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江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金(RC2007117): 作品数：11 被引量：36H指数：3; 相关作者：李晓军陈芳芳虞伟庞小娟王凯更多>>; 相关机构：南京军区南京总医院南京大学第二军医大学更多>>; 发文基金：江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金南京军区医药卫生科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

用兔抗人分化抑制因子3抗体建立双抗体夹心ELISA法及初步临床应用: 2010年; 目的制备兔抗人分化抑制因子3(Id3)多克隆抗体,建立检测血清Id3的双抗体夹心ELISA技术。方法用纯化的Id3重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗Id3多克隆抗体,通过多肽亲和层析柱去除非特异性成分,免疫细胞化学染色、免疫双向扩散及间接ELISA法检测抗体特异性和效价。制备辣根过氧化物酶(HRP)标记抗Id3,以纯化Id3重组蛋白为标准抗原制备标准曲线,建立定量检测人Id3的双抗体夹心ELISA法。结果免疫细胞化学染色显示,制备的兔抗血清能与人Id3蛋白特异性结合,所得兔抗血清效价分别为1∶8(琼脂双向扩散)和1∶8000(ELISA)。ELISA法的包被抗体和酶标记抗体的工作浓度分别为5μg/ml和1∶4000,标准曲线为Y=0.0793+0.0188X,r=0.997。检测线性范围为2～64U/ml,平均回收率为98.2%,批内平均变异系数(CV)为4.4%,批间平均CV为7.2%。该方法可用于人血清Id3含量的检测。结论兔抗人Id3多克隆抗体的制备及夹心ELISA法的建立为今后研究Id3蛋白的功能及其在临床和基础医学中的应用奠定了基础。; 仲爱芳李晓军贾丽陈芳芳朱传东虞伟; 关键词：纯化多克隆抗体 ELISA

抗人Id3蛋白多克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞内的定位研究: 2010年; 目的:表达及纯化重组人分化抑制因子3(Id3)蛋白,制备兔抗人Id3多克隆抗体。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化重组人Id3融合蛋白,以纯化Id3重组蛋白为免疫原,免疫新西兰家兔,制备兔抗人Id3多克隆抗体,通过亲合层析实验去除抗血清中非特异性成分,免疫双向扩散、间接ELISA及Western blot法检测抗体效价和特异性。用间接免疫荧光试验(IFA)对人乳腺上皮癌细胞(MCF7)、人前列腺癌细胞(PC-3M)、人肺腺癌细胞(A549)细胞内Id3表达进行定位研究。结果:SDS-PAGE电泳、Western blot分析证实,表达载体Id3/pET-32a在大肠杆菌BL21中经诱导可大量表达His-Tag Id3融合蛋白;表达产物通过镍离子亲和层析法纯化得到相对分子质量(Mr)为34 000的Id3融合蛋白;Id3重组蛋白免疫家兔获得的抗血清效价分别为1∶8(双向扩散)和1∶8 000(ELISA),Western blot分析表明抗体具有抗人Id3的良好特异性。IFA结果发现,A549细胞内Id3表达量很低;在MCF7和PC-3M细胞内,Id3呈高水平表达,且主要定位于核浆。结论:重组人Id3蛋白的表达纯化及抗人Id3多克隆抗体的研制为进一步研究该蛋白的功能及其临床应用研究提供了有利工具。; 李晓军仲爱芳王凯贾丽陈芳芳虞伟; 关键词：抗体 A549细胞

MicroRNA与癌症的相关性研究进展: 2011年; MicroRNAs（miRNAs）是一类长约22 nt的非编码单链RNA分子,在转录后水平调控基因的表达。miRNA能特异性诱导靶基因mRNA降解及抑制靶基因mRNA的翻译,同时在细胞的发生、发展、增殖、分化和凋亡过程中发挥重要的调节作用[1]。目前,人类基因组中已确认的miRNAs约500个,; 陈芳芳李晓军; 关键词：MICRORNA 癌症基因MRNA RNA分子 RNA降解人类基因组

ID3蛋白在前列腺癌中的表达及临床病理学意义被引量：3: 2011年; 目的:研究ID3蛋白在前列腺癌中的表达及临床病理学意义。方法:应用间接免疫荧光技术检测ID3在PC-3M细胞中的表达情况;应用免疫组化技术检测29例前列腺癌和15例前列腺增生标本中ID3的表达情况,分析ID3与临床病理参数之间的关系。结果:ID3蛋白在PC-3M细胞中主要表达在细胞核;29例前列腺癌中ID3阳性表达率为82.7%(24/29),15例前列腺增生标本中ID3阳性表达率为6.6%(1/15),前者显著高于后者(P<0.05);ID3蛋白表达程度与前列腺癌的G leason评分显著相关(P<0.05)。结论:ID3蛋白在前列腺癌中表达,其表达量随着G leason评分的升高而升高。; 王凯李晓军印洪林周航波陈芳芳王海马恒辉; 关键词：ID3 PC-3M 前列腺癌免疫组化免疫荧光

抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2010年; 目的分化抑制因子3(inhibitor of differentiation3,Id3)是重要的细胞生长调控分子,在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用。文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人Id3蛋白,制备抗人Id3单克隆抗体(McAb),以进一步研究Id3的生物学功能及其临床应用。方法将重组表达载体Id3/pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化菌表达Id3重组融合蛋白(Trx-His-hId3),通过镍亲和层析柱纯化Trx-His-hId3。以纯化的Id3重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备Id3McAb,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot进行抗体鉴定。结果经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤,筛选出2株分泌抗人Id3McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为McAb6G7和6G9,免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1亚类。Western blot分析表明,McAb6G7和6G9能与重组人Id3蛋白特异性结合。间接ELISA法检测2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为1∶1000、1∶5000。结论成功制备了抗人Id3McAb,为研究该蛋白的功能提供了有利工具。; 仲爱芳李晓军贾丽陈芳芳虞伟; 关键词：单克隆抗体免疫印迹

腺病毒载体纯化及在肿瘤基因治疗中的应用被引量：9: 2009年; 腺病毒是一种线性无包膜的双链DNA病毒,用于载体构建的主要是人类2型和5型腺病毒。现在通过对腺病毒的改造,已经成功构建出第一代、第二代、第三代和条件复制型腺病毒载体。随着腺病毒载体在蛋白质表达中的广泛使用,对高产量、高纯度腺病毒载体的需求量逐渐增大,因此近年来在传统纯化腺病毒载体的基础上发展出各种纯化新方法。同时,由于腺病毒载体自身的一些优点,使其在疫苗和肿瘤基因治疗中也得到了较为广泛的应用。; 庞小娟李晓军秦浚川; 关键词：腺病毒载体纯化基因治疗疫苗

白细胞介素-6与类风湿性关节炎被引量：13: 2009年; 类风湿性关节炎(RA)是以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病(AID),细胞因子(CK)贯穿RA的整个病程。重要的CK如TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)在促进关节滑膜细胞增生和炎症进程中起举足轻重的作用。近年来,临床对RA的治疗主要以这些CK为靶点,然而TNF-α、IL-1β阻断剂只对部分患者有效,逐渐增多的不良反应如继发感染、恶性肿瘤的发生等也逐渐引起关注。白细胞介素-6(IL-6)的异常表达和失调与RA的病情密切相关,是RA发病的重要调控因子,阻断剂可能用于RA的临床治疗。; 王书侠房国祥李晓军; 关键词：白细胞介素-6 关节炎类风湿性

ID3蛋白在肺腺癌中的表达及临床病理学意义被引量：3: 2011年; 目的研究分化抑制因子3(ID3)蛋白在肺腺癌中的表达及与临床病理学参数的意义。方法用间接免疫荧光技术检测ID3在人肺腺癌A549细胞株中的表达情况;用酶免疫组织化学染色技术检测30例肺腺癌和25例正常肺组织标本中ID3的表达情况,分析ID3表达与临床病理参数关系。结果 ID3蛋白在A549细胞中主要表达在细胞核;肺腺癌的阳性表达率为76.7%(23/30);ID3蛋白表达程度与肺腺癌的病理分化程度有关(P<0.05)。结论 ID3蛋白在人肺腺癌细胞株呈低水平表达而在人肺腺癌组织中表达量比较高,并与肿瘤分化程度相关。; 王凯李晓军陈芳芳周航波印洪林王海马恒辉; 关键词：分化抑制因子 A549细胞株肺腺癌免疫组织化学染色

microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响被引量：2: 2010年; 目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(Id3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响。方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞。荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定量RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;MTT法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRId3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制。MTT和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P<0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发生明显变化。结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导入靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础。; 陈芳芳李晓军庞小娟赵晓琴王凯罗冰虞伟; 关键词：RNA干扰 MICRORNA ID3 共转染凋亡

人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定被引量：1: 2010年; 目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。结果Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×1010PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达。结论成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达。; 庞小娟赵晓琴陈芳芳彭薇张弛臧宇辉罗冰虞伟秦浚川李晓军; 关键词：重组腺病毒滴度测定

江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金(RC2007117)

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