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一磷酸腺苷激酶在肿瘤细胞增殖及自噬中的研究进展被引量：3: 2010年; 一磷酸腺苷激酶(AMPK)以异质三联体形式存在于所有真核细胞内,是维持机体能量稳态的感受器。AMPK的激活主要来自avicinD、LKB1等,而AMPK主要激活底物是TSC2、p53和p27kip1,其中TSC2是mTOR的负性调控元件,它的激活可以间接地抑制细胞增殖;p53也可抑制mTOR通路,中断细胞增殖;活化的p27kip1可以诱导自噬,促进细胞死亡,抑制肿瘤生长。这些都表明AMPK在肿瘤细胞增殖和自噬中发挥作用。由于在许多肿瘤细胞中可以发现失活的AMPK,因而研究AMPK与肿瘤发展及细胞自噬的关系,将可能为肿瘤治疗找到新靶点。; 耿琛琛李丹妮李丰; 关键词：肿瘤细胞增殖腺苷激酶 P27^KIP1 AMPK 抑制细胞增殖抑制肿瘤生长

hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达: 2010年; 目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。; 张红艳李彦姝王春玉苏楠李丹妮李丰; 关键词：蛋白质印迹融合蛋白

SCG10基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位: 2011年; 目的构建SCG10真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以人胎脑cDNA文库为模板,PCR扩增SCG10全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚肾HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-SCG10在HEK293细胞内定位。结果 SCG10全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小540bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为48kD。pEGFP-SCG10在细胞内定位以细胞浆为主,在细胞核少量表达。结论成功构建了SCG10全长基因真核表达载体,pEGFP-SCG10蛋白主要定位于HEK293细胞浆内。; 刘芙蓉李彦姝张红艳苏楠李丰; 关键词：WESTERNBLOT 质粒构建

乳腺癌细胞系中雌激素下调E-钙粘蛋白表达水平被引量：2: 2012年; 目的观察雌激素(E2)对乳腺癌MCF7细胞中E-钙粘蛋白基因(CDH)的调控。方法使用Western blot、Real Time PCR分别在蛋白和RNA水平上观察雌激素如何影响E-钙粘蛋白。使用双荧光素酶报告系统检测雌激素如何影响E-钙粘蛋白启动子活性。结果雌激素下调乳腺癌MCF7细胞中E-钙粘蛋白的蛋白和RNA水平,并且能够下调E-钙粘蛋白的启动子活性。结论雌激素下调乳腺癌细胞中E-钙粘蛋白基因,为进一步探讨乳腺癌发病机制提供有力证据。; 张红艳李彦姝王春玉王迪柯强李丰; 关键词：雌激素 E-钙粘蛋白

3*Flag-hPAK4重组质粒的构建及其在COS7细胞中的表达与定位被引量：1: 2011年; 目的:构建3*Flag-hPAK4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内的表达与定位,并纯化PAK4蛋白。方法:提取人乳腺癌细胞MCF-7 mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有3*Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到非洲绿猴肾成纤维细胞COS7中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测,同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察3*Flag-hPAK4在COS7细胞内定位。使用免疫沉淀的方法纯化PAK4蛋白。结果:hPAK4全长基因序列克隆到了真核表达载体3*Flag中,酶切鉴定片段为1 800 bp。Western blotting检测到了融合蛋白3*Flag-hPAK4的表达,分子质量约为68 kDa,3*Flag-hPAK4在COS7细胞中表达定位在细胞浆中,成功纯化了PAK4蛋白。结论:成功地构建了3*Flag-hPAK4真核表达质粒,同时鉴定了3*Flag-hPAK4融合蛋白的表达,并纯化了PAK4蛋白。3*Flag-hPAK4蛋白主要定位在细胞浆中。; 张红艳王春玉李彦姝王迪李丰; 关键词：免疫沉淀

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