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排序方式：

小鼠酪氨酸羟化酶启动子克隆被引量：3: 2008年; 为了克隆小鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究,本实验采用重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达。然后分别转染MN-9D细胞(TH+)和ECV细胞(TH-),观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果显示:扩增出小鼠TH启动子序列与GenBank报道一致;单酶切和质粒PCR鉴定证实小鼠TH启动子和EGFP基因已经克隆入重组质粒中;小鼠TH启动子能调控EGFP在MN-9D细胞中表达,不能调控EGFP在ECV细胞内表达。初步确定克隆的小鼠TH启动子具有特异性调控目的基因表达的能力。; 朱孝荣高秀先朱园园袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：PCR 转染小鼠

多巴胺能神经细胞损伤过程中NCAM-140的表达变化: 2010年; 目的:检测NCAM-140在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和western blotting检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和NCAM-140的表达情况。结果:在小鼠中脑黑质一直有NCAM-140阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,NCAM-140在给予MPTP后第一周至第三周持续高表达,并且从第四周开始,其表达量明显降低。结论:NCAM-140的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。; 王婷滕达刘美英刘亚萍袁红花高秀先高殿帅; 关键词：黑质多巴胺能神经细胞

N-cadherin在小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤过程中的表达变化: 2012年; 目的探索神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在多巴胺能神经元慢性损伤中的可能作用.方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射建立小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和Western blot方法检测小鼠从实验第1周到第6周黑质酪氨酸羟化酶（TH）和N-cadherin的表达情况.结果免疫荧光染色结果显示：对照组和MPTP组小鼠黑质的TH免疫阳性神经细胞在各时间点都同时表达N-cadherin.Western blot结果显示：①MPTP组小鼠黑质的TH表达量从第3周开始呈梯度下降（P〈0.05）;而N-cadherin表达量从第4周开始突然下降（P〈0.05）,但在第4到6周内的表达量虽有波动但差异无统计学意义（P〈0.05）.②虽然TH和N-cadherin的表达变化时程曲线似有区别,但相关分析显示两者之间仍存在正相关（r=0.924,P〈0.05）.结论本研究证明多巴胺能神经元损伤影响了胞内N-cadherin的表达,影响程度虽与神经元的损伤程度有关,但并不完全一致,其内在关系有待进一步研究.; 刘美英刘亚萍王晓舟高殿帅; 关键词：多巴胺能神经元慢性损伤 N-CADHERIN 酪氨酸羟化酶黑质 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶

小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列分析: 2009年; 目的对小鼠酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）启动子进行序列分析,研究启动子不同区域对下游基因表达调控能力。方法高保真PCR分别扩增出450、1500、2000、2400、3400bp TH启动子片段置换pcDNA3中CMV启动子,并在多克隆位点插入EGFP报告基因,重组后质粒分别瞬时转染MN-9D细胞（TH^＋）和ECV细胞（TH^-）,流式细胞仪观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果转染后MN-9D细胞中EGFP阳性率分别为8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差异无显著性。转染ECV细胞（TH^-）中,EGFP阳性率分别为6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%。3400bp、2400bp启动子片段在TH^-细胞中调控能力受到明显抑制。结论上述启动子片段均有调控基因表达能力,初步证明TH启动子中特异性调控区域在2400-2000bp范围内。; 朱孝荣朱园园高秀先袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：小鼠

小鼠Calbindin-D28k基因体外表达及其抗凋亡作用的研究: 2010年; 目的:研究钙结合蛋白D28k(calbindin-D28k,CaBP)体外表达及其对神经元细胞抗凋亡作用。方法:RT-PCR从小鼠脑组织中扩增出小鼠CaBP的cDNA片段;重组构建pTH-CB质(pcDNA3-TH-CB),脂质体包裹pTH-CB质粒转染MN-9D细胞(多巴胺能杂交瘤神经元细胞);RT-PCR、免疫沉淀法检测CaBP的cDNA在细胞内表达情况;Hoechst染色、Caspase-3活性检测、AnnexinV/PI法对CaBP过表达的抗凋亡作用进行检测。结果:小鼠脑组织RT-PCR扩增出785bp条带,测序结果与Genebank中报道完全一致。脂质体包裹重组构建pTH-CB质粒转染MN-9D细胞后,转染pTH-CB质粒的MN-9D细胞中,CaBP的mRNA表达量和CaBP水平显著高于转染pc-DAN3组和正常MN-9D细胞组(P<0.05),3种细胞凋亡检测方法结果显示,CaBP过表达的细胞抗凋亡能力显著提高。结论:体外克隆CaBP的cDNA能在细胞内表达,过表达的CaBP通过抑制细胞的caspase-3活性,起抗凋亡作用。; 朱孝荣朱园园李富珍袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：基因表达凋亡小鼠

多巴胺能神经细胞慢性损伤过程中RET的表达变化被引量：5: 2010年; 目的:为了检测RET在多巴胺能神经细胞损伤过程中中脑黑质部位的表达变化,并探索其在多巴胺能神经细胞损伤中的可能作用。方法:本实验将C57BL/6小鼠分为三组:MPTP组、NS组和空白对照组,采用MPTP腹腔注射建立小鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞慢性损伤模型,设立第一周到第六周六个时间点(1w-6w),检测小鼠行为学变化,并采用免疫荧光染色和western blotting等方法检测中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和RET的表达情况。结果:行为学结果显示,随给药次数及时间延长,悬挂实验中,MPTP组悬挂评分逐渐下降,MPTP组第三周给药以后与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05);跳台实验中,小鼠受电击后跳上跳台的时间逐渐延长,错误次数逐渐增多。免疫荧光双标结果显示,在检测的各时间点,在小鼠中脑黑质一直有RET阳性细胞存在,且与TH阳性细胞共表达;western blotting结果显示,TH在给予MPTP后第三周表达开始降低,RET在给予MPTP后第一周和第二周持续高表达,并且也从第三周开始,其表达量明显降低。结论:这种表达变化提示RET的表达与多巴胺能神经细胞损伤有关。; 王婷刘美英刘亚萍袁红花高秀先朱孝荣高殿帅; 关键词：RET 黑质多巴胺能神经细胞

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江苏省高校自然科学研究项目(07KJD-310221)