上海市科技兴农重点攻关项目(20013-5)
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
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- 相关机构：南京农业大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建及表达
- 2005年
- 用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白(Cap蛋白)全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法,又构建了表达载体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a载体中,成功构建了重组表达载体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符。
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- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白大肠杆菌
- 猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪细小病毒混合感染的流行病学调查被引量：13
- 2006年
- 根据Genbank中PRRSV ORF7及PPVVP2基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PPV的RT-PCR及PCR方法。应用建立的方法对38个PCV2阳性病料进行了PRRSV及PPV检测,以确定猪群中PCV2与PRRSV和/或PPV混合感染情况,结果表明,15份样品表现为PRRSV与PCV2混合感染,占样品总数的39.4%;2份样品表现为PCV2与PPV混合感染,占5.3%。另外,还有一定比例的三重感染,共3个样品,占7.9%。由此可见,猪群中PCV2与PRRSV及PPV混合感染比较普遍。
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- 关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪细小病毒
- 猪圆环病毒2型ORF2编码基因真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2003年
- 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因,将其克隆入pSecTag2载体中,构建了pSecORF2载体。又设计一条含信号肽序列的上游引物,以pSecORF2为模板,扩增出含信号肽序列的ORF2基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRESiORF2真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞,进行表达。间接免疫荧光实验(IFA)成功检测到pIRESiORF2在CHO细胞中的表达。这为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断试剂盒打下基础。
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- 关键词：猪圆环病毒ORF2编码基因真核表达载体
- 猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建被引量：2
- 2002年
- 根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列，设计一 对引物，应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ ２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ载体，筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２，并对此质 粒中的插入序列进行了测序分析，结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９ 的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％，与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８． ６％和 ９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经 Ｂａｍ Ｈ Ｉ、Ｅｃｏ Ｒ Ｖ双酶切，回收ＯＲＦ２基因，转 移入真 核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间，构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表 达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。
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- 关键词：猪圆环病毒ORF2真核表达载体基因序列
