国家自然科学基金(81072040)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 前列腺素E_2对结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响被引量：4
- 2012年
- 目的用前列腺素E2刺激结肠癌细胞,观察和探讨可否引起CacyBP/SIP核转位。方法根据hCacyBP/SIP序列设计引物,PCR扩增、酶切、连接、转化等分子克隆法构建含有钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)的慢病毒重组质粒,PCR鉴定、测序;将构建好的带有绿荧光蛋白的CacyBP-Lentivirus载体转染至结肠癌SW480细胞,用激光共聚焦显微镜检测CacyBP/SIP表达定位;前列腺素E2刺激后激光共聚焦显微镜、Western blot观察CacyBP/SIP在细胞中的定位。结果激光共聚焦和Westernblot发现:前列腺素E2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,用100μmol/L前列腺素E2刺激1h,CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核。结论前列腺素E2刺激可以引起CacyBP/SIP由胞质转位至细胞核。
- 谢福利翟惠虹
- 关键词：前列腺素E类核转位结肠肿瘤
- S100A6 siRNA的构建及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的利用小片段干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率,用Real-time PCR及Western blot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达。结果构建了3对S100A6-siRNA,荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功;RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低(P<0.05);与S100A6si-1、S100A6si-3组相比,S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果最明显(P<0.05)。结论成功构建了S100A6-siRNA,为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具。
- 冯珊珊杨博刘爱琴武婧翟惠虹
- 关键词：结肠癌S100A6SIRNA钙周期素结合蛋白
- 表皮生长因子对CacyBP/SIP过表达慢病毒载体转染的结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察和探讨表皮生长因子对钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)过表达慢病毒载体转染结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响。方法构建含有CacyBP/SIP的慢病毒重组质粒并转染至结肠癌SW480细胞。采用激光共聚焦显微镜及Western blot法观察100 ng/mL表皮生长因子刺激前后CacyBP/SIP蛋白在胞质、胞核中的定位及表达变化。结果激光共聚焦和Western blot检测结果发现,表皮生长因子刺激前CacyBP/SIP均主要定位和表达于细胞质,刺激1 h后CacyBP/SIP定位和表达于细胞胞质和胞核。结论表皮生长因子刺激过表达CacyBP/SIP慢病毒载体转染的结肠癌细胞可引起CacyBP/SIP由胞质转位至细胞核。
- 谢福利翟惠虹
- 关键词：钙周期素结合蛋白表皮生长因子核转位结肠肿瘤结肠癌
- 结肠癌SW480细胞中钙离子浓度对钙周期素结合蛋白的核转位及功能学影响
- 2017年
- 目的 观察在结肠癌SW480细胞中Ca2＋浓度对钙周期素结合蛋白（CacyBP/SIP）的核转位及增殖、凋亡的影响。方法 采用免疫荧光染色观察不同浓度的钙离子载体（ionomycin）刺激结肠癌SW480细胞CacyBP/SIP的细胞内定位，噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。结果 在结肠癌细胞SW480中，CacyBP/SIP在细胞质表达；1 μmol/L ionomycin刺激组CacyBP/SIP表达于细胞质；2 μmol/L刺激组CacyBP/SIP表达于胞质和胞核；5 μmol/L刺激组CacyBP/SIP表达于胞核；10 μmol/L刺激组CacyBP/SIP重新分布于胞质和胞核。不同浓度ionomycin组与未处理组比较，结肠癌SW480细胞的存活率无明显影响（（P＝172.918）。不同ionomycin浓度刺激组与对照组比较，对结肠癌SW480细胞的早期凋亡率[（0.747±0.049）%]和总凋亡率[（2.383±0.068）%]均无影响（P＝79.618）。结论 在结肠癌SW480细胞中，Ca2＋浓度可以影响CacyBP/SIP核转位，但不影响细胞的增殖和凋亡。
- 杨博刘爱琴武婧翟惠虹冯珊珊
- 关键词：结肠癌钙离子核转位
