江苏省自然科学基金(BK2011484)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：张建新王平江党胜春冯舒沈耀更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性。方法密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80%左右融合时,用脂质体LipofectamineTM2000体外转染eNOS基因至EPC。转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量。结果成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体。转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P<0.01),NO含量明显升高(P<0.01),ROS含量明显降低。结论脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达。
- 党胜春陈荣芳王平江冯舒张建新
- 关键词：内皮祖细胞内皮型一氧化氮合酶基因一氧化氮氧自由基
- 巨噬细胞表型在重症胰腺炎肾损伤中的表达被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨巨噬细胞（Mφ）表型在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）急性肾损伤中的机制.方法 雄性Wistar大鼠64只,随机（随机数字法）分为对照组（SO组）和SAP组,每组32只,采用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型,于造模后2、6、12及24h分别取血和肾组织.自动生化分析仪测定血液中尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的改变.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肾组织IL-12、TNF-α、IL-10及TGF-β的mRNA的表达水平.蛋白质印迹法检测CD68、iNOS、Arg-1的表达.结果 SAP组各时点BUN、Cr的浓度均高于对照组（P ＜0.01,P＜0.05）;SAP组各时点肾组织IL-12、TNF-α、IL-10、TGF-β的mRNA的表达水平较对照组显著增高,差异具有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）; SAP组各时点CD68、iNOS、Arg-1表达量均高于对照组.结论 SAP时炎症反应及炎症失衡是急性肾损伤的可能病理因素.
- 党胜春冯舒王平江沈耀张建新
- 关键词：重症急性胰腺炎肾损伤巨噬细胞CD68
- 小鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外培养及标志物鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨小鼠骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的体外培养、诱导分化及表面标志物的鉴别。方法:收集ICR小鼠骨髓EPCs,Ficoll分离单核细胞,使用含有血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)的培养基培养。分别在细胞培养5,10,15及20 d后检测细胞表面的内皮细胞标志物。结果:培养5 d后细胞开始出现上皮细胞的形态,有伪足出现;培养10 d,细胞开始增殖,成圆形,出现梭形细胞;培养15 d,细胞出现较为典型的内皮细胞形态,铺路石状;培养20 d,细胞出现长梭形拉网状,即类似成熟内皮细胞形态。免疫荧光染色及流式定量检测结果显示,CD34在EPCs中的表达随培养时间延长有渐变减弱的趋势;血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)在EPCs的表达随培养时间延长有渐变增强的趋势。结论:骨髓EPCs在特定诱导条件下可分化出典型的成熟内皮细胞,取材方便,扩增能力较强。
- 党胜春陈纪芳冯舒刘彬王平江张建新
- 关键词：骨髓内皮祖细胞体外培养
- 大鼠重症急性胰腺炎肺损伤时髓系细胞触发受体-1的表达被引量：3
- 2013年
- 目的探讨重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）引起急性肺损伤（acute lung injury，ALI）时髓系细胞触发受体一1（triggering receptor-1 on myeloid cells，TREM-1）以及相关炎症因子的表达。方法雄性SD大鼠24只，随机（随机数字法）分为SO组（假手术组）、SAP组和SAP＋LP17组（LP17为人工合成的TREM-1多肽），每组8只，采用逆行胰胆管技术制备SAP大鼠模型。于造模后12h提取胰腺及左肺组织，苏木精-伊红（HE）染色观察胰腺和肺组织的病理形态学变化；免疫组织化学法采用巨噬细胞特异性抗体CD68检测巨噬细胞浸润情况；通过荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR法）检测肺组织TREM-1、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA的表达量。计量资料采用均数4-标准差（^-x±s）表示，采用SPSS17．0统计软件进行单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果HE染色结果显示，SAP组胰腺及肺组织损伤程度均较SO组及SAP＋LP17组增高，其病理评分均较SO组及SAP＋LP17组高（P〈0．05）；免疫组化染色结果显示，SAP组肺组织巨噬细胞较SO组浸润明显；SAP组肺组织TREM-1 mRNA的表达水平较SO组及SAP＋LP17组均显著增高（P〈0．01或P〈0．05），IL-1β和TNF-α mRNA表达水平亦较SO组及SAP＋LP17组显著增高（P〈0．01或P〈0．05）。结论TREM-1在SAP急性肺损伤中表达显著增高，可能是SAP引起ALI机制中的一个重要炎症调节介质。LP17可以有效降低TREM-1的表达，减少炎症因子的释放，从而有利于减轻SAP引起的ALI。
- 祝文蕊党胜春张晨王坤沈耀王平江端礼荣侯雯跻张建新
- 关键词：急性肺损伤髓系细胞触发受体-1白细胞介素-1
