河南省科技攻关计划(2011A230003)
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
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- 相关机构：河南科技学院新乡医学院河南省动物免疫学重点实验室更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划“十一五”国家科技支撑计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 雌二醇人工抗原的合成及间接竞争ELISA标准曲线的建立被引量：2
- 2014年
- 琥珀酸酐法将雌二醇（E2）衍生化,再用碳二亚胺法（EDC）将半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,E2与BSA偶联比为12.3∶1。将E2-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗E2杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。结果表明,筛选的3株杂交瘤细胞E2D5、E3F7和E4A6抗体效价均在8×104以上。以E3F7细胞株建立间接竞争ELISA（icELISA）标准曲线,其线性范围为0.06~66.2μg/L,检测限和IC50值分别为0.03和0.76μg/L,除与去氢甲睾酮22.9%的交叉反应率外,与其他化合物无交叉反应。本研究为开发ELISA试剂盒,检测食源性动物产品中E2残留奠定基础。
- 姜金庆李新朋李艺
- 关键词：雌二醇人工抗原单克隆抗体间接竞争ELISA
- 氯睾酮人工抗原的合成与鉴定被引量：2
- 2013年
- 采用琥珀酸酐法将氯睾酮(CLO)衍生化,再用碳二亚胺法(EDC)将氯睾酮的半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,CLO与BSA偶联比为16.5∶1.利用CLO-BSA免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗血清,间接ELISA结果表明:3只小鼠抗体效价分别为1.6×104、3.2×104和1.6×104;间接竞争ELISA检测2号鼠抗血清的灵敏度为64 ng/mL.氯睾酮人工抗原的合成为开发ELISA试剂盒检测食源性动物产品中CLO残留奠定基础.
- 王方明邹小娟程亮姜金庆
- 关键词：人工抗原
- 诺氟沙星单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2011年
- 采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,紫外扫描和红外光谱图表明人工抗原偶联成功。采用细胞融合技术筛选抗NOR单克隆抗体(NORmAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备NORmAb,建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线。结果表明,筛选的3株杂交瘤细胞分泌的抗体为IgG1亚型,具k轻链;建立的icELISA标准曲线在PBS中的的线性检测范围为0.04～43.6ng/mL,IC50值为0.62ng/mL,检测限(LOD)为0.02ng/mL;抗体与环丙沙星(87.2%)、培氟沙星(76.9%)、依诺沙星(66.8%)、恩诺沙星(48.6%)和洛美沙星(36.6%)有较高的交叉反应率;禽肉基质中NOR添加回收率满足检测要求。
- 李超英姜金庆
- 关键词：诺氟沙星人工抗原氟喹诺酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 睾酮单克隆杂交瘤细胞株的筛选及性能鉴定被引量：1
- 2012年
- 为建立大批量样品中睾酮残留的检测方法,采用细胞融合技术、间接ELISA和间接竞争ELISA(icELISA)等方法,对睾酮单克隆杂交瘤细胞株进行了筛选及性能鉴定。结果表明:筛选出5株(T2C3,T2D9,T3A5,T4B1、T4E8)杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG1型,具k轻链,亲和常数为4.38×108～5.24×109 L/mol;腹水纯化后的抗体效价和灵敏度(IC50)分别为0.64×105～2.56×105和1.58～2.92ng/mL。以T2D9细胞株建立icELISA标准曲线,其线性范围为0.06～63.5ng/mL,检测限和IC50值分别为0.04和1.55ng/mL。
- 李超英姜金庆李凤云杨金明刘明成吴世秀
- 关键词：睾酮杂交瘤细胞株单克隆抗体间接竞争ELISA
- 克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：17
- 2013年
- 本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multi-strip)。用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multi-strip。该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2mm。结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2ng·mL-1,检测时间5～8min。基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例。该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选。
- 姜金庆杨雪峰王自良邓瑞广王选年张改平
- 关键词：克伦特罗莱克多巴胺胶体金
- 氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2011年
- 为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10%和30%;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93%～108%、96%～110%、92.5%～104%和93%～102%。
- 姜金庆杨雪峰王自良常新耀王三虎刘兴友
- 关键词：环丙沙星间接竞争ELISA氟喹诺酮药物多残留检测
- 睾酮多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 采用优化的碳化二亚胺法制备睾酮(TES)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.096～92.200 ng/mL,相关系数R2=0.972 2,半数抑制浓度(IC50)为2.800 ng/mL,最低检测限(LOD)为0.035 ng/mL;抗体与去甲睾酮的交叉反应率为22.3%,与其他检测化合物的交叉反应很小或忽略不计。羊尿20倍稀释后进行添加回收试验,其添加值与检测值的相关系数为0.985 2。因此,该免疫学方法可用于动物尿液中睾酮残留水平的定量分析。
- 李超英姜金庆李凤云杨金明吴世秀刘明成
- 关键词：睾酮人工抗原多克隆抗体间接竞争ELISA
