上海市浦江人才计划项目(12PJ1433700)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：张鸿声黄进傅吉强易红飞赵晓杰更多>>
- 相关机构：同济大学云南省肿瘤医院昆明医科大学更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种高效省时的利用磷酸钙转染DNA的改进方法被引量：1
- 2016年
- 对传统磷酸钙转染方法进行改进,即在经胰酶消化处理成悬浮状态的293T细胞悬液中直接加入磷酸钙转染试剂,而不需待其贴壁后再加转染试剂进行转染.通过比较悬浮和贴壁状态下293T细胞的转染效率、细胞增殖和荧光强度等指标,发现这两种转染方法的各项指标没有显著性差异.结果表明,293T细胞在悬浮状态下进行磷酸钙转染与传统的贴壁转染能够达到同等效果,在用胰酶消化的单细胞悬液中直接加入磷酸钙转染试剂进行转染,不影响细胞的转染效果,节省了操作步骤,缩短了操作时间.
- 黄进傅吉强张庆华
- 关键词：293T细胞磷酸钙细胞转染
- 高效的红细胞特异性表达系统的建立和优化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨慢病毒载体中红细胞特异性基因调控元件的优化对小鼠红白血病(murine erythroleu-kemia,MEL)细胞向红系终端分化期间组织特异性表达重组蛋白的影响。方法改变红细胞特异性β-珠蛋白启动子编码长度、改变β-珠蛋白基因位点控制区DNaseⅠ高敏位点(hypersensitive site,HS)的组合、删除β-珠蛋白3'端增强子或β-珠蛋白内含子IVS2,由此构建一系列由不同缺失组合的基因调控元件控制目的基因(如人凝血因子Ⅸ)表达的慢病毒载体,包装成重组慢病毒,测定病毒滴度,并分别感染小鼠MEL细胞。用O6-苄基鸟嘌呤(O6-benzylguanine,BG)-卡莫司汀[1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea,BCNU]联合筛选以富集感染的阳性细胞,用酶联免疫吸附测定方法检测目的基因的表达,评估不同基因调控元件组合对重组慢病毒载体所携带的目的基因表达的影响。结果经限制性内切酶谱分析和序列测定,构建的慢病毒载体结构正确;三质粒系统瞬时转染人肾胚胎293T细胞包装的重组自灭活慢病毒可通过长时间高速离心有效浓缩;用50μmol/L BG-50μmol/L BCNU联合筛选可有效富集感染的阳性细胞;经环六亚甲基双乙酰胺(N,N'-hexamethyle-nebisacetamide,HMBA)诱导第8天的106个小鼠MEL细胞中表达的重组人凝血因子Ⅸ平均质量浓度达到正常水平的3.8%(191 ng/ml)。结论通过适当减少调控元件优化慢病毒载体不仅有助于提高携带的外源基因片段长度、增加载体制备的有效性、实现温和提高目的基因产物达到治疗水平需求量的目的,而且为开展以红细胞特异性表达载体介导的携带蛋白类药物的红细胞治疗以及非血液病基因治疗奠定临床前的研究基础。
- 潘欣狄升蒙张胜男张艳磊易红飞赵晓杰黄进张鸿声田爱王熙才
- 关键词：慢病毒载体基因调控
- 嵌合抗原受体T细胞肿瘤治疗的前生、今世和将来被引量：5
- 2014年
- 嵌合抗原受体修饰的T细胞在B淋巴细胞性白血病的治疗上已经取得突破性进展。近来,美国的几个临床研究中心报道了在这群患者中取得高达60%~80%临床反应率的良好疗效。这一振奋人心的结果带来了人们对免疫治疗新的热情和随之而来的大型制药公司和投资机构对这一领域的关注。免疫治疗需要在加强有效性的基础上,发展出更多的免疫治疗方法以增加这一治疗的多样性,才会对癌症这一对人类健康具有重大挑战的疾病产生真正的影响。我们相信随着转化医学研究的不断深入,21世纪将是免疫治疗走向癌症治疗中心舞台的时代。
- 张鸿声
- 关键词：T细胞肿瘤免疫细胞治疗
