湖南省自然科学基金(02JJY2025)
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
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- 穿透支原体P35蛋白对细胞因子的诱生作用被引量：3
- 2004年
- 目的 构建pQE31/p35原核细胞表达载体 ,研究穿透支原体 (Mpe)相对分子质量 (Mr)为 35× 10 3 蛋白 (P35 )诱生巨噬细胞 (MΦ)分泌TNF α、IL 1β、IL 6等细胞因子 (CKs)的作用。方法 PCR扩增p35全长 10 0 2bp基因片段 ,克隆至pQE31原核细胞表达载体 ,用PCR介导的突变将p35基因中两个“TGA”终止密码子定点突变为“TGG” ,使其在大肠杆菌 (E .coli)中编码表达色氨酸。IPTG诱导pQE31/p35在E .coli中表达目的蛋白rP35 ,用Ni NTASpin亲和纯化 ,Westernblot鉴定表达产物。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测P35刺激小鼠MΦ分泌TNF α、IL 1β和IL 6的量。结果 PCR扩增出约 1kb的DNA片段 ,克隆至pQE31载体 ,筛选到阳性克隆pQE31/p35 ,p35基因中两个“TGA”终止密码子成功突变成“TGG”。IPTG诱导pQE31/p35在E .coli中表达出Mr 约 37× 10 3 的蛋白质 ,Westernblot鉴定其为rP35。ELISA结果表明 ,P35能刺激小鼠MΦ分泌大量的TNF α、IL 1β和IL 6。结论 P35能诱导MΦ分泌TNF α、IL 1β、IL
- 朱翠明吴移谋万艳平余敏君
- 关键词：细胞因子IL-1ΒIPTG密码子
- 解脲脲原体脂质相关膜蛋白通过激活核因子κB调控诱导性一氧化氮合酶在小鼠巨噬细胞中的表达被引量：10
- 2006年
- 为探讨解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的分子机制,从解脲脲原体提取的脂质相关膜蛋白,刺激小鼠巨噬细胞,以RT_PCR、Western blot等方法分析iNOS的表达及NO的产生;用细胞免疫化学、间接免疫荧光及Western blot等方法检测核因子κB(NF_κB)的激活,另外检测了NF_κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及NF_κB激活的影响。结果表明,解脲脲原体的LAMPs通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白,且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,NF_κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX),可抑制NF_κB的激活及iNOS的表达。由于解脲脲原体的脂质相关膜蛋白通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS和产生NO,因而可能是一个重要的致病因素。
- 邓仲良吴移谋曾焱华陈丽丽余敏君
- 关键词：解脲脲原体脂质相关膜蛋白核因子ΚB诱导性一氧化氮合酶
- 穿透支原体脂质相关膜蛋白激活核因子κB诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶被引量：4
- 2004年
- 目的 了解穿透支原体潜在的致病性和穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的分子机制。方法 用从穿透支原体提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞 ,以RT PCR和Westernblot等方法分析诱导性一氧化氮合酶的表达和NO的产生。用间接免疫荧光和Westernblot检测经穿透支原体脂质相关膜蛋白处理的小鼠巨噬细胞中NF κB的激活和NF κB抑制剂PDTC(吡咯啉烷二甲基硫脲 )对iNOS的表达和NO产生的影响。结果 穿透支原体脂质相关膜蛋白以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO ,且能激活NF κB诱导巨噬细胞表达i NOS的mRNA和蛋白 ,其mRNA和蛋白的表达水平能被PDTC所抑制。结论 由于穿透支原体脂质相关膜蛋白能通过激活NF κB诱导巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶 ,因而可能是一个重要的致病因素。
- 曾焱华吴移谋余敏君朱翠明曾铁兵刘安元
- 关键词：巨噬细胞小鼠一氧化氮合酶体脂
- 穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导人单核细胞产生炎症性细胞因子被引量：6
- 2006年
- 穿透支原体（M.penetrans，Mpe）是从感染人类免疫缺陷病毒的患者球液中分离出来的，被称为艾滋病相关支原体。Mpe能依靠其特殊的顶端结构黏附和入侵宿主的红细胞、CD4^＋T细胞和巨噬细胞等，但关于其对宿主的致病性及其可能的致病机制还不十分清楚。脂质相关膜蛋白（LAMPs）是暴露在Mpe表面与周围环境各种成分不断相互作用因而影响机体的免疫系统的一种主要蛋白。我们的研究证实，Mpe LAMPs能诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶和产生一氧化氮。
- 吴移谋曾焱华邓仲良詹利生李忠玉陈超群
- 关键词：穿透支原体炎症性细胞因子人单核细胞诱导性一氧化氮合酶CD4^+T细胞
