国家自然科学基金(81171628)
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
- 相关作者：陈维贤王曦陈红黄英胡琴更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- SIRT1基因沉默诱导肝癌细胞老化及其机制被引量：5
- 2012年
- 目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-time PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。BrdU标记实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化;β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化;Western blot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRNA及蛋白水平。SIRT1沉默能抑制肝癌细胞的增殖,抑制率达70%～80%;同时,SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞:感染shCont的细胞处于G1期比例为(44.29±0.36)%,而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞为(69.20±1.24)%,感染shSIRT1-2的细胞处于G1期比例为(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高,阳性细胞占40%～50%(P<0.05),并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论 SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。
- 宋春丽任吉华张祯祯陶颖陈娟
- 关键词：肿瘤细胞系细胞衰老
- 小鼠模型中维生素E脂质体纳米颗粒靶向转运siRNA抑制丙型肝炎病毒核心蛋白表达被引量：2
- 2018年
- 目的 研究维生素E脂质体纳米颗粒（VE-DC）在小鼠模型中靶向转运小干扰RNA（siRNA）至肝脏抑制丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV Core）的有效性. 方法 采用“高压水动力法”将含有HCV Core的质粒通过尾静脉注射入小鼠体内,构建肝脏特异性表达HCV Core 的动物模型,应用蛋白印迹技术和免疫荧光技术研究纳米颗粒VE-DC/siRNA对肝脏的靶向性及其对HCV Core的抑制作用;通过双荧光素酶报告基因检测和小鼠活体成像分析进一步验证VE-DC/siRNA对HCV 51非翻译区介导的基因表达的抑制作用;通过检测血肌酐、白细胞及干扰素等指标,评价VE-DC/siRNA的不良反应.组间差异比较采用t检验和单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 双荧光素酶报告基因分析显示VE-DC/siRNA处理组的相对荧光素酶活性为39.67％±15.53％,明显低于DC/siRNA组的77.33％±11.06％和siRNA处理组91.67％±13.65％,P＜ 0.05,差异有统计学意义,且未发现VE-DC/siRNA有明显器官毒性及明显免疫反应.纳米颗粒VE-DC具有较好的肝脏的靶向性,可以转运siRNA至肝脏并有效抑制HCV Core的表达,抑制率平均可达83.01％.结论 VE-DC在小鼠模型中可以靶向转运siRNA至肝脏,并抑制HCV相关基因的表达,显示出较高转运效率及较低毒性的特点.
- 叶媛媛陈红颜艳段亮陈维贤黄英
- 关键词：RNA干扰维生素E靶向治疗
- 缺血修饰清蛋白对急性冠脉综合征诊断价值的荟萃分析被引量：7
- 2013年
- 目的系统评价缺血修饰清蛋白(IMA)对急性冠脉综合征(ACS)的诊断价值。方法计算机检索PubMed、Em-base、ScienceDirect、Springer、Ovid、万方、维普等数据库中的文献,按照纳入排除标准筛选文献,采用QUADAS工具评价纳入文献质量,采用SPSS 17.0、Meta-Disc 1.4及Review Manager 4.2进行统计分析。结果最终纳入13篇文献,包括8篇中文文献及5篇英文文献,样本量为2 381例,异质性检验示存在非阈值效应,采用随机效应模型合并统计量。13项研究汇总灵敏度为78%(75%～80%),汇总特异度为66%(63%～68%),汇总阳性似然比为2.57(1.69～3.61),汇总阴性似然比为0.28(0.16～0.48)。SROC曲线下面积为0.848 9。IMA对ACS诊断的灵敏度(72%)高于肌钙蛋白(cTnT)(39%),IMA的特异度(57%)低于cTnT(72%)。结论 IMA对ACS诊断的灵敏度明显高于cTnT,因而可以作为诊断ACS的新指标。同时,IMA值位于正常水平时对排除ACS有更高的临床价值。
- 胡琴陈维贤詹茜王曦
- 关键词：血清白蛋白冠状动脉疾病META分析
- 雷帕霉素诱导细胞自噬促进乙型肝炎病毒的复制被引量：3
- 2014年
- 目的研究雷帕霉素诱导细胞产生自噬对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响。方法通过雷帕霉素诱导人肝癌细胞HepG2 2.15产生自噬,荧光显微镜和透射电镜下观察自噬小体形成,Western blot检测诱导后HepG2 2.15细胞自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I的表达水平;荧光定量PCR检测HBV mRNA水平;加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),Western blot检测自噬抑制后LC3-II/LC3-I的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的表达,Southern blot检测HBV DNA水平,验证HBV复制情况。结果雷帕霉素诱导后,HepG2 2.15细胞在荧光显微镜和透射电镜下观察到自噬小体的形成,LC3-II/LC3-I比值显著上升(P<0.05);细胞诱导自噬后HBsAg和HBV mRNA显著增加(P<0.05),而加入自噬抑制剂3-MA后,HBsAg和HBV DNA均显著减少(P<0.05)。结论雷帕霉素可能通过诱导细胞自噬促进HBV的复制。
- 李霞黄文娟朱素菲陈维贤
- 关键词：雷帕霉素自噬乙型肝炎病毒
- 联合应用HE4和ROMA诊断卵巢癌的研究进展被引量：6
- 2014年
- 卵巢癌的早期表现与卵巢良性病变的临床表现相似，导致卵巢癌确诊时，患者有可能已处于卵巢癌晚期。由于卵巢癌患者的治疗时机极易被延误，导致卵巢癌在各种女性肿瘤的病死率中高居第五位。卵巢癌的治疗技术已有一定程度的提高，但仍无法降低其病死率。目前临床主要通过血清 CA125检测和妇科超声检查诊断卵巢癌，但 CA125在灵敏度和特异度方面均存在一定局限性。多种恶性肿瘤（如子宫内膜癌、宫颈癌、肺癌等）及良性疾病（如肾衰、肝功能衰竭、渗出液、卵巢囊肿、子宫肌瘤、子宫内膜异位症等）均可导致血清 CA125水平升高。人附睾蛋白4（HE4）是具有卵巢癌早期诊断性能的血清标志物。本文对 H E4作为卵巢癌的肿瘤标志物的相关研究及进展进行了综述。
- 张文超陈维贤
- 关键词：卵巢癌
- 血清降钙素原对多器官功能障碍综合征早期诊断价值的Meta分析被引量：14
- 2013年
- 目的对血清降钙素原(PCT)用于早期诊断多器官功能衰竭价值进行系统性评价。方法计算机检索PubMed、MEDLINE、万方数据知识服务平台等,收集相关原始研究文献。通过QUADAS质量评价标准评估纳入文献质量。用Review Manger5.14对文献做连续性变量的WMD、SMD以及95%CI。结果共检索出相关文献387篇,最终获取文献9篇,共272例MODS患者,433例非MODS患者。其WMD以及95%CI为4.22(2.84,5.61),其SMD以及95%CI为1.79(0.90,2.68)。结论 PCT对多器官功能障碍的早期诊断有应用价值,并发多器官功能障碍综合征患者入院后24h即可检测,可作为早期预测MODS的独立指标。
- 王曦陈维贤
- 关键词：降钙素原多器官功能障碍综合征META分析
- 维生素E脂质体纳米颗粒转运siRNA抑制丙型肝炎病毒核心蛋白表达的实验研究被引量：2
- 2017年
- 目的研究携带针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)RNA的小干扰RNA(siRNA)的维生素E(Vitamin E)脂质体纳米颗粒在体外靶向抑制HCV复制的作用。方法采取"薄膜水化法"制备Vitamin E脂质体纳米颗粒,应用激光粒度分析仪测量纳米颗粒VE-DC/siRNA的颗粒大小及zeta电位,应用透射电子显微镜观察VE-DC形态及分散性。以Huh7.5.1细胞株作为载体。CCK-8法检测纳米颗粒的细胞毒性,琼脂糖凝胶电泳检测纳米颗粒携带siRNA的血清稳定性,蛋白印迹技术和免疫荧光技术检测该siRNA纳米颗粒的转染效率及对HCV的抑制作用。结果 Vitamin E脂质体纳米颗粒形态呈球形,粒度分布为(125.5±9.0)nm,zeta电位为(39.1±4.8)m V,分散均一。相较同浓度商品化脂质体,VE-DC/siRNA对细胞的毒性相对较小。血清稳定性实验显示,VE-DC/siRNA在24 h后siRNA无降解,较裸siRNA稳定性显著提高。携带siRNA的Vitamin E脂质体纳米颗粒可以较高效率进入Huh7.5.1细胞内,并抑制HCV核心蛋白的表达。结论 Vitamin E脂质体纳米颗粒可以转运siRNA至Huh7.5.1细胞,并抑制HCV核心蛋白的表达。
- 李小平颜艳陈红陈维贤黄英
- 关键词：丙型肝炎RNA干扰维生素E靶向治疗
- 白细胞介素12基因多态性与结核易感性的关系被引量：1
- 2014年
- 结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌感染引起，在全球由单一致病菌致死最多的慢性传染病。人类基因组学指出遗传易感性可能是影响宿主免疫功能和结核病发生、发展的因素之一，然而，基困多念性和环境因素共同影响了结核病的发病与转归。
- 胡世玲陈维贤
- 关键词：结核白细胞介素12基因多态性
- Clusterin基因沉默对脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响
- 2014年
- 目的:研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin,CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法:设计和合成靶向CLU的短发夹RNA(short hairprin RNA,shRNA)序列(CLU shRNA1,CLU shRNA2),并构建到慢病毒的载体plentilox 3.7,以不针对任何基因的shRNA序列作为对照(对照shRNA)。包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞,Real-time PCR法和Western blot法测定CLU mRNA表达和蛋白质表达水平,证实干扰效果。给予不同放射剂量(2、4、6 Gy)处理后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bxomide,MTT)法及流式细胞仪Annexin V/PI法检测脑胶质瘤U87细胞的存活率及凋亡率。Western blot方法筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU mRNA和蛋白质的表达。MTT实验结果显示实验干扰组细胞在不同放射剂量下的脑胶质瘤实验U87细胞的存活率与对照组比较明显下降,差异具有统计学意义(4 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.003;6 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明:4 Gy放疗后2个实验组细胞凋亡率均明显增加,最高达(35.54±0.95)%,较对照组高2倍多,差异具有明显统计学意义(对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000;对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。Western blot法发现CLU沉默可以显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平。结论:CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达,明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性,有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点。
- 张蕴蕴周伟孙卯黄锣陈晓品
- 关键词：脑胶质瘤RNA干扰
- 自噬相关基因频率分布特征与肺结核相关性研究被引量：1
- 2017年
- 目的根据肺结核患者自噬相关基因(ATG)频率分布特征探讨ATG位点多态性与肺结核易感相关性。方法应用SequenomMassArray质谱阵列技术对202例肺结核患者(病例组)及222例健康体检者(对照组)ATG的18个单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型,统计分析各位点基因型与肺结核易感相关性。结果在肺结核患者和对照组中,校正了性别、年龄等因素后,通过二元logistic回归分析发现ATG4A基因rs807185和rs5973822位点基因型和等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。通过体质量指数(BMI)分层分析,发现这一差异在高BMI人群中更为显著,且均有病例组人群分布频率低于对照组的表现,其余16个SNP位点差异均无统计学意义。结论 ATG4A基因rs5973822和rs807185位点多态性可能与肺结核易感性相关联,且在高BMI群体中差异更显著。
- 李颖黄秦陈维贤李升锦
- 关键词：结核自噬基因多态性单核苷酸
