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人釉原蛋白编码区基因原核表达载体的构建被引量：2: 2007年; 目的:构建人釉原蛋白(amelogenin,AMG)成熟肽编码区基因的原核表达载体。方法:运用TA克隆技术,将AMG基因片断插入质粒pMD 18-T,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,T4 DNA连接酶连接目的基因AMG与原核表达质粒pGEX-4T-1,最终获得重组原核表达载体pGEX-4T-1/AMG。结果:对重组质粒pMD 18-T/AMG和pGEX-4T-1/AMG进行酶切和测序鉴定,酶切电泳图和测序结果与预期结果一致。结论:成功构建了人釉原蛋白(AMG)成熟肽编码区基因的原核表达载体。; 张雪洋赵华胡飞赵红宇章锦才; 关键词：人釉原蛋白原核

人釉原蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达被引量：1: 2008年; 目的建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化。结果pGEX-4T-1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致。最佳诱导时间为14.5h、最佳诱导剂浓度为1.0mmol/L、最佳诱导温度为20℃,在此条件下目的蛋白的表达量达到峰值。在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的蛋白。提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化了AMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白。结论利用pGEX-4T-1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白。; 张雪洋赵华赵红宇王春先章锦才; 关键词：人釉原蛋白融合蛋白纯化

人釉原蛋白成熟肽基因的原核表达和纯化: 2009年; 目的建立人釉原蛋白（amelogenin，AMG）成熟肽基因原核表达和纯化的技术路线，获得纯化的人AMG成熟肽蛋白，以期为牙周炎的基础治疗提供依据。方法通过已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1-AMG，转化B[21大肠杆菌，原核表达后利用谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白纯化系统（glutathioneS-transfe Fasefusion protein purificationsystem，GSTrapFF）亲和层析柱进行重组人AMG的纯化。结果十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳图和蛋白质印迹法分析结果显示，获得纯化的相对分子质量为45000大小GST—AMG融合蛋白和19000大小的目的蛋白AMG。结论利用pGEX-4T-1-AMG-BL21体系成功获得了人AMG成熟肽基因在大肠杆菌中的原核表达和纯化。; 张雪洋章锦才赵华; 关键词：人釉原蛋白纯化

Emdogain作用下人牙周膜细胞的差异表达基因被引量：1: 2009年; 目的:筛选猪釉基质蛋白(EMD,Emdogain)作用于人牙周膜细胞后的差异表达基因。方法:培养第4代牙周膜细胞,实验组加入终浓度为100μg/mlEMD的无血清DMEM培养液,对照组为不含EMD的无血清DMEM培养液,培养3d,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果:共得到112条差异表达基因,上调基因101条,下调基因11条。结论:EMD作用于人牙周膜细胞后,与细胞的生长、增殖,细胞外基质的合成,新生血管的形成,骨形成等功能相关的基因表达都显著提高,而脂蛋白代谢相关基因和角化细胞生长相关基因的表达下调。; 张雪洋赵华章锦才; 关键词：釉基质蛋白牙周膜细胞差异表达基因

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广东省医学科学技术研究基金(A2006113)