天津市自然科学基金(033604911) 作品数:14 被引量:174 H指数:8 相关作者: 杜荣骞 李德森 郝友进 安春菊 耿华 更多>> 相关机构: 南开大学 更多>> 发文基金: 天津市自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 环境科学与工程 农业科学 更多>>
家蝇幼虫体内一种抗菌蛋白的分离纯化 被引量:4 2007年 30%H2O2诱导家蝇幼虫90分钟,继续饲喂24小时后利用硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25和Sephadex G-75两步凝胶过滤、CM-Sepharose Fast Flow弱阳离子交换的纯化方法,得到一种电泳纯的抗菌蛋白,经过VDS凝胶扫描得到其分子量为28kDa,命名为AP28。抑菌活性分析表明,AP28对实验中涉及的大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都有明显的抑制作用。 渠晖 郝友进 荆迎军 李德森 杜荣骞关键词:蛋白质分离 家蝇 抗菌蛋白 壳聚糖的抑菌活性分析及其抑菌机理的研究 被引量:58 2006年 制备10个分子量的壳聚糖,对6种细菌作抑菌实验。抑菌实验结果表明分子量在14.9~297.6ku的壳聚糖有很强的抑菌活性,此活性有随pH的降低而增加的趋势,pH5.5时最低抑菌浓度为0.03%~0.06%,Ca^(2+)、Mg^(2+)可显著降低壳聚糖对革兰阴性菌的抑菌作用。壳聚糖的抑菌机理有可能影响细胞膜的通透性。对实验结果的方差分析表明,壳聚糖的不同分子量、pH值和金属离子等外界因素都是壳聚糖抑菌活性的极显著影响因素,但菌株本身才是壳聚糖抑菌活性大小的最关键因素。 荆迎军 郝友进 渠晖 单颖 李德森 杜荣骞关键词:壳聚糖 抑菌 家蝇幼虫壳聚糖的抑菌活性及影响因子 被引量:8 2006年 为研究昆虫壳聚糖的抑菌活性及影响因子,由家蝇Muscadomestica幼虫制备了10个不同分子量的壳聚糖,在不同条件下分别对6种细菌作抑菌实验,并通过测定细菌细胞膜和细胞壁的透性初步探讨了壳聚糖的抑菌机理。结果表明,分子量在21~251kD的壳聚糖有很强的抑菌活性,抑菌活性呈现随pH的降低而增加的趋势,pH5.5时最低抑菌浓度在0.03%~0.06%之间,Ca2+和Mg2+能够显著降低壳聚糖的抑菌作用。通过对实验结果的方差分析表明,壳聚糖的不同分子量、pH值和金属离子等外界因素都是壳聚糖抑菌活性的极显著影响因素,而菌株本身也是极显著影响因素之一。壳聚糖能够增加细胞膜通透性,造成细胞内容物的外泄。 荆迎军 单颖 李德森 杜荣骞关键词:家蝇 壳聚糖 抑菌活性 抑菌机理 通透性 家蝇幼虫中与抗菌功能相关的蛋白和多肽的分析 被引量:12 2004年 目的 研究家蝇幼虫体内与抗菌功能相关的蛋白和多肽。方法 对家蝇 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激、超声 4种处理 ,于处理后 6、16、2 4、4 8、6 5h分别收集提取耐热水溶蛋白 ,比浊法测定抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白和多肽。结果 4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质 ,其中表观分子量为 2 0kDa、2 2kDa的蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌均有抗菌作用 ,13kDa、16kDa、2 6kDa蛋白只对上述两种菌中的一种有作用 ,37kDa、4 4kDa的蛋白对抗菌作用具有显著负贡献。结论 家蝇幼虫经过诱导后 ,会有多种与抗菌活性相关的蛋白和多肽开始表达或加强表达 ,它们彼此合作 ,共同建立一个完整的防御体系。 安春菊 李德森 杜荣骞关键词:家蝇幼虫 H_2O_2对家蝇蛹内部几种酶活性的影响 2007年 目的研究外源H2O2对家蝇蛹内与抗性相关的几种酶活性的影响。方法通过H2O2诱导,测定家蝇蛹内过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)以及多酚氧化酶(PPO)的活性变化。结果H2O2处理后蛹内CAT和AsA-POD的活性变化规律与处理前差别不大;POD活性在H2O2处理后12h内出现活性高峰,约为对照组的2.5倍,此后稍高于对照组,最后基本与对照组持平;PPO活性在处理后12h内与对照组相当,此后活性骤然升高,处理后24h达到对照组的2.13倍,然后变化速度减慢,但一直维持在对照组的1.3倍左右,48h后活性开始下降。结论H2O2对CAT和AsA-POD的活性影响较小,对POD和PPO的活性有一定的影响。 渠晖 郝友进 李德森 杜荣骞关键词:家蝇 过氧化氢酶 过氧化物酶 抗坏血酸过氧化物酶 多酚氧化酶 凝胶过滤层析参数对家蝇蛋白粗提液分离效果的影响 被引量:12 2005年 考察了凝胶过滤介质、层析柱直径、柱床高度和洗脱流速对家蝇Muscadomestica蛋白粗提液分离效果的影响 ,结果表明 :凝胶过滤介质种类、层析柱直径、柱床高度、洗脱流速均能不同程度地影响家蝇蛋白粗提液的分离效果。在实验范围内 ,选择1 3cm直径、4 0cm柱床高度的SephadexG 75 ,以 0 4mL min的流速洗脱时 ,对家蝇蛋白粗提液的分离效果比较理想。 安春菊 李德森 赵素然 杜荣骞关键词:家蝇 凝胶过滤层析 昆虫抗菌肽的结构和功能研究现状 被引量:18 2004年 昆虫抗菌肽是昆虫血淋巴中的一类活性肽。在昆虫感染病菌或体壁受到损伤的情况下其脂肪体能迅速合成一系列抗菌活性物质并释放到血淋巴中发挥作用,抑杀多种致病菌、真菌、病毒等,但不破坏生物体的正常细胞。对昆虫抗菌肽的结构特征、生物活性及抗菌肽分子的作用模式的最新研究进展作了综述。 耿华 安春菊 郝友进 李德森 杜荣骞关键词:致病菌 正常细胞 昆虫抗菌肽 脂肪体 血淋巴 体壁 家蝇幼虫抗菌活性物质相关基因表达情况 被引量:2 2007年 研究了家蝇幼虫体内抗菌活性物质相关基因诱导后的表达情况。选择30%H2O2诱导家蝇幼虫90 min,应用半定量RT-PCR的方法,以组成型表达的β-actin基因作为内参照,对抗菌活性物质基因cecropin,defensin,dipteri-cin,attacin和溶菌酶基因lysozyme在诱导后的表达情况进行了初步探索。Cecropin、defensin和attacin基因在家蝇幼虫体内都是诱导表达型基因,分别在诱导后2 h和6 h达到活性高峰。而diptericin和lysozyme两个基因表达量一直较高,在诱导后6 h表达量达到最大水平,随后开始下降,到诱导后36 h时还能检测到基因有较高水平的表达。 渠晖 郝友进 荆迎军 李德森 杜荣骞关键词:家蝇 抗菌活性物质 半定量RT-PCR 家蝇幼虫体内过氧化物酶过氧化氢酶抗坏血酸过氧化物酶与抗药性的关系——I.H_2O_2对酶活性的影响 被引量:3 2004年 采用室内饲养试验方法,研究了H2O2对家蝇幼虫体内过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)活性的影响。结果表明,外源H2O2能不同程度地影响以上3种酶的活性,但变化规律却有明显差异:CAT活性变化的基本趋势是随着龄期的增加而递增,处理组最大值分别是对照组的1.2、1.26、1.47倍,另外在1、2龄幼虫中CAT活性出现了对照比处理高的现象,而3龄幼虫则没有出现。经H2O2处理后的1、3龄幼虫体内的POD出现了2个活性峰,1龄幼虫被处理后,在第1个活性峰出现的时间内对照明显比处理高,且持续时间约为5h,然后酶活性骤然上升,活性高峰值是对照组的6.8倍;2龄幼虫只有1个活性峰,是对照组的3.68倍;3龄幼虫体内的POD也有2个活性峰出现,分别是对照组的4.9、2倍。AsA-POD活性在整个实验过程中没有出现对照高于处理的现象,1、2龄幼虫经过处理后出现了2个活性峰,分别是对照组的1.3、1.3倍和2.08、1.73倍,3龄幼虫则只有1个活性峰,是对照组的1.8倍。 郝友进 渠晖 安春菊 耿华 李德森 杜荣骞关键词:家蝇 过氧化氢酶 过氧化物酶 抗坏血酸过氧化物酶 抗药性 家蝇幼虫抗菌相关蛋白/多肽的诱导及抗菌活性分析 被引量:41 2003年 对家蝇Muscadomestica 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激和超声 4种处理 ,并于处理后不同时间分别收集提取家蝇幼虫体内耐热总蛋白 ,比浊法测定其抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白 多肽。结果表明 ,4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质 ,其中表观分子量为 2 2kD的蛋白对藤黄微球菌和大肠杆菌均有抗菌作用 ,5 0kD ,13kD ,2 6kD ,7kD的蛋白抗菌活性具有专一性。还发现一种 37kD的蛋白对抗菌活性有负作用 。 安春菊 石明 郝友进 盛长忠 耿华 李德森 杜荣骞关键词:家蝇 抗菌活性