中国博士后科学基金(2005038032)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：倪晋仁朱顺尼刘冬啟朱顺妮更多>>
- 相关机构：北京大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 青枯雷尔氏菌GMI1000菌株龙胆酸1,2-双加氧酶活性中心关键氨基酸残基的鉴定(英文)
- 2007年
- 生物信息学分析表明,位于青枯雷尔氏菌GMI1000菌株的染色体上的读码框RSc1087可能编码一个龙胆酸1,2-双加氧酶.本研究克隆、表达了该基因,并通过亲和层析对该基因表达产物进行了纯化.酶学测试结果证实,该基因编码的正是龙胆酸1,2-双加氧酶.SDS-PAGE结果表明,该酶亚基分子量约为38×103.基因的定点突变揭示105位、107位和146位组氨酸残基是该酶活性中心的关键氨基酸残基.
- 刘冬啟朱顺尼倪晋仁
- 关键词：定点突变
- 青枯雷尔氏菌龙胆酸1,2-双加氧酶基因的克隆、表达和酶性质的研究(英文)
- 2007年
- 本研究克隆、表达了青枯雷尔氏菌GMI1000菌株中编码龙胆酸1,2-双加氧酶的基因,并通过亲和层析对该酶进行了纯化,SDS-PAGE结果表明该酶亚基约为38kDa。该酶的最适反应温度和最适pH分别为30℃和7.5。该酶的Km为56μmol/L,pI为4.6～4.8。纯化后的龙胆酸1,2-双加氧高度不稳定:4℃下放置72h即失去85%的酶活。甘油和β-巯基乙醇可稳定该酶酶活,在添加10%(体积比)甘油至酶液(50mmol/L,pH7.3的磷酸盐缓冲液保存)后,-20℃保藏2周后均能检出明显的酶活。0.1～1mmol/LFe2+可以激活或者稳定该酶的酶活。Na+,K+,Mg2+和Ca2+(分别为1～2mmol/L)对该酶的酶活无明显的影响。Mn2+,Zn2+和Fe3+的添加量超过2mmol/L时,酶活急剧下降。1mmol/L的Cu2+即使该酶失去酶活。
- 刘冬啟朱顺妮倪晋仁
- 关键词：酶性质
