广西大学博士科研启动基金(X041109)
- 作品数：5 被引量：38H指数：4
- 相关作者：石德顺陆凤花韦英明韦精卫杨素芳更多>>
- 相关机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西大学博士科研启动基金国家高技术研究发展计划广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 不同来源的供体细胞对水牛体细胞核移植效果的影响被引量：6
- 2005年
- 采用电融合方法,探讨不同来源的供体细胞对水牛核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞,在含有5μg/mL细胞松弛素B的操作液中进行去核,然后将经0.1μg/mLAphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9d的水牛不同来源的供体细胞,注射到去核的卵母细胞卵周隙中,电融合形成重构胚。重构胚经5μmol/L离子霉素激活处理5min,并在2mmol/L的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中培养7～9d,观察其卵裂和胚胎发育情况。结果发现,来自水牛胎儿耳部或腹部组织块的成纤维细胞用作供体细胞,其重组胚的融合率及体外发育能力差异不显著(P>0.05),且细胞培养方法(组织块法或酶消化法)对其核移植效果没有影响;来自编号011010的胎儿耳皮成纤维细胞重组胚的囊胚发育率显著高于来自编号030323和030410细胞(31.45%vs10.96%和14.49%,P<0.05),但它们的融合率、卵裂率无显著差异(P>0.05)。以上结果表明:经不同培养方法培养的细胞或来自身体不同部位的组织的成纤维细胞均可作为核移植研究的供体细胞,但是水牛体细胞核移植效果受供体的个体差异的影响。
- 陆凤花石德顺谢英韦英明潘红平韦精卫卞桂华成俊萍王晓丽
- 关键词：水牛胎儿成纤维细胞核移植
- 细胞松弛素B对水牛体细胞核移植效果的影响
- 2009年
- 以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞，采用电融合方法，探讨细胞松弛素B（CB）对水牛体细胞核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞去核后，将经0．1mg／L Aphidicolin（APD）＋0．5％FBS培养2～9d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合（100V／mm，15μs，电脉冲3次）构建核移植重构胚。重构胚经化学激活后（5μmol／L）离子霉素5min，2mmol／L 6-DMAP3h）培养，7～9d评定其胚胎发育能力。结果显示，在含CB（3mg／L）的融合液中进行电融合后，核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组（不合CB）相比均无显著差异（P〉0．05）；核移植重组胚激活前用含CB（6mg／L）的培养液培养1h，其激活后的存活率（97．52％）和体外囊胚发育率（22．09％）均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率（93．87％）和囊胚率（13．25％，P〈0．05）；重组胚经离子霉素激活5min后，在6-DMAP＋CB中培养3h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3h的分裂率（65．37％vs78．92％，P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（11．19％vs10．96％，P〉0．05）。这表明水牛体细胞核移植电融合时，融合液中不添加CB，而核移植重组胚激活前经CB培养处理后，有利于胚胎的进一步发育，但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率。
- 陆凤花覃琦丽黄华罗婵成俊萍石德顺韦英明
- 关键词：水牛体细胞核移植电融合细胞松弛素B
- 水牛皮肤成纤维细胞的分离与体外培养被引量：11
- 2005年
- 探讨水牛成纤维细胞的分离与传代培养方法。组织块培养法培养的成纤维细胞原代生长较慢,需12天左右方可汇合形成单层,而酶消化法培养的成纤维细胞原代生长相对生长快,仅需8天便可汇合形成单层。两种方法传代细胞的生长速度相似,仅需4￣5天就可汇合形成单层。通过体细胞的核型分析发现,成纤维细胞在传代培养过程中的核型变化不大,66.67%￣81.67%的细胞具有正常的二倍体核型,各代之间无显著差异。结果表明,水牛成纤维细胞均能稳定地进行传代培养。
- 陆凤花石德顺牛向丽房慧伶杜玉兰王晓丽邵小云
- 关键词：水牛成纤维细胞核型皮肤成纤维细胞体外培养传代培养核型分析
- 水牛体细胞核移植的研究被引量：7
- 2005年
- 系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素 ,并初步建立了水牛体细胞核移植的一整套程序。体外成熟培养2 2～ 2 4 h的水牛卵母细胞去核后 ,将经血清饥饿 (0 .5 % FBS)培养 2～ 9d、0 .1mg/L Aphidicolin(APD)培养 +0 .5 %FBS培养 2～ 9d或一般培养法 (10 % FBS)培养的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞 ,直接注射到去核的卵母细胞质中 ,或注射到卵周隙中再经电融合 (10 0 V/mm ,15μs,电脉冲 3次 )构建重构胚。重构胚经化学激活后 (5μmol/L离子霉素 5 min,2 m mol/L 6 - DMAP3h)培养 7～ 8d,评定其胚胎发育能力。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经 0 .1mg/LAPD+0 .5 % FBS培养处理后的重组胚卵裂率 ,均极显著高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞 (P<0 .0 1) ,但囊胚发育率无显著差异 (P>0 .0 5 )。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经 0 .1mg/L APD+0 .5 % FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异 (6 3.0 6 %比 5 8.70 % ,P>0 .0 5 )。以水牛颗粒细胞为核供体时 ,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法 (P<0 .0 5 ) ,囊胚发育率无显著差异 (P>0 .0 5 )。培养 3代和 6代的水牛颗粒细胞以及培养 6代和 10代的耳皮成纤维细胞 ,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;以这
- 陆凤花石德顺房慧伶韦英明杨素芳韦精卫牛向丽
- 关键词：颗粒细胞核细胞水牛囊胚发育率胞质
- 不同融合条件对水牛体细胞核移植效果的影响被引量：14
- 2005年
- 本研究主要探讨水牛体细胞核移植电融合的影响因素,以摸索出适合水牛体细胞核移植的电融合条件。结果显示:直流脉冲前施加2 .0 V交流电波能显著提高Φ<1 5 μm供体细胞的融合率及胚胎的卵裂率( P<0 .0 5 ) ,但对其存活率和囊胚率以及2 0 μm<Φ<3 0 μm供体细胞的融合率、胚胎的存活率、卵裂率及随后的囊胚发育率无显著影响( P>0 .0 5 ) ;然而无论施加交流电与否,直径2 0～3 0 μm供体细胞的囊胚率均显著高于直径小于1 5 μm供体细胞的囊胚率( P<0 .0 5 )。注核操作液中添加聚乙烯醇( PVA)对重组胚的融合率和卵裂率没有显著影响( P>0 .0 5 ) ,但激活后重组胚的存活率( 95 .83 %)及囊胚发育率( 1 1 .3 2 %)显著高于对照组的重组胚存活率( 74.77%)和囊胚率( 3 .75 %,P<0 .0 5 )。结果表明:( 1 )直流脉冲前施加2 .0 V交流电波能提高直径较小供体细胞的融合效果;( 2 )注核操作液中添加0 .1
- 陆凤花石德顺韦英明谢英陈自宏韦精卫杨素芳胡冰邵晓云孟凡丽
- 关键词：水牛体细胞核移植电融合
