国家自然科学基金(30770054)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 重组枯草芽胞杆菌不对称还原产d-伪麻黄碱被引量：5
- 2011年
- 为了实现羰基还原酶基因mldh在枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis中的表达并通过细胞内的葡萄糖脱氢酶完成辅酶的再生,以枯草芽胞杆菌rpsD基因的启动子PrpsD和终止子TrpsD为表达元件,将羰基还原酶基因mldh连接至构建好的质粒(pHY300plk-PrpsD-TrpsD上,得到质粒pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD;进一步将重组质粒转化入B.subtilis Wb600中获得重组菌B.subtilis Wb600(pHY300plk-PrpsD-mldh-TrpsD);对此重组菌进行全细胞生物转化反应实验发现,在葡萄糖存在的情况下,其可转化底物1-苯基-2-甲氨基丙酮(简称MAK)生成d-伪麻黄碱,产量最高达97.5 mg/L,底物摩尔转化率为24.1%。研究结果为利用重组B.subtilis生物转化生产d-伪麻黄碱进行了有益探索。
- 彭艳红张梁丁重阳王正祥石贵阳
- 关键词：枯草芽胞杆菌羰基还原酶
- 羰基还原酶基因与葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达及其在不对称还原产麻黄碱中的初步应用被引量：3
- 2010年
- 通过羰基还原酶基因与葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达,解决羰基还原酶在催化底物过程中的辅酶再生的问题。以枯草芽孢杆菌基因组为模板,采用PCR的手段扩增得到葡萄糖脱氢酶基因gdh与已构建好的pKK223-3-mldh连接,转化E.coli JM109获得重组菌E.coli pKK223-3-gdh-mldh。SDS-PAGE结果表明羰基还原酶及葡萄糖脱氢酶均有表达其相对分子质量分别为43 kD和31 kD。液相检测重组菌细胞破碎液在不添加外源的葡萄糖脱氢酶的情况下能专一性转化1-苯基-2-甲氨基丙酮简称MAK为d-伪麻黄碱。全细胞转化实验表明0.1 g湿菌体与0.15 mg MAK及6 mg葡萄糖30℃反应10 h生成0.091 mg d-伪麻黄碱,MAK的摩尔转化率为67.4%。
- 宇文伟刚张梁王正祥石贵阳
- 关键词：羰基还原酶葡萄糖脱氢酶辅酶再生共表达
- 构建羰基还原酶基因工程菌生物转化产l-麻黄碱被引量：1
- 2009年
- 以筛选得到的Morganella morganiiJ-8细菌的基因组为模板,通过PCR扩增得到目的基因mdlh2。核苷酸序列测定结果表明,基因全长1 046 bp。以pET28a(+)为表达载体,构建重组质粒pET28a(+)-mldh2,并在E.coliBL21(DE3)中表达。利用表达产物进行生物转化,发现其具有催化底物1-苯基-2-甲氨基丙酮(简称MAK)产l-麻黄碱的活力。进一步考察了诱导时间和IPTG浓度对重组菌表达的羰基还原酶的影响,37℃下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组羰基还原酶的酶活达到0.2 U/mg蛋白,转化液中l-麻黄碱质量浓度达到45 mg/L。
- 孟晨璐张梁丁重阳王正祥石贵阳
- 关键词：羰基还原酶麻黄碱
