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抗原特异TCR α和β链基因克隆及分子空间结构预测被引量：1: 2011年; 目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。; 尹青松谭获陈少华杨力建李萡叶静梅李扬秋; 关键词：T细胞受体同源建模弥漫大B细胞淋巴瘤

TCR Vα23-Vβ13基因修饰T细胞及其特异性细胞毒活性研究被引量：4: 2011年; 目的:分析弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)抗原特异T细胞受体(TCR)Vα23-Vβ13基因修饰T细胞后的体外特异性杀伤活性。方法:扩增并克隆已鉴定的DLBCL患者外周血中单克隆增殖T细胞的TCR Vβ13和TCR Vα23基因全长序列,构建TCR Vβ13-IRES-TCR-Vα23双基因重组质粒,经核转染的方法将其转染正常人T细胞,通过real-time PCR和Western blotting检测TCR Vβ13和TCR Vα23这2个外源基因在mRNA和蛋白水平的体外表达情况,并对TCR转基因T细胞进行体外细胞毒性检测。结果:经酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染正常人T细胞后,TCR Vβ13和TCR Vα23在mRNA及蛋白水平实现了共表达。转染后3 d,TCR转基因T细胞对DLBCL细胞株Toledo细胞的杀伤活性明显高于非特异细胞株Raji细胞和Molt-4细胞,显示出特异性细胞毒活性。结论:成功构建DLBCL相关抗原特异的TCR Vβ13-IRES-TCR Vα23双基因真核表达质粒;TCR基因修饰T细胞可获得特异性细胞毒活性。; 尹青松谭获杨力建陈少华查显丰叶静梅李扬秋; 关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤细胞毒活性

甲氰咪呱对K562细胞诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响被引量：3: 2009年; 目的研究甲氰咪呱(cimetidine)对K562细胞体外诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响。方法体外分别将甲氰咪呱、K562细胞、甲氰咪呱+K562细胞与正常人的脐带血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)混合培养2周,检测诱导增殖T细胞的特异杀伤活性,同时利用RT-PCR基因扫描技术分析培养后T细胞的TCR Vβ亚家族谱系的选择性利用和克隆性增殖情况。结果经甲氰咪呱、K562细胞、甲氰咪呱+K562细胞诱导培养2周后,各组均不同程度诱导细胞增殖,其中甲氰咪呱联合K562细胞诱导组的T细胞对K562细胞的特异性杀伤作用显著增强(P<0.01)。3组均呈现不同程度的T细胞TCR Vβ亚家族选择性利用,均有TCR Vβ21亚家族呈克隆性增殖。结论甲氰咪呱可协助增强bcr-abl抗原刺激的特异性抗CML T细胞作用。; 田红霞林晨陈少华杨力建江振友高珂郜世隽李扬秋; 关键词：甲氰咪呱 T细胞受体VΒ基因脐血

EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达被引量：1: 2008年; 目的构建EBV特异性细胞毒T细胞(CTL)相关的TCR Vα-pIRES-TCR Vβ真核双表达质粒。方法通过RT-PCR和基因扫描技术分析EBV特异性CTL克隆的T细胞受体(TCR)Vα和Vβ谱系表达情况及T细胞克隆性,确定其优势表达的TCR Vα15和TCR Vβ1亚家族基因的核苷酸序列(包括CDR3互补决定区),PCR扩增出TCR Vα15和TCR Vβ1基因后,分别定向克隆入真核双表达载体pIRES,构建双顺反子重组质粒TCR Vα-pIRES-TCR Vβ,转基因技术将其转染A549细胞和Molt4细胞,通过RT-PCR、实时定量PCR、流式细胞术和蛋白印迹分析检测TCR Vα15和TCR Vβ1基因的表达。结果酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染重组质粒的细胞能够表达TCR Vα15和TCR Vβ1的mRNA及蛋白。结论成功构建了EBV特异性的TCR Vα-pIRES-TCR Vβ双顺反子真核表达质粒,并在体外实现了共表达,为进一步的实验研究奠定了基础。; 吴秀丽李扬秋朱康儿杨力建陈少华Piotr GrabarczykGrzegorz K.PrzybylskiChristian A.Schmidt; 关键词：EBV 细胞毒T细胞双顺反子

特异T细胞免疫与肺癌被引量：2: 2010年; 特异性T细胞免疫是机体抗肿瘤和抗病毒感染等的重要防御能力。在肿瘤患者中，T细胞免疫的强弱与肿瘤的发生发展和预后密切相关，深入了解其细胞免疫特点，对于预测预后和设计相应的免疫治疗方案有重要意义。; 李扬秋吴一龙; 关键词：肺癌 T细胞免疫 T细胞受体

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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z114)