国家科技重大专项(2008ZX10201)
- 作品数：4 被引量：12H指数：1
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- 相关机构：中国疾病预防控制中心北京出入境检验检疫局更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因优化对基因工程丁型肝炎小抗原蛋白表达和纯化的影响
- 2012年
- 目的探讨基因优化对基因工程丁型肝炎（丁肝）小抗原蛋白表达和纯化的影响。方法依据GenBank上的丁肝小抗原原始基因，参照大肠埃希菌优势密码子谱进行优化；再分别将优化前后的两组基因进行常规原核表达，用SDS—PAGE电泳比较目的蛋白表达量及优势表达方式；进一步以柱层析进行纯化，再以Image Lab软件分析SDS-PAGE电泳条带，比较两组目的蛋白的纯度。结果SDS-PAGE显示，两组表达的目的蛋白均与预期相对分子质量大小一致，优化基因组的蛋白表达量高于原始基因组，且更倾向于可溶性表达；经柱层析纯化后，前者的目的蛋白纯度也明显高于后者，可达96．3％。结论基因优化可提高基因工程丁肝小抗原蛋白表达量，增加可溶性蛋白的比例；且表达产物更易纯化至较高纯度以供诊断使用。
- 丁军颖孟庆玲郭敏卓伊瑶苏秋东卢学新邱丰毕胜利
- 关键词：基因肝炎丁型
- 不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响被引量：11
- 2012年
- 目的确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础。方法在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS-PAGE电泳,经Image Lab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件。结果在25℃、29℃、33℃和37℃条件下,蛋白表达量无统计意义的差别;在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别;在以0.25、0.5、1、2和4mmol/L IPTG诱导时,表达量无统计意义的差别。当添加诱导剂前,菌种的OD600值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别。以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别;OD600值为0.542时,表达量次之;OD600值为0.384时,表达量最低。结论温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响;菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素;当菌种浓度在OD600值约为0.7～1.2时,以0.25mmol/L IPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件。该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5%。
- 丁军颖伊瑶卢学新苏秋东田瑞光邱丰毕胜利
- 关键词：基因工程抗原
- 诊断用丁肝抗原的基因优化及其蛋白表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白，探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化，合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体，构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的质粒正确；SDS—PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性。结论成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白，为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础。
- 丁军颖郭敏卓伊瑶苏秋东卢学新邱丰毕胜利
- 关键词：基因硫氧还蛋白
- 基因工程丁肝抗原的获取和鉴定
- 2012年
- 目的获取有生物活性的基因工程丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法合成人工编码的丁肝小抗原基因;以M48为载体,构建重组表达质粒;进行原核表达;以亲和层析纯化并以Western blotting和ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的表达质粒正确;SDS-PAGE电泳结果显示该蛋白与预期分子质量大小一致;Western blotting和ELISA结果显示该蛋白能与丁肝抗体特异性结合。结论成功获取了有生物活性的基因工程丁肝抗原蛋白,可以1∶1000稀释度作为包被抗原替代丁肝抗体诊断试剂成分,用于ELISA检测。
- 丁军颖邱丰苏秋东卢学新伊瑶毕胜利
- 关键词：基因工程蛋白表达
