国家重点基础研究发展计划(2012CB722301)
- 作品数：20 被引量：54H指数：5
- 相关作者：夏立秋丁学知胡胜标孙运军张友明更多>>
- 相关机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 鱼类病原菌嗜水气单胞菌新菌株AhX040的分离鉴定及其拮抗菌筛选被引量：1
- 2017年
- 嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于弧菌科气单胞菌属,是一种条件性致病菌,广泛存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人类粪便中,对水产动物、畜禽和人类均有致病性。嗜水气单胞菌作为淡水养殖动物重要的病原菌之一,目前已确定淡水鱼类细菌性败血症、
- 张印江何涛赵峰周朋吉黄同龙何恋穰杰孙运军丁学知夏立秋
- 关键词：嗜水气单胞菌鱼类病原菌拮抗菌淡水养殖动物细菌性败血症
- 粘细菌新菌株的分离纯化及其抗肿瘤活性研究
- 粘细菌(myxobacteria)是一类好氧的革兰阴性菌,分类上属于变形杆菌(Proteus)的Delta分支。粘细菌因其具有复杂的多细胞聚集行为特性,且能产生丰富的次级代谢产物而受到广泛关注,在农业、医药、生态环境等方...
- 文也
- 关键词：粘细菌次级代谢产物抗肿瘤活性
- 文献传递
- sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究
- 2015年
- 目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,Ni-IDA柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱鉴定。纯化后的重组蛋白作用HUVEC,He La,Hep-3B,HCT-116,MDA-MB-231,H460细胞检测蛋白生物学作用。结果:DNA测序结果证实成功构建了重组质粒p ET28a-sTrail,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱检测显示成功表达sTRAIL蛋白,MTT法和流式细胞术结果显示,sTRAIL蛋白对肿瘤细胞包括He La,HCT-116,MDA-MB-231,H460,Hep-3B细胞有良好的生物活性,对正常的HUVEC细胞无毒性。结论:成功构建可以高效表达sTRAIL蛋白的原核表达载体,优化蛋白的表达和纯化后所得sTRAIL蛋白具有良好的抗肿瘤生物活性,为研究和发展利用sTRAIL蛋白作为临床治疗抗肿瘤药物提供了重要基础。
- 王世奇刘婧莹刘晨浪李纯胡晓凤夏立秋张友明
- 关键词：基因克隆原核表达蛋白纯化抗肿瘤活性
- fcl基因对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成及生长发育的影响被引量：4
- 2019年
- fcl基因编码的GDP-岩藻糖合成酶(GDP fucose synthetase,GFS),能催化由GDP-D-甘露糖合成GDP-L-岩藻糖过程中的两步差向异构酶和还原酶反应;还参与氨基糖和核糖的生物合成,是调控生物体糖代谢、核苷酸代谢的关键酶之一。通过前期基因组测序表明须糖多孢菌Saccharopolyspora pogona中存在fcl基因。利用基因工程技术构建了fcl基因的过表达菌株S. pogona-fcl和敲除菌株S. pogona-Δfcl。结果表明该基因对菌株生长发育、蛋白表达及其转录水平、杀虫活性、丁烯基多杀菌素的生物合成均存在影响。经HPLC分析显示,S. pogona-Δfcl的丁烯基多杀菌素产量增加为野生型菌株的130%,S.pogona-fcl的丁烯基多杀菌素产量降低了25%。生测结果显示,与野生型菌株相比S.pogona-Δfcl对棉铃虫的杀虫活性明显增强,而S.pogona-fcl的杀虫活性降低。利用扫描电镜观察发现,S. pogona-Δfcl菌丝体表面出现褶皱,呈现短棒状,S. pogona-fcl菌丝形态与野生型菌株一致。以上结果表明,fcl基因的敲除影响菌丝体的生长发育,能促进丁烯基多杀菌素的生物合成和增强杀虫活性,该基因的过表达抑制了丁烯基多杀菌素的生物合成和降低了杀虫活性。SDS-PAGE结果表明,三株菌株在96 h时蛋白表达差异最为明显。对差异蛋白通过实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,三菌株蛋白的转录水平存在显著表达差异。通过研究结果构建了网络代谢调控图,分析fcl基因对须糖多孢菌生长发育及丁烯基多杀菌素生物合成代谢调控网络途径的影响,初步构建了fcl基因调控的代谢途径,为揭示丁烯基多杀菌素生物合成的调控机制及相关后续研究提供了实验依据。
- 彭胜男何昊城苑爽芹穰杰胡胜标孙运军余子全黄伟涛胡益波丁学知夏立秋
- 关键词：生物合成生长发育
- 维氏气单胞菌对草鱼溶菌酶表达的影响及其免疫效果的研究
- 近几年来由于养殖方法不当和水体环境破坏导致各种鱼类病害频繁发生，给鱼类养殖业带来了很大的经济损失。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)可以引起草鱼(Ctenopharyngodon idellus)败血症，...
- 陈佩
- 关键词：草鱼免疫刺激剂维氏气单胞菌
- 文献传递
- 叶柄粘球菌STXZ77的分离鉴定及抗肿瘤活性被引量：3
- 2016年
- 目的:从土样中分离纯化粘细菌,对其进行鉴定与归类,以丰富粘细菌菌种资源,并对其进行抗肿瘤活性初步研究,为抗肿瘤药物开发奠定基础。方法:采用灭活大肠杆菌诱导法,从土样中分离纯化粘细菌,结合形态观察、生理生化特征及16S rRNA基因序列同源性分析进行菌株鉴定;向发酵液上清中加入XAD-16大孔吸附树脂提取发酵产物粗提物,CCK-8法进行体外抗肿瘤活性研究;RP-HPLC分离抗肿瘤活性组分,LC-MS/MS分析其分子质量。结果:分离并鉴定了STXZ77菌株,命名为Myxococcus stipitatus STXZ77。该菌株的发酵产物XAD-16树脂粗提物对小鼠黑色素瘤细胞B16、小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞SMMC-7721、人宫颈癌细胞He La、人结肠癌细胞SW480等多种肿瘤细胞具有较好的细胞毒性,作用24h的IC_(50)值分别为5.34μg/ml、13.50μg/ml、11.93μg/ml、28.70μg/ml、48.09μg/ml,而对正常细胞人脐静脉血管内皮细胞HUVEC的毒性较小,IC_(50)值为17.09μg/ml,小于B16、4T1及SMMC-7721的细胞毒性。RP-HPLC分离得到抗肿瘤活性组分AP-C,质谱分析其分子质量为422.99m/z。结论:从土样中分离得到粘细菌Myxococcus stipitatus STXZ77,从该菌中分离得到抗肿瘤活性组分AP-C,具有开发成抗肿瘤药物的潜在价值。
- 雷良欢黄同龙魏慧廖继燕吴雨婧周偲夏立秋张友明
- 关键词：粘细菌纯化抗肿瘤
- 一株粘细菌Myxococcus sp.STXZ90的分离鉴定及生物活性分析被引量：1
- 2017年
- 采用灭活大肠杆菌诱导法分离粘细菌,通过形态观察、生理生化实验、16S rRNA基因序列同源性分析,对其进行鉴定并归类.并通过平板对峙法、肿瘤细胞毒性实验等检测粘细菌代谢产物的抑菌和抗肿瘤活性,RPHPLC分离抗肿瘤活性物质.分离得到一株粘细菌,鉴定结果表明该菌株为黄色粘球菌,将其命名为Myxococcus sp.STXZ90(简写为STXZ90).抑菌试验表明,STXZ90对多种人类病原菌及鱼类致病细菌如产气肠杆菌、嗜水气单胞菌等具有较高的抑制活性;STXZ90发酵上清的甲醇粗提物对多种肿瘤细胞具有广谱高效的抑制肿瘤细胞活性,对Hep-3B,Hela和HUVEC等的最低半抑制浓度(IC_(50))为0.279~1.228 mg/L.对该甲醇粗提物进行RP-HPLC分离,得到2个较纯的单峰物质,体外肿瘤细胞实验结果显示该组分有较强的抑制肿瘤细胞活性.
- 黄同龙雷良欢廖继燕周偲吴雨婧李纯魏慧夏立秋丁学知张友明
- 关键词：粘细菌次级代谢产物高效液相色谱
- 抗肿瘤靶向工程菌的高密度发酵及菌粉研制
- 2018年
- 为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培养基成分为:可溶性淀粉2 g/L、酵母抽提物50.3 g/L、K_2HPO_4 14.26 g/L、KH_2PO_43 g/L、MgSO_4 0.3 g/L、微量元素母液2 mL/L、接种量3%。发酵后溶液中菌体OD600 nm达到7.602,菌体生物量达到2.96×109 CFU/mL,比优化前提高了78.3%。以冻干保护剂在冷冻干燥过程中对工程菌株的保护效果为研究对象,通过正交试验得到制成菌粉的最佳保护剂配方为脱脂乳14.25 g/100 mL、蔗糖3 g/100 mL、抗坏血酸钠3 g/100 mL,优化后菌体冻干粉存活率可达86.32%,利于制成延长贮存期的口服菌粉胶囊。
- 王灿莫湘涛张峰吴柳娟李躺夏立秋
- 关键词：高密度发酵响应面分析法冻干保护剂
- 亮氨酰氨肽酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及次级代谢产物合成的影响被引量：3
- 2016年
- 【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中的pep A基因同源片段,经酶切连接技术构建敲除载体p OJ260-pep A;通过接合转移和单交换同源重组将该载体整合至刺糖多孢菌染色体中,获得工程菌株S.sp-△pep A;利用培养特征、形态学、高效液相色谱、SDS-PAGE等方法对菌株进行研究分析。【结果】工程菌株S.sp-△pep A菌丝片段化程度加剧,生长态势被延缓且生物量降低,但有效促进了多杀菌素的生物合成。阻断亮氨酰胺肽酶基因的表达使刺糖多孢菌菌体全蛋白表达情况发生明显改变,找到表达水平显著上调的差异蛋白核糖体蛋白亚基和醛基脱氢酶,核糖体蛋白亚基通过影响蛋白质代谢对菌体生长产生影响;醛基脱氢酶则可与乙醇脱氢酶、乙酰辅酶A的合成酶相互作用影响辅酶A合成,而辅酶A是合成多杀菌素的重要底物。【结论】在刺糖多孢菌合成多杀菌素的次级代谢过程中,pep A基因作为负调控因子发挥作用。
- 杨燕罗林根徐妙夏立秋
- 关键词：刺糖多孢菌阻断多杀菌素
- 遗传改造刺糖多孢菌构建多杀菌素高产菌株
- 土壤放线菌刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa）产生的次级代谢产物多杀菌素（Spinosyns）是一种新型大环内酯类天然产物,具有高效生物杀虫活性,是理想的绿色生物杀虫剂。但是野生刺糖多孢菌合成...
- 徐妙
- 关键词：刺糖多孢菌多杀菌素
- 文献传递
