国家自然科学基金(81271789)
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
- 相关作者：张茂俊顾一心梁昊何利华张建中更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所四川农业大学北京和睦家医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 利用基因芯片技术分析空肠弯曲菌的遗传特征被引量：1
- 2016年
- 目的为分析我国弯曲菌遗传特征,本研究根据已发表多株弯曲菌的全基因组测序特征及比对结果自行设计基因芯片,利用芯片对我国不同宿主来源菌株进行遗传特异性分析。方法根据前期基因组水平比对分析的结果,利用Combimatrix tiling Custom ArrayTM90K芯片,设计DNA芯片。芯片包含已测序菌株ICDCCJ07001、269.97、NCTC11168、81-176、81-116和RM1221共3384个CDS的探针序列,以及空肠弯曲菌耐药及致病性相关2个质粒共80个CDS的探针序列,与脂寡糖的合成相关基因簇16种共219个CDS的探针序列、荚膜多糖合成相关基因簇7种共160个CDS的所有序列。对我国不同宿主来源27株分离菌株提取DNA,利用芯片进行杂交,获得杂交信息并分析不同菌株CDS分布特征分析及聚类特点。结果中国菌株的主要变异区域主要存在于与脂寡糖、荚膜多糖合成相关的基因簇、鞭毛修饰相关的基因簇、DNA限制/修饰相关的基因簇以及空肠弯曲菌Mu样噬菌体基因簇。基因组水平不同来源菌株CDS分布的聚类结果没有发现显著的宿主归因特点,但GBS相关菌株脂寡糖合成相关基因组成具有共性特征。结论通过验证以及与过去研究的比较,本次研究中的基因芯片技术结果准确可信,本研究所用基因芯片在分析空肠弯曲菌基因多态性方面具有很好的优势,可用于弯曲菌遗传特征和重要毒力因子的分析和检测。
- 梁昊刘红莹尤元海顾一心张艾煜王敏何利华孟凡亮张建中张茂俊
- 关键词：空肠弯曲菌基因芯片
- 我国607株不同宿主来源弯曲菌耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3分布分析被引量：6
- 2015年
- 目的了解不同宿主来源弯曲菌对氨基糖苷类抗生素的耐药现状,确定耐药菌株中氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aph A-3的分布,并初步了解耐药菌株的菌型特征。方法利用琼脂稀释法分析不同宿主来源菌株针对链霉素最小抑菌浓度(MIC),对耐药的221株菌通过聚合酶链反应筛查氨基糖苷类耐药基因簇aad E-sat4-aph A-3的分布情况。选取不同来源共100株耐药菌株进行多位点序列分型分析并进行聚类分析,获得耐药菌株的菌型特征及遗传相关性。结果 607株弯曲菌中共筛查到221株(36.41%)链霉素耐药株(MIC≥4μg/ml),其中腹泻患者来源菌株耐药率33.33%(78/234)、鸡来源菌株耐药率35.14%(123/350)、猪来源菌株耐药率86.96%(20/23)。空肠弯曲菌耐药率14.37%(51/355),结肠弯曲菌耐药率67.46%(170/252)。24株(10.86%)链霉素耐药弯曲菌中筛查到aad E-sat4-aph A-3耐药基因簇,分别来自腹泻患者14株、鸡4株、猪6株。100株耐药菌株共分为58种ST序列型。结论结肠弯曲菌链霉素耐药率明显高于空肠弯曲菌,猪源弯曲菌耐药率显著高于人源和鸡源,空肠弯曲菌与结肠弯曲菌中均筛查到aad E-sat4-aph A-3耐药基因簇。
- 张艾煜顾一心梁昊邓义贞何利华张建中张茂俊
- 关键词：基因簇弯曲菌
- 不同品系养殖鸡弯曲菌感染调查被引量：2
- 2014年
- 目的了解规模化养殖鸡弯曲菌感染现状。方法随机采集北京市某规模化养殖场蛋鸡(养殖时间大于120d)和肉鸡(养殖时间小于42d)肛拭子标本,采用两种分离培养方案(80份蛋鸡和200份肉鸡标本直接经选择性培养基划线培养,150份肉鸡标本经24h增菌后采用选择性培养基划线培养)进行弯曲菌的微需氧(5%O2、10%CO2和85%N2)培养。从肉鸡标本中随机选取50份,提取病原菌DNA,进行弯曲菌荧光定量PCR检测,并对相同培养条件下生长菌落进行质谱鉴定。结果 80份蛋鸡标本中分离到24株空肠弯曲菌,阳性率为30%;350份肉鸡标本未检测到弯曲菌。通过质谱菌落鉴定,205份标本检测到奇异变形杆菌,检出率为58.6%;145份标本检测到大肠埃希菌,检出率为41.4%。50份肉鸡粪便标本弯曲菌荧光定量PCR检测结果均为阴性,与分离培养结果一致。结论北京市规模化养殖蛋鸡弯曲菌感染率较高,饲养时间较短的肉鸡未发现弯曲菌感染。
- 刘夏阳闫革彬顾一心张慧芳何利华肖迪刘红莹张建中张茂俊
- 关键词：肉鸡弯曲菌荧光定量PCR
- 感染性腹泻患者弯曲菌感染的实验室检测及监测被引量：7
- 2014年
- 目的了解我国腹泻患者弯曲菌的感染现状。方法采用体外分离培养以及特异核苷酸检测法对某医院腹泻患者粪便标本进行持续8个月的弯曲菌感染的监测。2013年4-11月持续收集北京某医院感染性腹泻门诊患者粪便标本278份,分别采用直接划线培养、增菌培养以及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)的方法检测感染性腹泻患者弯曲菌的感染现状。结果 278份感染性腹泻患者粪便标本使用分离培养和特异核苷酸检测共有16份标本为空肠弯曲菌阳性。其中直接划线培养分离到6株空肠弯曲菌,阳性率为2.2%(6/278),增菌培养分离到2株空肠弯曲菌,阳性率为0.7%(2/278);特异核苷酸检测获得14份阳性标本,阳性率为5.0%(14/278)。分离培养、real-time PCR方法检测感染性腹泻患者粪便标本中弯曲菌的阳性率差异有统计学意义(χ2=36.425,P=0.039)。结论本次检测结果表明感染性腹泻患者中弯曲菌的检出率显著低于国内最新报道7.1%。与直接分离培养相比,增菌培养法检测粪便中弯曲菌的灵敏度显著降低。real-time PCR法能够快速检测腹泻患者弯曲菌的感染情况,其灵敏度(14/16,87.5%)高于分离培养(6/16,37.5%)。
- 刘夏阳于俊峰顾一心梁昊张茂俊
- 关键词：弯曲菌实时荧光定量PCR
- 北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌污染初步分析被引量：6
- 2016年
- 目的了解北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌的污染情况。方法随机购买北京地区6个农贸市场零售鸡肉样本60份,应用驱动增强双孔滤膜法对鸡肉样品进行弓形杆菌的分离培养,利用多重PCR及16S rRNA、rpo B基因测序的方法进行菌株及菌种鉴定。结果 60份零售鸡肉样本弓形杆菌的检出率为73.33%(44/60)。44份阳性标本中,共获得125株弓形杆菌分离株,其中以嗜低温弓形杆菌为主(91.20%),其次是布氏弓形杆菌(8.00%),斯氏弓形杆菌(0.80%)。两种及以上菌种混合污染率为15.00%(9/60)。结论驱动增强双孔滤膜法可有效分离肉类样本中弓形杆菌。本地区零售鸡肉样本中弓形杆菌污染严重,鸡肉中嗜低温弓形杆菌的污染高于布氏弓形杆菌。
- 王敏顾一心梁昊付燕燕何利华张建中张茂俊
- 关键词：鸡肉
- 规模化养殖肉鸡泄殖腔拭子弯曲菌分离及PFGE分型分析被引量：8
- 2016年
- 为了了解规模化养殖肉鸡弯曲菌的带菌现状,比较2种基础培养基对于粪便标本弯曲菌检出差异,获得菌株菌型特征。本研究选择规模化肉鸡养殖场共300份肉鸡泄殖腔拭子,分别应用Columbia、Karmali 2种基础培养基,采用滤膜过滤法进行弯曲菌的分离培养。结合革兰染色、生化鉴定以及PCR方法对疑似菌落进行弯曲菌菌种鉴定;选择60株空肠弯曲菌进行脉冲场凝胶电泳分析并用BioNumerics软件对脉冲场凝胶电泳结果进行聚类分析。结果显示,300份泄殖腔拭子样品中,弯曲菌的检出率为51.33%(154/300)。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检出率分别为40%(120/300)和14.67%(44/300),空、结肠弯曲菌混合感染的感染率为3.33%(10/300)。检测标本中空肠弯曲菌的感染率显著大于结肠弯曲菌(P<0.01)。应用Columbia、Karmali培养基对弯曲菌的检出率分别为41.67%(125/300)、42.67%(128/300),2种基础培养基检出率无显著性差异(P>0.05),2种培养基的补充使用样本的检出率增加了15%(45/300)。本次滤膜过滤法同时获得相同培养条件下标本中其他细菌3种,分别为:Cellulosimicrobiumsp.、Microbacteriumsp.、Helicobacter brante,共45株。60株空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳共分为39个带型。结果表明,本研究发现规模化养殖肉鸡中弯曲菌的携带情况较为严重,相同鸡场及不同鸡场分离菌株脉冲场凝胶电泳带型呈多样性特征。滤膜过滤法能够有效检测家禽肛拭子标本中弯曲菌,缩减了因使用选择性抗生素添加剂的成本。本研究没有检出除空肠弯曲菌和结肠弯曲菌外的其他弯曲菌菌种。
- 邓义贞顾一心何利华张艾煜梁昊张建中张茂俊邓俊良
- 关键词：弯曲菌分离率COLUMBIA
