国家自然科学基金(81171640)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：梁未丽阚飙李杰张力赵璇更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所天津市疾病预防控制中心山东省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科委项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD的克隆表达
- 2014年
- 目的克隆表达霍乱弧菌甘露醇特异性磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统操纵子中的甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD。方法以测序株N16961染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增mtlD基因,扩增产物经NdeⅠ和XhoⅠ酶切后克隆入表达载体pET-30a。0.1 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解上清经Ni柱亲和层析纯化,比色法测定酶活性。结果 mtlD基因成功克隆入表达载体pET-30a,在宿主菌BL21中诱导表达,利用Ni亲和层析柱获得较高纯度的羧基端带His标签的MtlD蛋白,并具有酶活性。结论表达纯化了有活性的霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶,为进一步的功能研究打下了基础。
- 梁未丽陈保立赵萌周妍妍阚飙
- 关键词：霍乱弧菌
- 中国O1群El Tor霍乱弧菌产毒株表型多态性研究被引量：2
- 2014年
- 目的：了解近50年中国不同地区分离的O1群El Tor型霍乱弧菌产毒株的生物表型特征变化。方法采用多粘菌素B敏感试验、第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解试验、VP试验和溶血实验进行表型特征分析。结果生物型表型特征分析表明133株菌具有典型的El Tor生物型表型特征，其余251株菌呈现不典型的El Tor生物型表型特征；综合ctxB、rstR基因型和生物型表型特征分析，385株检测菌株中64株为典型El Tor生物型菌株，21株菌有典型的El Tor生物型表型特征但携带古典型ctxB基因，杂合型特征菌有280株，根据ctxB、rstR和表型特征的不同组合可再分为45个杂合型。结论中国O1群El Tor霍乱弧菌菌株呈现明显的表型多态性，传统的表型分型特征不能有效区分古典生物型和El Tor生物型菌株。
- 赵璇张力李杰阚飙梁未丽
- 关键词：霍乱弧菌生物型
- 霍乱弧菌宿主整合因子β亚单位的可溶性克隆表达被引量：1
- 2016年
- 目的克隆表达霍乱弧菌全局性调节子宿主整合因子(integration host factor,IHF)β亚单位基因ihfB。方法以C7258染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ihfB基因,扩增产物经NheⅠ和SapⅠ酶切后克隆入表达载体p XTB1;将ihfB的N端和α亚单位基因ihf A的C端通过搭桥PCR重组,重组片段N-ihfB-C-ihf A经NheⅠ和SapⅠ双酶切后克隆入表达载体p XTB1。重组质粒导入大肠埃希菌ER2566,0.4 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解,上清经CBD柱吸附纯化,二硫苏糖醇(DTT)柱上裂解洗脱。结果成功构建表达野生型ihfB基因和嵌合体N-ihfB-C-ihf A的重组表达质粒p XTB1-ihfB和p XTB1-N-ihfB-C-ihf A,并在宿主菌ER2566中诱导表达。p XTB1-ihfB为不溶性的包涵体表达,p XTB1-N-ihfB-C-ihf A为可溶性表达,并获得高纯度的表达产物。结论克隆表达了IHFβ亚单位基因ihfB,IHF-α的C端可显著提高IHF-β的可溶性,获得可溶性表达的纯化IHF-β嵌合体蛋白,为后续调控功能研究奠定了基础。
- 李晶王洪霞阚飙梁未丽
- 关键词：霍乱弧菌克隆表达
