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福建省科技重大专项(2004YZ01-1): 作品数：12 被引量：90H指数：6; 相关作者：夏宁邵张军陈毅歆葛胜祥管轶更多>>; 相关机构：厦门大学汕头大学北京万泰生物药业股份有限公司更多>>; 发文基金：福建省科技重大专项教育部跨世纪优秀人才培养计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立被引量：10: 2006年; 利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景。; 葛胜祥徐飞海罗海峰陈毅歆郭永利陈自敏王嘉罗文新吴婷张军陈鸿霖管轶夏宁邵; 关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素单克隆抗体

应用离心方法提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导实验效率被引量：4: 2007年; 重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体已获得了日益广泛的应用。为进一步提高转导实验的效率,本研究利用已构建的带有CMV启动子-增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达盒的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1细胞中探索了应用离心方法提高转导实验效率的可行性。结果显示离心方法可显著提高单位时间内重组杆状病毒对哺乳动物细胞的转导效率,同时不会对靶细胞造成损伤。通过对离心时间、离心后孵育时间、病毒上清的稀释缓冲液的进一步摸索优化,结果显示病毒上清以PBS为稀释缓冲环境室温600g水平离心1h即可获得高水平的转导效率,优于在PBS环境中27℃孵育8h的效果。该方法可在获得高转导效率的同时显著缩短实验时间,具有快捷、高效、低损伤的特点,可作为一种常规操作方法用于日常实验。本研究进一步应用该方法对多种不同来源和类型的哺乳动物细胞株进行基因转导,结果显示该方法可适用于多数不同种属和组织来源的哺乳动物细胞,其中对贴壁细胞的效果最为显著。; 程通杨炳春许辰煜张涛杜海莲王颖彬张军夏宁邵; 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞转导离心

一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性被引量：4: 2007年; 以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株，对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析，结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应，而对非H5亚型标准病毒株均不反应，说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗，并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位。并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景。; 罗海峰陈毅歆陈自敏郭永利王嘉张军陈鸿霖管轶夏宁邵; 关键词：禽流感病毒 H5N1 单克隆抗体血凝素

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较被引量：4: 2007年; 利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂“H5-HA（Ag）Dot-ELISA（H5-Dot）”对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测，结果：①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别，气管拭子的检出率最高，泄殖腔拭子次之，粪便拭子最低（P〈0．05），因此建议现场采样时应尽可能采集气管拭子标本；②陆禽标本检出率显著高于水禽标本（P〈0．05），对病毒培养阳性的陆禽气管拭子检出率达80％（95％CI：70．6％～87．8％），对水禽气管拭子标本的检出率为38％（95％CI：26．9％～49．4％），可能与标本中病毒滴度高低有关；③有症状与无症状陆禽标本的检出率无显著差异。另外，H5-Dot试剂对333份非H5病毒气管拭子标本的特异性为99．4％（95％CI：97．9％～99．9％）。这些结果表明，H5-Dot是一种较为可靠的H5亚型禽流感病毒早期快速检测方法，在缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的H5N1禽流感病毒防控第一线具有重要推广价值。; 陈毅歆罗海峰徐飞海葛胜祥陈自敏郭永利王嘉罗文新吴婷张军陈鸿霖管轶夏宁邵; 关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素拭子

高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用被引量：20: 2005年; 以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。; 陈毅歆罗海峰葛胜祥郭永利彭耿王嘉陈鸿霖张军管轶夏宁邵; 关键词：血凝素单克隆抗体酶联免疫吸附试验

高致病性禽流感病毒H5N1中和抗体的单链抗体构建与活性鉴定被引量：4: 2007年; 在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中,10F7scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性,而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中,10F7scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。; 方钟罗文新王明桥陈瑛炜张军陈鸿霖管轶夏宁邵; 关键词：单链抗体血凝抑制

一种联合检测乙型肝炎病毒前S1抗原与核心抗原方法的建立及其与病毒核酸检测结果的一致性被引量：13: 2007年; 本研究以与血清中HBV DNA含量高度相关的两种HBV抗原（前S1抗原与核心抗原）为靶标,建立了联合检测这两种HBV核酸相关抗原（NRAg）的双抗体夹心法ELISA试剂。对系列稀释血清的检测表明,该试剂的平均分析灵敏度为103.2基因组拷贝/mL（95%可信限102.2-4.2基因组拷贝/mL）,显著高于前S1抗原或核心抗原的单独检测。对994份HBsAg阴性血清的检测结果表明NRAg ELISA的特异性为99.7%（95%可信限：99.1%-99.9%）。对271份临床慢性肝炎血清进行检测,结果NRAg ELISA与HBV DNA结果的总符合率达96.3%（95%可信限：93.3%-98.2%）,NRAg ELISA的读值/临界值比（S/CO）与HBV基因组拷贝数呈正相关。利用NRAg试剂,发现了1例HBsAg“a”抗原表位突变的变异株。这些结果显示HBV NRAg ELISA与HBV DNA具有高度相关性,并能够检测出HBsAg抗原变异株,有望成为HBsAg变异株筛选的有力工具,并为广大基层医疗单位提供一种便捷的替代HBV DNA定性检测的手段。; 袁权葛胜祥闫强赵昱熊君辉张军夏宁邵; 关键词：乙型肝炎病毒

人乳头瘤病毒16型假病毒中和实验的建立和初步应用被引量：15: 2006年; 探讨了应用多质粒磷酸钙共转染方法在293FT细胞中生产HPV16(human papillomavirus type 16)假病毒。蛋白印迹检测显示在转染后细胞的裂解上清中具有很好的L1蛋白活性,通过透射电镜可观察到形态与天然病毒粒子相似的假病毒颗粒。对293FT细胞的感染实验显示,该假病毒可有效将EGFP报告质粒导入靶细胞中进行表达,经测定其滴度约为2×107TU/mL。通过与4株HPV16对照单抗的中和实验证明该假病毒可有效应用于中和实验。应用该方法从18株抗HPV16L1的单克隆抗体中鉴定获得了2株中和单抗3D10、PD1。所建立的HPV16假病毒生产和中和实验方法具有快速高效、低成本和易于检测的优点,适于进行较大规模应用,为快速准确鉴定HPV16中和单抗和候选疫苗的免疫保护效果提供了有效手段。; 卢五迅程通李少伟潘晖榕沈文通陈毅歆张涛郑舟张军夏宁邵; 关键词：人乳头瘤病毒假病毒

戊型肝炎病毒基因1型和基因4型中和表位区域分子差异研究被引量：7: 2007年; 戊型肝炎病毒（HEV）根据易感宿主的差别可以分为两大类：一类只分离自人的H（Human）类，包括HEV-1和HEV-2；一类为人畜共患的Z（Zoonosis）类，包括HEV3和HEV-4。本研究通过比较这两类HEV的ORF2aa368-606区段，发现存在4个类保守的差异位点，均位于HEV的主要中和表位区域aa459～606，分别是aa483、aa492、aa497和aa599；对这四个位点进行定点替换突变，以一组能够捕获HEV-1和／或HEV-4的单克隆抗体比较各种突变体的免疫反应性，结果表明仅aa497的差异造成了这两类HEV中和表位构象的部分差异，提示aa497及其相关的病毒表面结构差异在H类和Z类HEV宿主选择中可能扮演重要角色。; 郭清顺葛胜祥熊君辉闫强李少伟顾颖徐平东史维国张军夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒中和表位

抗戊型肝炎病毒单克隆抗体识别表位的初步研究被引量：5: 2008年; 通过Western blot、体外捕获PCR、ELISA阻断实验及合成的多肽库等方法，对23株抗戊型肝炎病毒（HEV）单克隆抗体（单抗）识别HEVORF2表位的作用进行系统研究。结果显示，7株线性单抗识别表位都位于ORF2aa408-458之间，16株构象型单抗识别表位都定位于ORF2aa459-606之间，大部分构象型单抗识别表位都在天然病毒表面。对这些单抗识别表位系统地了解将为HEV疫苗、诊断、病毒受体和病毒感染机制等方面的研究提供重要工具。; 熊君辉郭清顺葛胜祥顾颖陈毅歆苗季杜海莲史维国张军夏宁邵; 关键词：表位

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