国家自然科学基金(81271723)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- 模拟人体环境下拓扑结构对细胞倾向性的影响
- 2014年
- 目的 观察微纳米拓扑结构在体外模拟的人体环境下对细胞倾向性生长的影响.方法 制备宽度分别为12.5、25.0、50.0、75.0 μm的拓扑聚二甲基硅氧烷（PDMS）以及光滑的PDMS,分为实验组及对照组（E组）,实验组分A组（12.5μm）、B组（25.0 μm）、C组（50.0 μm）及D组（75.0μm）4个亚组.按4种实验方式分别将成纤维细胞和神经胶质瘤细胞培养于各组PDMS上,观察细胞的形态、生长和分布,选择PDMS上、PDMS上方0～ 30μm范围内以及PDMS上方200～300 μm各5个视野,测量细胞长轴与水平线夹角α角度值,分为0～ 30°、31°～ 60°以及61°～ 90°3个等级,统计并分析测量结果.结果 各组细胞均沿PDMS沟槽结构生长,细胞α角大多数分布于0 ～30°;4个亚组中,A组和B组这一倾向性较C组及D组更明显.PDMS上方0～ 30 μm,只有B组细胞呈现0 ～ 30°的倾向性生长,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）.PDMS上方200 ～ 300μm,各组均无明显生长倾向性,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 模拟人体的环境下,拓扑结构仍能影响细胞出现倾向性生长.宽度为12.5μm和25.0 μm的拓扑结构对细胞倾向性影响最明显,随着沟槽宽度的增加,对细胞倾向性的影响也减弱.
- 马昌科沈忆新孙涛韩国霞毛锦宁
- 关键词：拓扑细胞行为聚二甲基硅氧烷
- 小鼠室管膜下区神经干细胞增殖及分化研究被引量：6
- 2015年
- 目的探讨新生小鼠室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外培养方法,为治疗神经系统疾病寻找合适的种子细胞。方法取SPF级新生ICR小鼠SVZ组织,采用机械法和酶消化法分离培养NSCs并传代,倒置显微镜下观察细胞形态。取第3代细胞行抗SOX-2和抗巢蛋白(Nestin)免疫荧光染色鉴定,Brd U标记法及MTT法检测比较培养3、7 d细胞增殖能力。以未添加b FGF和EGF的无血清培养基诱导第3代NSCs分化,抗β-微管蛋白Ⅲ(Tuj-1)、GFAP免疫荧光染色检测比较诱导3、7 d NSCs向神经元及星形胶质细胞分化的能力。结果成功分离培养新生小鼠SVZ组织中细胞,倒置显微镜下见原代培养3 d即有神经球形成,至7 d时见大量悬浮生长神经球,且体积较前增大,部分神经球出现融合及贴壁分化现象。细胞呈典型NSCs形态。免疫荧光染色鉴定获得细胞为NSCs。细胞增殖能力检测显示,体外培养3 d的NSCs中Brd U阳性细胞数为(75.817±2.961)个、吸光度(A)值为0.478±0.025,均显著高于培养7 d的(56.600±4.881)个、0.366±0.032(t=3.366,P=0.028;t=2.752,P=0.011)。经诱导培养后,NSCs能分化为神经元、星形胶质细胞;细胞分化能力检测显示,诱导分化3 d时Tuj-1、GFAP阳性细胞百分比分别为23.1%±3.7%、23.7%±3.8%,显著低于诱导分化7 d(40.1%±3.6%、37.1%±4.5%)(t=3.285,P=0.030;t=3.930,P=0.017)。结论体外培养的新生小鼠SVZ处NSCs时具有自我增殖和多分化潜能,且体外培养时间不同,细胞增殖、分化能力亦不同。
- 张涛李文杰王峰张宇徐艾强沈忆新
- 关键词：室管膜下区神经干细胞细胞分化细胞增殖小鼠
- 丝素蛋白多孔支架联合硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤的治疗作用被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨丝素蛋白多孔支架（porous silk fibroin scaffolds,PSFSs）联合硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC,ChABC）治疗大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）的作用. 方法 建立96只SD大鼠T9节段全横断损伤模型,按随机数字表法分为4组：对照组、PSFSs组、ChABC组和PSFSs＋ ChABC组.术后采用BBB评分法评估大鼠后肢运动恢复情况,采用免疫组织化学染色、蛋白免疫印迹分析检测损伤部位神经丝蛋白-200（neurofilament-200,NF-200）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、生长相关蛋白-43（growth associated protein 43,GAP-43）的表达水平,免疫荧光染色检测GAP-43的表达强度和轴突再生情况,比较各组神经功能恢复情况. 结果 术后4周对照组、PSFSs组、ChABC组和PSFSs＋ ChABC组.BBB评分分别为5.3±0.7,8.1±0.8,9.0±1.1,13.7±1.3（P＜0.05）,与对照组比较,其他3组NF-200、GAP-43阳性染色的积分吸光度（integral absorbance,IA）值升高（P＜0.05）,GFAP染色阳性面积降低（P＜0.05）.免疫荧光染色显示,PSFSs＋ ChABC组损伤区内通过的GAP-43阳性神经纤维多于其他3组.免疫印迹分析表明各组NF-200、GFAP、GAP-43表达量差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 PSFSs与ChABC联合移植能够促进脊髓损伤大鼠轴突再生,并抑制胶质瘢痕增殖,从而促进运动功能恢复.
- 尤克民沈忆新陈道东范志海张鹏张锋左保齐
- 关键词：脊髓损伤
- 种植骨髓间充质干细胞的丝素蛋白多孔支架治疗脊髓损伤
- 2014年
- 目的 观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）种植于丝素蛋白多孔支架（PSFSs）后对大鼠脊髓损伤（SCI）的治疗作用.方法 将96只SD大鼠随机分成对照组、PSFSs组、BMSCs组及PSFSs±BMSCs移植组,每组24只.移植后l、2、4周采用Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分法评估大鼠神经功能恢复情况,采用免疫组织化学染色、Western blot分析检测损伤部位生长相关蛋白43（GAP-43）、髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达水平,免疫荧光染色检测GAP-43的表达强度.结果 术后4周BBB评分实验组较对照组显著提高,各组间差异有统计学意义（分别为5.23±1.13、7.17 ±1.11、7.35±1.59、9.43 ±2.16,P＜0.05）.D组GAP43免疫组织化学染色积分吸光度（IA）值高于其他组（分别为13.94±3.63、26.07±5.31、22.14±4.56、33.03±7.58）,MBP免疫组织化学染色IA值高于其他组,分别为13.80±3.41、21.16±3.36、32.96±7.74、44.06 ±7.99,各组间差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色示D组损伤区内具有更多表达GAP-43的生长锥.Western blot分析表明各组GAP43的灰度值比值分别为0.16±0.04、0.41 ±0.05、0.33 ±0.06、0.72 ±0.16,MBP的灰度值比值分别为0.96 ±0.11、1.85±0.08、2.14 ±0.16、2.43 ±0.31,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 种植BMSCs的PSFSs能够促进SCI大鼠轴突再生、髓鞘化及后肢运动功能的恢复,其疗效优于单一方法.
- 尤克民沈忆新陈道东范志海张鹏张锋
- 关键词：脊髓损伤骨髓间充质干细胞丝素蛋白
- 纤维蛋白凝胶的包埋对大孔支架上人真皮成纤维细胞的影响
- 2014年
- 我们选择纤维蛋白凝胶包埋镍网成纤维细胞复合物观察模拟体内共培养下不同孔径的大孔支架对细胞的影响。一、材料与方法1.材料：人真皮成纤维细胞取自腹部抽脂术去掉的皮肤,方法参照文献[1]。2.模型制作：用聚二甲基硅氧烷（PDMS）夹持布满均一圆孔的圆形镍网边缘（直径：3.05 mm,厚度：30μm）,根据圆孔直径600、400、270、170、100μm分为5种型号,消毒后烘干,置入12孔板中。镍网上接种密度为5×10-8/L的成纤维细胞后,
- 陈道东沈忆新张鹏孙涛
- 关键词：真皮成纤维细胞蛋白凝胶PDMS细胞黏附
- 乙醇-水蒸气处理对静电纺蚕丝蛋白纳米纤维结构性能的影响被引量：3
- 2013年
- 采用乙醇-水蒸气处理静电纺蚕丝蛋白(SF)纳米纤维,并通过扫描电子显微镜、红外光谱、X-射线衍射等分析研究了SF在乙醇蒸汽中的构象转变,探索了静电纺SF纳米纤维结构转变机理。微观形貌研究表明,水蒸气会导致SF纳米纤维直径增大并发生相互粘连。红外光谱和X-射线研究表明,SF纳米纤维在纯乙醇蒸汽中难以发生结构转变,在20%～80%乙醇中主要形成silkⅡ结构,在纯水蒸气中silkⅡ和silkⅠ结构并存;研究认为乙醇由于分子尺寸较大,因此处理时难以深入到SF纳米纤维内部,因此不会引起纳米纤维形态与结构变化,而水分子会渗入到SF纳米纤维内部引起纤维溶胀,同时促使乙醇分子进入纤维内部,加速SF结构发生转变。
- 范志海谢宗刚张锋左保齐
- 关键词：静电纺丝构象转变
- 降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化被引量：1
- 2015年
- 降钙素基因相关肽（CGRP）是一种含有37个氨基酸的生物活性多肽,可促进多种细胞的增殖[1].本研究旨在观察CGRP对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响.一、材料与方法1.材料：无特定病原体（SPF）级新生（24h内）CD1小鼠（上海斯莱克实验动物有限公司）,雌雄不拘;神经干细胞培养基：DMEM/F12和Neurobasal（比例1∶1）、1％ N2及1％ B27（均购自Invitrogen公司）;20μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和20 μg/L表皮生长因子（EGF,均购自Peprotech公司）;一抗：大鼠抗巢蛋白（Nestin）（Millipore公司）;兔抗β-微管蛋白Ⅲ（Tuj-1,Abcam公司）;小鼠抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP,Sigma公司）;山羊抗性别决定基因高迁移率组蛋白（SOX-2,Santa Cruz公司）;二抗：Cy3耦联的驴抗兔IgG（Jackson Immuno Research公司）;Alexa Fluor 488驴抗大鼠IgG、Alexa Fluor 488驴抗山羊IgG及Alexa Fluor 647驴抗小鼠IgG（Invitrogen公司）;倒置显微镜（Olympus公司）;激光共聚焦显微镜（Zeiss公司）;CGRP（大鼠来源,Sigma公司）,以1 g/L溶于双蒸水中储存于-20℃长期保存备用[2].
- 张涛李文杰范志海张鹏王峰张宇沈忆新
- 关键词：降钙素基因相关肽神经干细胞神经元分化碱性成纤维细胞生长因子胶质纤维酸性蛋白激光共聚焦显微镜
- 腰椎间盘突出症髓核的病理学变化与MRI的相关性被引量：6
- 2013年
- 目的探讨腰椎间盘突出症患者髓核的病理学变化及与MRI表现之间的相关性。方法随机选取100例腰椎间盘突出症患者,计算相对表观弥散系数(ADC)值。对髓核组织进行HE及甲苯胺蓝染色,并分析MRI相对强度与病理学变化的关系。结果 MRI信号检测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ级的椎间盘分别为0、38、46、13和3个,其中的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ-Ⅴ级分别对应病理学变化轻、中、重度。MRI相对ADC值越低,髓核退变程度越严重;且MRI相对强度与病理学变化呈正相关(r=0.4823,P<0.05)。结论 MRI髓核信号强度等级与椎间盘髓核细胞的病理学变化密切相关,可以为评估临床疗效及判断预后提供依据。
- 范志海金志高吕海军沈忆新
- 关键词：椎间盘突出髓核核磁共振成像
