广东省重大科技攻关项目(2005A10904001)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：朱钦昌王一飞张春龙刘秋英张美英更多>>
- 相关机构：上海吉玛制药技术有限公司暨南大学四川大学更多>>
- 发文基金：广东省重大科技攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- siRNA干扰HSV-1 UL30 DNA聚合酶基因的研究
- 2008年
- 目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响。方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对HSV-1繁殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终形成的空斑直径分别比对照组减小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01)。结论:筛选到高效抑制UL30的3对siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,说明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延缓病斑的扩大和病斑数目的增长,对病毒的繁殖有一定的抑制效果。
- 张春龙何秋璟仁哲朱钦昌张美英刘秋英张佩琢王一飞
- 关键词：SIRNARNA干扰
- siRNA干扰HSV1 gD糖蛋白基因的研究被引量：5
- 2007年
- 以HSV1 gD糖蛋白基因为靶点,设计合成5对siRNA,并构建pEGFP-N1-gD融合表达质粒,脂质体法共转染Vero细胞,利用绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的特征,流式细胞仪筛选特异沉默gD表达的siRNA。然后有效siRNA转染Vero细胞并感染HSV1,通过空斑减数实验,Real-time PCR和子代病毒滴度评价其对HSV-1感染的作用。结果显示siRNA能有效抑制gD-EGFP融合蛋白和感染细胞内gD糖蛋白的表达,但对HSV-1的感染性无明显抑制作用,故选择gD作为siRNA抗病毒靶点还需进一步的论证。
- 朱钦昌任哲张春龙张美英廖红娟刘秋英张佩琢李久香胡巢凤王华东王一飞
- 关键词：单纯疱疹病毒1型糖蛋白DRNA干扰抗病毒
