中国博士后科学基金(2013M542281)
- 作品数：3 被引量：23H指数：2
- 相关作者：陈勃江李为民黄娜朱静张雯更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院绵阳市中心医院成都医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金四川省应用基础研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺癌与慢性阻塞性肺疾病相关性的研究进展被引量：19
- 2014年
- 肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤,在男性和女性恶性肿瘤死因中均居首位,严重威胁人类健康[1].吸烟已被证实是肺癌最重要的环境危险因素.烟草在燃烧中产生多环芳烃类、砷、苯等多种致癌物质,损伤支气管上皮细胞,导致癌变.炎症在肺癌的发生和发展中也起到重要作用[2].慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）是呼吸系统最常见的慢性炎症性疾病,临床工作中也常见到肺癌合并慢阻肺的患者,因此推测肺癌与慢阻肺可能存在复杂的联系.重视肺癌与慢阻肺并存,探讨二者相同的危险因素和潜在的相关发病机制,有望进一步推动肺癌和慢阻肺的综合防治工作.
- 陈勃江李为民
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病疾病相关性肺癌慢性炎症性疾病环境危险因素支气管上皮细胞
- 核糖体蛋白S6 shRNA慢病毒载体的构建及其对肺腺癌A549细胞株增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨靶向抑制核糖体蛋白S6(rpS6)表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体的构建方法及抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖的影响。方法合成针对rpS6基因的双链寡核苷酸序列,插入质粒载体pGCsil-GFP,转化大肠杆菌细胞,测序鉴定插入片段;再通过293T细胞转染和慢病毒包装,收集浓缩病毒并感染肺腺癌A549细胞株。流式细胞技术分选强阳性表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞克隆,荧光定量PCR及Western blot检测rpS6基因的mRNA和蛋白干扰效率。体外利用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖能力的影响。结果重组pGCsil-sh-rpS6-GFP质粒经测序鉴定示:插入序列与rpS6干扰序列完全符合,证实pGCsil-sh-rpS6-GFP质粒构建成功。sh-rpS6慢病毒稳定感染A549细胞株后,流式细胞技术分选GFP强阳性表达的细胞克隆比率为86.80%。荧光定量PCR与Western blot检测示:sh-rpS6组的mRNA和蛋白干扰效率分别为(79.72±6.83)%、(83.77±12.13)%。体外增殖实验示:与A549细胞相比,sh-rpS6组在各时间点的OD值较对照组均下降(均P<0.05)。结论构建的sh-rpS6慢病毒载体能稳定、有效地抑制肺腺癌A549细胞株rpS6的表达,并有效减慢A549细胞株的增殖速度。
- 陈勃江李为民刘丹张雯
- 关键词：短发夹RNA肺腺癌增殖
- 携带人AKT2、PDK1、BAD基因的慢病毒表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：3
- 2014年
- 目的构建含人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT2)、磷酸肌醇依赖激酶-1(phosphoinositide-dependent kinase 1,PDK1)、bcl-2相关性死亡蛋白(bcl-2-associated death protein,BAD)基因的绿色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法选择病理证实的非小细胞肺癌(NSCLC)组织,采用特异性引物RT-PCR扩增AKT2、PDK1及BADcDNA。将PCR产物与T载体连接测序,测序正确的目的片段从T载体上酶切下与慢病毒骨架质粒连接,将此重组的慢病毒表达载体质粒及包装系统共转染入293T细胞(人胚肾细胞系),收集病毒上清,Western blot检测AKT2,BAD及PDK1蛋白质表达。结果凝胶电泳证实AKT2,BAD,PDK1三基因成功转导至以pCDF1-MCS2-EF1-copGFP为骨架质粒的慢病毒包装系统中,磷酸钙转染法72h后BAD、PDK1及AKT2的转染率分别约为100%、95%、90%。慢病毒包装后测定3种病毒滴度均达6.7×106PFU/mL,并通过Western blot法检测到AKT2,BAD,PDK1蛋白在293T细胞的表达。结论成功构建了携带人AKT2、BAD、PDK1原癌基因的慢病毒表达载体,在293T细胞中成功鉴定其表达。
- 朱静陈勃江黄娜李为民
- 关键词：AKT2BAD慢病毒载体绿色荧光蛋白
