辽宁省自然科学基金(20082097)
- 作品数：8 被引量：36H指数：4
- 相关作者：王振宇季丽莉佟雷佟晓杰唐源远更多>>
- 相关机构：中国医科大学聊城职业技术学院新乡医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 碱性成纤维生长因子和神经生长因子联合应用培养成年大鼠海马神经干细胞向神经元样细胞的分化被引量：9
- 2011年
- 背景:影响神经干细胞向神经元分化的因素很多,各种营养因子可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞大量分化为神经元是研究的热点问题。目的:观察联合应用碱性成纤维生长因子和神经生长因子对成年大鼠海马神经干细胞为神经元的影响。方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,传至第4代克隆球直径约为200μm时,滴加DMEM/F12+2%B27+20μg/L表皮生长因子+20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,进行单细胞克隆培养,传代的神经干细胞分成空白对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子+神经生长因子组。观察传代后的克隆球进行神经干细胞免疫细胞化学染色鉴定,计数神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率,检测神经干细胞向神经元的分化情况。结果与结论:①单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。②与空白对照组神经干细胞分化为神经元的比例比较,碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组均明显提高(P<0.05),且碱性成纤维细胞生长因子组+神经生长因子组神经元的比例最高(P<0.05)。提示,碱性成纤维细胞生长因子可以提高神经生长因子诱和神经生长因子均可促进神经干细胞向神经元分化,且二者联合应用效果更佳。
- 佟雷季丽莉解大龙高海佟晓杰
- 关键词：神经干细胞神经元碱性成纤维细胞生长因子神经生长因子
- 星形胶质细胞条件培养液促进新生大鼠海马神经干细胞分化被引量：4
- 2009年
- 目的探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法行新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯化培养后收集ACM,将新生大鼠海马NSCs单克隆培养后行nestin免疫细胞荧光染色,诱导分化5d后行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GALC)免疫细胞荧光染色;将单克隆培养的NSCs分为对照组和实验组,对照组为单纯NSCs培养液,实验组根据NSCs培养液与ACM比的不同分3组:A组(2:1),B组(1:1),C组(1:2)。各组培养1周,采用NSE免疫细胞荧光检测方法标记神经元并计数和统计学分析。结果纯化的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记阳性率为96.5%;单克隆培养的海马NSCs呈nestin阳性,诱导后呈NSE、GFAP和GALC阳性表达。ACM培养的海马NSCs各组分化为神经元的比例明显高于对照组(<0.01),其中A组的比例最高。结论ACM可以促进新生大鼠海马NSCs向神经元分化。
- 王立芹赵久红唐源远季丽莉王振宇
- 关键词：星形胶质细胞条件培养液神经干细胞海马新生大鼠
- 脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞的定向分化被引量：3
- 2012年
- 背景:有研究表明脑源性神经营养因子可以维持神经元的存活、影响神经元的迁移,在体外可以促进神经干细胞的存活和分化。目的:探讨脑源性神经营养因子对低血糖幼鼠海马神经干细胞定向分化的作用。方法:取新生1d低血糖模型大鼠脑海马组织进行原代、传代及单细胞克隆培养。培养的细胞一部分进行神经干细胞鉴定,另一部分依据培养液中脑源性神经营养因子质量浓度的不同将单克隆细胞分为0,100,200μg/L组,取第4代细胞进行诱导分化,行神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色,计数阳性细胞比例。结果与结论:单克隆培养后3组细胞均呈巢蛋白阳性,诱导分化后细胞呈行神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性;100,200μg/L组神经干细胞生长较快,且分化为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例较高(P<0.05),但两组神经干细胞之间差异无显著性意义(P>0.05)。提示脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞向神经元定向分化。
- 唐源远李振宇尹延彦季丽莉王振宇
- 关键词：脑源性神经营养因子神经干细胞分化低血糖幼鼠海马
- CD146基因重组质粒的构建及蛋白表达
- 2012年
- 目的构建CD146原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达和定位。方法提取人黑色素瘤细胞A875的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-myc/his以及pGEX-4T-3表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经了诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌MKN45细胞中,分别利用westernblot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 CD146全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930bp。原核诱导出了GST-CD146并进行了纯化,CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,Westernblot检测到真核转染的myc/his-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白定位在胃癌MKN细胞膜。结论成功构建了CD146原核、真核表达载体,融合蛋白在胃癌MKN45细胞表达。
- 温凤云屈艳丽于洪
- 关键词：CD146蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光
- 深Ⅱ度烧伤愈合后Bcl-xl、Bax蛋白表达与增生性瘢痕的相关性被引量：3
- 2012年
- 目的探讨Bcl-xl和Bax蛋白在深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期增生性瘢痕中的表达特点。方法人深Ⅱ度烧伤愈合后不同时期的增生性瘢痕皮肤40例,正常皮肤组织10例。分为增生期组、减退早期组、减退晚期组、成熟期组,正常对照组。免疫组织化学染色,检测Bcl-xl和Bax蛋白的表达。结果深Ⅱ度烧伤创面愈合后,Bcl-xl和Bax蛋白主要表达于表皮基底细胞和真皮层成纤维细胞,增生期和减退早期Bcl-xl和Bax蛋白产物光密度值明显高于正常皮肤(p<0.01),减退晚期和成熟期随瘢痕成熟而逐渐递减接近正常皮肤。结论 Bcl-xl和Bax蛋白表达与深Ⅱ度烧伤创面愈合后增生性瘢痕的发生和瘢痕成熟相关。
- 李泰然王振宇孟庆延骆宁
- 关键词：增生性瘢痕BCL-XLBAX成纤维细胞
- 锌与cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路在抑郁症发病机制中的相关性被引量：7
- 2013年
- 目的锌是脑正常生理功能的重要微量元素,抑郁症患者血清锌水平降低,经抗抑郁治疗血清锌升高;锌离子稳态的变化会影响cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路中多种信号分子的表达,而cAMP/PKA-CREB-BDNF是抑郁症发病机制中的一种信号通路。锌离子稳态失衡与cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路的功能改变在抑郁症发病机制中发挥至关重要作用。本文对锌离子稳态与cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路在抑郁症发病机制中的相关性的研究进展做一简要综述。
- 韩羽楠王振宇
- 关键词：信号通路发病机制锌水平抑郁症
- 条件培养液对Wistar大鼠海马神经干细胞单细胞克隆增殖的影响
- 2011年
- 目的探讨神经干细胞(NSCs)条件培养液对其单细胞克隆增殖的影响。方法采用无血清培养法体外培养Wistar大鼠海马神经干细胞并进行传代培养,然后收集神经干细胞条件培养液。第四代细胞进行单细胞克隆,并将单细胞克隆细胞分为条件培养液组、无血清培养液对照组。通过MTT法比较两组细胞的增殖情况。单克隆培养细胞行巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色,诱导分化后细胞行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(Galc)免疫细胞化学染色。结果单克隆培养后克隆球表达nestin,诱导分化后细胞表达NSE、GFAP、Galc,条件培养液组细胞增殖速度高于对照组。结论条件培养液能提高Wistar大鼠海马神经干细胞单细胞克隆的增殖速度。
- 佟雷王振宇季丽莉佟晓杰
- 关键词：条件培养液WISTAR大鼠海马神经干细胞增殖
- ERK信号转导通路对新生大鼠海马神经干细胞增殖的影响被引量：10
- 2011年
- 目的探讨细胞外信号调解激酶(ERK)信号转导通路在新生大鼠海马神经干细胞增殖中的作用。方法体外培养新生大鼠海马神经干细胞,传至第4代后进行单细胞克隆培养并传代。将培养细胞分为2组,对照组采用神经干细胞培养液进行培养,实验组中在神经干细胞培养液的基础上添加不同浓度的ERK通路抑制剂U0126,Western Blot检测加入细胞中ERK及P-ERK的表达情况,MTT法检测其对神经干细胞增殖的影响。结果神经干细胞加入U0126后ERK磷酸化水平明显低于对照组;当U0126浓度为10M时,细胞的增殖速度较对照组明显降低。结论神经干细胞的增殖可能与ERK信号转导通路有关。
- 佟雷王振宇季丽莉佟晓杰
- 关键词：神经干细胞增殖新生大鼠
