菌感染中的应用
- 2014年
- 细菌是最简单的细胞生物,却拥有完整的生化过程和完善而富于变化的基因组。如果说中心法则是保证细菌基因组严谨复制和表达的遗传铁律,那么SOS应答(SOS response,SOSr)系统则是细菌长期进化留下的变异窗口,SOSr增加基因组序列的变异,并调控这一庞大基因组有选择地表达和横向交流,以适应多变的环境。很显然,细菌耐药性与致病力也在SOSr系统调控范围内,耐药性或强致病力菌株的出现大大增加了对致病菌感染治疗的难度。因此,认识细菌耐药性和毒力的关系,研究SOSr的调控机制及其抑制措施,具有进化论意义和重要的医疗价值。
- 王进文白华颜世敢胡明刘玉庆
- 关键词：耐药性毒力进化
- 动态分析抗菌作用的新方法
- 2017年
- 最低抑菌浓度(MIC)是表征抗菌药物对细菌生长抑制最终效应的常规方法,不能描述抑菌作用的时间过程,药敏试验也不适用于高抗药性水平菌株的治疗方案确定.因此本文提出了一个普适性的新药敏试验方法.不同接种量的质控菌株Escherichia coli ATCC 25922和临床高抗药性水平菌株E.coli BBZ在不同系列浓度的6种抗菌药物(环丙沙星、氨苄西林、头孢噻呋、阿米卡星、硫酸黏菌素和多西环素)作用下,37℃下培养1200 min,连续检测时间序列点的光密度值A600作为反应变量,以相对抑菌效应(RIE=((a.b)/a)×100%)表征抑制效应,进而用等效线图表征药物浓度和时间协同抑制效应的动态过程,量化了浓度依赖型和时间依赖型,细化不同菌株对药物敏感性的差别.由此得到,达到最大抑制效应时,需要的最低药物浓度和时间,以及增大药物浓度或延长反应时间对抑制效应的影响,这正是临床用药最需要的信息.此外,大接种量下最大抑菌效应很低,表明不适合治疗.本方法为防治高抗药性菌株感染提供了药敏试验方法,也有益于促进新药研发药敏检测方法的改进.最后提出适于临床应用的、快速定性显示药物敏感性的方法的建议.
- 张庆胡明王杰杨炜华金建玲刘玉庆高培基
- 关键词：药敏试验抗菌药物
- 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法药敏试验结果的对比被引量：10
- 2018年
- 目的为了验证96点阵琼脂稀释法进行药敏试验的可靠性和有效性,与国际通用的微量肉汤稀释法进行对比。方法用微量肉汤稀释法和96点阵琼脂稀释法分别对质控菌株E.coli ATCC25922、临床分离E.coli进行4种不同药物(头孢噻呋、庆大霉素、氟苯尼考和多西环素)的药敏试验,并经过多次重复和对比。结果这两种检测方法所测定的菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)完全相同者占30%~50%,相差1个梯度占80%,3个梯度以内的吻合率高达96%以上,96点阵琼脂稀释法具有很好的重复性和稳定性。结论 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法两种方法测定的MIC没有显著差异,可共用一个质控标准。96点阵琼脂稀释法的标准化和规范化,有利于高通量药敏检测的进行,推动建立完善的抗药性监测技术体系。
- 胡明李璐璐赵敏赵敏张印骆延波张印齐静
- 关键词：药敏试验微量肉汤稀释法
