“十五”国家科技攻关计划(2001BA70113)
- 作品数：22 被引量：113H指数：7
- 相关作者：孙强李厚达高慧谢夏阳冯洁更多>>
- 相关机构：扬州大学华东师范大学上海医药工业研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 乙酰基亚硝基脲诱导小鼠突变的初步研究被引量：13
- 2003年
- 目的 探索乙酰基亚硝基脲 (ENU)诱导小鼠突变的效率 ,筛查并获得能显性遗传的突变型小鼠。方法 采用 8～ 10周龄的雄性C57BL 6小鼠 33只、DBA 2小鼠 18只 ,腹腔注射ENU10 0mg kg ,每周一次共三次 ,与同品系母鼠配种 ,在后代小鼠中针对可见表型筛查突变个体。结果 处理雄鼠有 9至 13周的不育期 ;在已经筛查的12 4 1只小鼠中得到眼睛异常、多趾、少趾及腹部白斑、矮小等突变个体 6 1只 ,突变率约 5 % ;获得单基因显性遗传的突变品系 2种。结论 ENU为小鼠的强诱突变剂 ;通过诱变可以得到遗传突变小鼠 ,为建立人类疾病动物模型提供条件 ;
- 吴宝金茅慧华薛小萍朱洪阎志峰杨玲孙强徐向明薛整风李厚达
- 关键词：小鼠突变
- 脑部特异表达SV40Tag转基因动物模型的建立被引量：4
- 2007年
- 将猿猴病毒抗原蛋白(SV40Tag)片段克隆进脑部特异表达载体pMM279中,通过显微注射法制作转基因小鼠。采用PCR和Southern blotting检测目的基因整合,并通过RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明:共出生29只仔鼠,经PCR检测出3只阳性,Southern blotting检测出2只阳性。RT-PCR检测到SV40Tag仅在前脑部皮层和海马表达。成功获得的脑部特异表达SV40Tag转基因小鼠模型,为SV40Tag的致病机制及脑肿瘤的治疗等研究提供工具。
- 冯洁孙强邢华高诚李厚达
- 关键词：脑肿瘤转基因
- 人乳头瘤病毒16E7DNA疫苗微针给药效果研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨DNA疫苗微针给药方法的有效性。方法构建pcDNA3．1-HPV16E7重组质粒，在体外透皮条件下，观察pcDNA—HPV16E7皮肤透过量，再利用微针给药方式免疫BALB／c小鼠，分三组（实验组、空载体对照组、阴性对照组），每组10只，每2周免疫1次，共3次，每次免疫剂量为200μg／只，对照组参照实验组进行，最后1次免疫后2周采血，分别分离血清和淋巴细胞，用间接免疫荧光试验检测小鼠的体液免疫功能，用淋巴细胞转化试验检测小鼠的细胞免疫功能。结果体外透皮试验显示DNA疫苗微针给药可以透过皮肤，而且透过量随着时间的延长而逐步增加，在第30小时时可以达到0．73819mg／cm^2；通过微针给药方法DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性抗体，淋巴细胞转化试验显示：实验组（平均淋巴细胞转化率为47．25％）和阴性对照组（平均淋巴细胞转化率为30．00％）之间比较，Χ^2=12．903，P〈0．001，差异有显著统计学意义；空载体组（平均淋巴细胞转化率为43．00％）和阴性对照组之间比较，Χ^2=7．292，P=0．007，差异有显著统计学意义；实验组和空载体组之间比较，Χ^2=0．817，P=0．366，差异无统计学意义。结论HPV16E7DNA疫苗经微针给药可以透过皮肤吸收并诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应。
- 高慧潘金春陈兵薛整风李厚达
- 关键词：疫苗DNA投药途径
- 两种含SV40T不同区段的基因构建及其转基因小鼠的建立被引量：1
- 2005年
- 目的 为解决SV4 0T转基因小鼠高发瘤难保种的问题 ,构建了两种含有SV4 0T不同区段的外源基因 :Rb结合域点突变的SV4 0T基因 (SV4 0T DRb)和无p5 3结合域的SV4 0T基因 (SV4 0T Dp5 3)。方法 利用分子生物学的基因克隆手段 ,将改造的SV4 0T基因片段克隆测序 ,最终将这两个改造后的基因克隆进乳腺特异性的真核表达载体p2 0 5C3中 ,运用雄原核显微注射法制备转基因小鼠。结果 利用PCR方法检测出 6只双阳性转基因 (同时检测到SV4 0T DRb和SV4 0T Dp5 3两种基因 )小鼠 ,为避免检测结果中假阳性的发生 ,应用Southern blot方法检测出 1只双阳性转基因小鼠。结论 本试验的结果证明 ,构建的两种含SV4 0T不同区段的策略是成功的 ,其建立的阳性转基因小鼠确实是弱化了SV4 0T转基因小鼠高发瘤的特性。
- 谢夏阳滕勇孙强徐平孙怀昌李厚达
- 关键词：转基因小鼠PCR肿瘤模型DNA肿瘤病毒
- 聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究
- 2004年
- 目的 探讨聚合酶链反应技术 (PCR)在检测石蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法 利用PCR技术 ,对 55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA DNA进行了检测。结果 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA DNA ,这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌 (S .aureus)感染相一致。结论 PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA DNA片段 ,为鼠S .
- 高正琴邢华孙怀昌李厚达
- 关键词：聚合酶链反应石蜡切片金黄色葡萄球菌DNA
- HPV16L1抗原表达肿瘤模型的建立
- 2006年
- 应用基因重组技术,构建pcDNA-L1真核表达载体,经限制性内切酶和序列分析,用脂质体转染技术将其转入B16细胞,G418稳定筛选后IFA法检测其表达,RT-PCR法检测HPV16L1 mRNA 的生成,并将转染细胞接种小鼠皮下,观察成瘤情况及RT-PCR法检测HPv16L1 mRNA的生成。结果,酶切鉴定证实重组质粒中插入的目的基因片段及载体大小、方向和插入位点均正确,在转染的 B16细胞中可见绿色荧光并检测到HPV16L1 mRNA的生成,接种的转染细胞在小鼠皮下可成瘤, 接种后1月在肿瘤组织中可检测到HPV16L1 mRNA的生成,B16细胞转染L1后其致瘤性与转染空载体组和野生型B16细胞组无明显差异。
- 高慧黄正芳刘进薛整风李厚达
- 关键词：HPV16L1基因转染肿瘤模型
- 脑部特异表达rtTA调控元件转基因小鼠的构建被引量：1
- 2008年
- 为获得一种可调控基因表达系统,避免传统转基因在胚胎发育早期表达的毒性作用或致死作用以及基因过度表达而造成难于分析的复杂多表型,应用分子生物学方法将四环素反式激活子rtTA克隆到仅在脑部能被激活的钙调蛋白依赖性蛋白激酶CaM kinaseⅡα亚基启动子之后,将其通过显微注射方法注入FVB小鼠受精卵雄原核中获得四环素调控系统中反应组分的转基因工具鼠。经PCR及Southern检测,最终得到3只阳性小鼠(1公2母),表达检测结果显示,其中仅2只(1公1母)后代检测到rtTA表达产物。结果表明已成功构建四环素调控系统中的转基因工具鼠,为今后研究其他脑部基因功能提供便利。
- 章蓉孙强徐桂芳董娟金宇娟江楠
- 关键词：小鼠转基因RTTA
- Tet-on系统诱导猿猴病毒40T在CHO细胞中的表达
- 2005年
- 四环素诱导表达系统(T et-off/T et-on系统)是比较成熟的真核生物基因诱导表达系统之一,具有高效、无毒、严密开/关功能的特点。猿猴病毒40T(SV 40T)是一种病毒癌蛋白,其与肿瘤抑制蛋白p53和R b结合,并使之失活,从而消除它们抑制细胞生长的功能,使细胞分裂加速,形成肿瘤。利用T et-on系统首先稳定筛选获得了表达T et-on系统调节元件rtTA的阳性细胞CHO-pT et-on,再通过稳定筛选又成功得到导入其反应元件的双阳性细胞CHO-pT et-on-pTRE 2-SV 40T-Hyg,经强力霉素诱导表达了目的基因SV 40T,建立了T et-on基因诱导表达系统的细胞诱导表达研究平台。
- 朱洪孙强徐向明孙怀昌李厚达
- 关键词：强力霉素
- 共刺激分子配体B7-H1基因真核表达载体和转基因细胞的构建被引量：2
- 2005年
- 以PHA刺激的小鼠外周血单核细胞中抽提的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B 7-H 1基因。按常规方法克隆进pEF 6V 5H is A载体,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48 h后进行间接免疫荧光试验,72 h后用B lastic id in进行筛选,挑选出能稳定表达B 7-H 1的细胞株。结果表明:成功地克隆小鼠B 7-H 1基因并构建了用于表达B 7-H 1基因的真核表达载体,经间接免疫荧光试验证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经W estern-b lotting检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B 7-H 1基因。
- 冯洁王光凤孙强邢华李厚达
- 关键词：肿瘤细胞共刺激分子真核表达
- 人乳头瘤病毒16L1蛋白的原核表达及免疫原性研究被引量：2
- 2005年
- 采用聚合酶链反应技术从宫颈癌组织中获得人乳头瘤病毒(HPV)16L1基因,克隆到pGEM-TEasy载体中,再连接到原核表达载体pGEX-6p-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导、SDS-PAGE分析,用表达产物免疫小鼠,获得的血清进行间接免疫荧光检测。结果表明:获得的pGEX-6p-1-L1基因在大肠杆菌中能以谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白的形式得到高效表达,表达产物免疫小鼠,间接免疫荧光显示免疫血清能与pcD-NA-L1转染的B16细胞呈现特异反应,说明体外表达的HPV16L1蛋白保留了天然蛋白的抗原性,可作为HPV的诊断抗原、免疫学分析和疫苗研制的原料。
- 高慧高慧潘金春徐向明薛整风李厚达
- 关键词：人乳头瘤病毒L1基因原核表达抗原性
