湖北省科技攻关计划(2007AA301B26)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：田德英贾昱娴章述军刘曦王坤更多>>
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- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目湖北省科技攻关计划更多>>
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- 基因IV型HEV ORF3真核表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建基因IV型HEV ORF3的真核表达载体。方法从患者血清中提取HEV RNA,利用RT-PCR技术扩增HEV ORF3基因,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPC2真核表达载体,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPC2-ORF3。将重组质粒用脂质体法转染HepG2细胞,Western blot分析鉴定EGFP-ORF3融合蛋白的表达。结果真核表达质粒转染HepG2细胞,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带。结论成功构建pEGFPC2-ORF3真核表达质粒,在HepG2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定了基础。
- 章述军田德英刘曦贾昱娴
- 关键词：HEV真核表达绿色荧光蛋白
- 武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型分析被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型。方法:采用逆转录-巢式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测162份急性戊型肝炎患者血清HEV RNA,并对PCR产物进行测序及同源进化分析。结果:武汉地区急性戊型肝炎患者男女比例为4.40∶1,30～59岁年龄段占71.60%,162份急性戊型肝炎患者血清有41份HEVRNA阳性,阳性率为25.31%,同源进化分析表明41株HEV毒株均属于基因Ⅳ型,各毒株间的核苷酸同源性为84.7%～100%,基因Ⅳ型又可进一步分为5种亚型,即Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E,各亚型内部的核苷酸同源性分别为91.3%～100%、98.0%、92.0%～100%、98.0%～100%、100%,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株的核苷酸同源性分别为92.0%～97.3%、94.7%～99.3%和91.3%～96.0%,Ⅳ-D与北京株的核苷酸同源性为95.3%～96.7%。结论:武汉地区急性戊型肝炎以男性多见,好发于30～59岁年龄段,且均由基因Ⅳ型HEV引起,基因Ⅳ型又可进一步分为Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E 5种亚型,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株亲缘关系较近,Ⅳ-D与北京株亲缘关系较近。
- 朱永豹黄元成田德英张振纲王文秀
- 关键词：基因型
- 188例散发性急性戊型肝炎临床分析被引量：8
- 2009年
- 目的:总结散发性急性戊型肝炎(AHE)的临床特征。方法:回顾性分析188例急性戊型肝炎患者的临床资料。结果:188例散发性急性戊型肝炎以男性患者(83%)多见。临床表现以黄疸(81.9%)、乏力(70.2%)、纳差(64.4%)和腹胀(24.5%)最为常见。男性黄疸发生率和总胆红素(TBil)峰值均显著高于女性(P均<0.01)。老年组(≥60岁)γ-谷氨酰转移酶(GGT)峰值、凝血酶原活动度(PTA)最低值、胆碱酯酶(CHE)最低值和血清白蛋白(ALB)最低值均显著低于非老年组(<60岁)(P均<0.05)。老年组重型AHE发生率和死亡率均高于非老年组(P均<0.01)。结论:散发性AHE以男性多见,老年组患者可能由于其肝脏储备功能差而导致重型AHE发病率和死亡率高于非老年组患者。
- 章述军田德英陈淼周健王坤贾昱娴刘曦
- 关键词：戊型肝炎老年人
- Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1真核表达质粒的构建与鉴定
- 2009年
- 目的:构建表达Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的LO2细胞系。方法:从猕猴胆汁提取RNA,利用RT-PCR及PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPN1真核表达载体,转化DH5a菌株感受细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pEGFPN1。将阳性克隆用脂质体法转染LO2细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定ORF3-pEGFPN1融合蛋白的表达。结果:真核表达质粒转染LO2细胞,SDS-PAGE显示在39.8kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带。结论:成功构建ORF3-pEGFPN1真核表达质粒,能在LO2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定基础。
- 刘曦田德英章述军贾昱娴
- 关键词：肝炎病毒戊型真核表达融合蛋白
