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国家自然科学基金(39900068): 作品数：15 被引量：29H指数：4; 相关作者：徐立徐宏勇李开宗窦科峰高建宏更多>>; 相关机构：第四军医大学西京医院解放军第451医院第四军医大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金西安市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

抗TAG-72抗原单链抗体的原核表达及对人肝癌的检测被引量：2: 2010年; 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得抗TAG-72单链抗体蛋白。采用细胞培养及免疫细胞/组织化学方法 ,检测4种肝癌细胞系及石蜡包埋的肝癌组织中TAG-72抗原的表达。结果 SDS-PAGE及Western blot法证实,抗TAG-72单链抗体蛋白分子得以正确表达。抗TAG-72单链抗体可与肝癌细胞系SMMC7721、HepG2和HHCC结合,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;抗TAG-72单链抗体不能结合BEL7402细胞。40例肝癌组织中TAG-72抗原表达阳性率Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期分别为23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝组织标本中无TAG-72抗原表达,TAG-72抗原在正常肝组织及肝癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72抗原在肝癌细胞或肝癌组织中有特异性表达,有可能成为判断肝癌的标志物。; 徐宏勇徐立李开宗窦科峰; 关键词：肝细胞癌单链抗体原核表达

TAG-72嵌合锚定T细胞对乳腺癌的抑癌效应观察被引量：1: 2012年; 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72抗原(TAG-72)嵌合锚定T细胞,通过体外实验检测其对乳腺癌细胞的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞瞬时转染方法,将已制备的重组真核表达载体即抗TAG-72-scFv-CD3ζ-pcDNA 3.0导入PBMC,以获得TAG-72嵌合锚定T细胞,以此为转染组;用转染空载体pcDNA 3.0的PBMC作为对照组。将转染组嵌合锚定T细胞和对照组PBMC细胞分别与乳腺癌细胞系MCF-7及Bcap37共培养,观察两者对乳腺癌细胞G1期的阻滞率。结果转染组对MCF-7细胞系的G1期阻滞率为(82.3±6.9)%,对照组为(43.4±3.9)%,2组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);转染组对Bcap37细胞系的G1期阻滞率为(51.3±4.7)%,对照组为(45.6±2.5)%,2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性地抑制TAG-72+乳腺癌细胞的增殖,此将为乳腺癌的临床诊治提供一种有希望的途径。; 徐宏勇丁蓉徐立李开宗; 关键词：乳腺癌外周血单个核细胞

癌胚抗原嵌合锚定T细胞对胃癌的体内外抑癌效应观察被引量：3: 2008年; 增强免疫水平对提高胃癌疗效十分重要，我们利用共刺激信号CD3ζ对T细胞的活化作用和抗癌胚抗原（CEA）单链抗体的识别功能，构建真核表达载体。在此基础上制备CEA阳性嵌合锚定T细胞，观察其对CEA阳性胃癌裸鼠的抑癌效应，以期探讨嵌合锚定T细胞对消化道肿瘤的治疗作用。; 徐宏勇徐立李开宗高建宏岳树强王昕欣; 关键词：T细胞胃癌嵌合体内外 CEA阳性

嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的阻滞效应: 2011年; 目的探讨肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合锚定T淋巴细胞的制备方法,并检测它对TAG72阳性肝癌细胞增殖的阻滞效应。方法分离外周血单核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠法分离得到CD8+T淋巴细胞。将重组真核表达载体anti-TAG72-scFv-CD28-pcDNA3.0采用脂质体介导的细胞转染和细胞培养,以制备TAG72靶向性的嵌合锚定T淋巴细胞;将嵌合锚定T淋巴细胞与TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721共培养,通过流式细胞仪检测肝癌细胞的周期变化,分析嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的抑制效应。结果 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可识别肝癌细胞SMMC7721;用流式细胞仪检测发现,嵌合锚定T淋巴细胞可引起肝癌细胞SMMC7721的增殖阻滞。结论 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可特异性识别TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721并引起其增殖阻滞。; 徐宏勇徐立李开宗; 关键词：肝癌 T淋巴细胞

一种特异性靶向性淋巴细胞对荷瘤裸鼠的治疗观察被引量：1: 2018年; 目的观察癌胚抗原(CEA)阳性靶向性淋巴细胞对胃癌细胞体内及体外靶向性治疗作用。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),通过脂质体lipofectamine 2000介导的细胞转染将重组真核表达载体anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0介导的细胞转染导入PBMC,以获取CEA阳性靶向性淋巴细胞(以下简称靶淋巴细胞);将不含anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0融合基因片段的pc DNA3.0真核表达载体转染入PBMC,获取的淋巴细胞简称为空载体淋巴细胞。将上述两种淋巴细胞分别与CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞和CEA阴性BGC-823胃癌细胞共培养,观察不同靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养(24 h或36 h)后的识别情况或其对胃癌细胞凋亡的影响。并将上述已获取的两种淋巴细胞分别通过尾静脉注入荷CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞裸鼠和荷CEA阴性BGC-823胃癌细胞裸鼠体内,以观察其对荷胃癌裸鼠肿瘤生长情况的影响。结果 (1)靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养24 h时,靶淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别率为72.3%,淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别能力较强;其对BGC-823胃癌细胞识别率为7.8%,其对BGC-823胃癌细胞识别能力较弱。(2)当靶淋巴细胞、空载体淋巴细胞分别与KATOⅢ和BGC-823胃癌细胞分别共培养36 h时,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的凋亡率明显高于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(P=0.032),而靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组和空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组的凋亡率比较差异无统计学意义(P=0.118)。(3)在观察40 d内,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(F=5.010,P<0.01)和空白对照组(F=7.560,P<0.01);靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组与空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组间比较差异无统计学意义(F=1.210,P>0.05)。靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组(F=4.982,P<0.01)。结论 CEA�; 徐宏勇徐立; 关键词：癌胚抗原裸鼠淋巴细胞

肿瘤相关糖蛋白-72嵌合锚定T细胞对肝癌的抑癌效应被引量：3: 2014年; 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,体内外实验检测其对肝癌的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞转染,将已制备的重组真核表达载体抗TAG-72 scFv-CD3ζ-pcDNA3.0导入PBMC,获得肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,以此为实验组治疗细胞;用SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞中抗TAG-72 scFv-CD3ζ嵌合分子的表达,并用Western blotting证实。用转染空载体pcDNA3.0的PBMC作为对照组治疗细胞。将实验组及对照组的治疗细胞分别经尾静脉注射治疗荷TAG-72+肝癌细胞HepG2、荷TAG-72-肝癌细胞BEL7402裸鼠动物模型,观察对裸鼠的抑癌效应。结果 SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞嵌合分子抗TAG-72 scFv-CD3ζ的表达,显示大小为47 kDa的融合蛋白片段,与抗TAG-72 scFv-CD3ζ的理论值相符;Western blotting证实该片段CD3呈阳性表达。TAG-72嵌合锚定T细胞与肝癌细胞HepG2共培养后可对后者产生G1期阻滞。用TAG-72嵌合锚定T细胞经尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,发现实验组细胞对荷HepG2细胞裸鼠存活时间、体质量、肿瘤包块大小等方面疗效优于荷BEL7402细胞裸鼠的疗效,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性抑制荷TAG-72+肝癌细胞裸鼠的肝癌细胞生长;该治疗策略将为肝癌的临床诊治提供一种有希望的途径。; 徐宏勇徐立李开宗; 关键词：肝癌 T细胞

胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备被引量：4: 2001年; 目的制备胃癌单抗 MGd1的单链可变区片段 (single chain variable fragm ent,Sc Fv) ,为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法从 MGd1杂交瘤分离 m RNA,RT- PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因 (VH和 VL DNA) ,二者经 linker DNA连接形成 Sc Fv DNA。将 Sc Fv DNA与载体 p CANTAB5 E的连接产物转化于大肠杆菌 TG1,经 M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体 Sc Fv。以高表达 MGd1结合抗原的细胞株 KATO 对重组噬菌体抗体 Sc Fv进行两轮筛选后 ,随机挑取克隆经 EL ISA筛选 MGd1Sc Fv单克隆 ,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL 和 Sc Fv DNA分别约为 340、32 0和 75 0 bp。经两轮亲和筛选后 ,在随机筛检的 30个克隆中得到 12个噬菌体呈现型 MGd1Sc Fv单克隆 ,其中结合抗原能力强的克隆有 5个。结论用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗 MGd1的 Sc Fv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。; 何凤田聂勇战陈宝军徐立韩者艺乔太东安华章樊代明; 关键词：胃癌噬菌体呈现 SCFV

抗肿瘤相关糖蛋白-72单抗在人乳腺癌中的表达被引量：4: 2006年; 目的检测肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)在人乳腺癌细胞系的表达,为利用抗TAG-72单链抗体(singlechainvariablefragment,scFv)诊治乳腺癌提供实验依据。方法将人乳腺癌细胞系MCF-7和Bcap-37通过细胞培养至对数生长期,并固定于载玻片上。用原核表达的抗TAG-72scFv经免疫细胞化学方法检测TAG-72在乳腺癌细胞中的表达。结果TAG-72在乳腺癌细胞系MCF-7中表达为阳性,在Bcap-37中表达为阴性,表明TAG-72在部分人乳腺癌细胞中得以表达。结论TAG-72在人部分乳腺癌中阳性表达,表明TAG-72抗原可作为一个肿瘤标志物在临床中应用,也为抗TAG-72scFv在乳腺癌诊治中应用奠定了实验基础。; 徐宏勇徐立李开宗高建宏; 关键词：乳腺癌单链抗体

一种新型胃肠道癌特异性单链抗体的表达及其在胃癌中的检测被引量：1: 2011年; 目的通过原核可溶性表达将我们制备的抗胃肠道肿瘤特异性单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)基因表达出单链抗体蛋白,初步鉴定并检测其在几种胃癌细胞中的表达。方法通过基因原核表达、Western blot、ELISA等方法检测单链抗体的表达;通过免疫细胞化学方法检测其对几种胃癌细胞的肿瘤相关抗原的识别。结果获得的单链抗体分子量31 KD,与理论分子量基本一致,并通过Western blot、ELISA加以证实;免疫细胞化学方法证明该单链抗体可识别胃癌细胞KATOⅢ、HGC-27、肝癌细胞SMMC7721等细胞,不能识别SGC7901。结论通过对单链抗体的原核表达,明确了单链抗体对胃癌细胞的识别能力,为进一步临床应用提供理论基础。; 徐宏勇徐立李开宗; 关键词：胃肠道癌单链抗体基因表达

嵌合锚定T细胞致癌胚抗原阳性胃癌细胞的凋亡效应被引量：11: 2007年; 目的探讨 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞的制备方法,并检测其活化功能及诱导 CEA阳性胃癌细胞的杀伤活性。方法分离外周血单个核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠分离得到 CD^+_8T 细胞。将重组真核表达载体抗-CEA-scFv-CD3 zeta-pcDNA3.0采用脂质体转染上述 T 细胞以制备CEA 靶向性的嵌合锚定 T 细胞;用流式细胞仪检测其 CD69的表达,以检测嵌合锚定 T 细胞活化功能;将嵌合锚定 T 细胞与胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901共培养,检测后者膜联蛋白 V 的表达,分析嵌合锚定 T 细胞致胃癌细胞的凋亡效应。结果将已制备的 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞培养12 h、24 h后,检测 T 细胞的活化信号 CD69表达率分别为40.5%±3.4%、48.3%±2.8%,证明嵌合锚定 T 细胞具备活化功能。检测与嵌合锚定 T 细胞共培养的胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901,凋亡率分别为47.8%±4.2%、18.7%±2.8%,两者之间有统计学意义(P<0.05)。结论 CEA 靶向性嵌合锚定T细胞可特异性识别 CEA 阳性胃癌细胞并促使后者凋亡,这种治疗策略将为胃癌的临床诊治提供一种有希望的途径。; 徐宏勇徐立高建宏李开宗窦科峰; 关键词：胃肿瘤 T淋巴细胞癌胚抗原

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