食品科学与技术国家重点实验室科研基金(SKLF-MB-200802)
- 作品数：21 被引量：136H指数：8
- 相关作者：吴敬陈坚陈晟吴丹李兆丰更多>>
- 相关机构：江南大学浙江工商大学光明乳业股份有限公司更多>>
- 发文基金：食品科学与技术国家重点实验室科研基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶分离纯化及化学修饰提高其热稳定性被引量：3
- 2013年
- 研究了不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)经化学修饰后的热稳定变化,首先通过阴离子交换和疏水色谱分离纯化了来源于Paenibacillus macerans的天然α-CGT酶以及来源于Escherichia coli和Bacillus subtilis的重组α-CGT酶,再将α-CGT酶置于50℃水浴30min测残酶活,发现α-CGT酶残酶活分别为28%,30%和25%。首次采用戊二醛交联的方法研究了化学修饰对提高重组α-CGT酶稳定性的影响,E.coli重组表达的α-CGT酶经戊二醛交联成大分子聚合物后,与对照相比50℃水浴30 min后酶的热稳定性明显提高,水浴后仍有78%的酶活,酶活保有率相对未交联的酶提高了2.9倍。
- 吴丹郑贤良吴敬
- 关键词：酪蛋白补铁
- 一种嗜热细菌来源角质酶的分离纯化及酶学性质被引量：4
- 2009年
- 通过跟踪发酵液中pNPB水解酶活性,对角质诱导的Thermobifida fusca发酵液进行分离纯化.采用活性炭脱色、硫铵沉淀、Phenyl HP疏水色谱、DEAE Sepharose阴离子交换色谱等方法,分离纯化得到电泳纯pNPB水解酶.该酶水解角质可得到角质单体,是一种角质酶.SDS-PAGE电泳结果显示,角质酶表观分子量约为29×103.该酶的最适温度为60℃,在40℃和60℃下均具有良好的热稳定性.最适pH为8.0,pH稳定范围为6.0～9.0.该角质酶的生化性质适合在纺织工业中应用.
- 陈晟陈坚吴敬
- 关键词：嗜热细菌分离纯化酶学性质热稳定性
- 利用来源于Paenibacillus macerans的α-CGTase突变体Y89D制备α-环糊精被引量：10
- 2011年
- 对α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)突变体Y89D制备α-环糊精的影响因素进行初步研究。其因素包括淀粉种类(马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、可溶性淀粉)、加酶量、反应时间、pH值、有机溶剂(乙醇、异丙醇、正丁醇、正癸醇)和温度。结果表明:选用5g/100mL马铃薯淀粉、pH5.0、温度30℃、加酶量控制在每克淀粉5U左右,反应体系中加入体积分数5%的正癸醇,反应6h后,淀粉总转化率可达70%,其中α-环糊精在产物中质量分数约为85%,转化产物中含有少量β-环糊精(15%),而极少生成γ-环糊精。因此,α-CGTase突变体Y89D在制备α-环糊精工艺中具有很好的工业化应用前景。
- 王宁吴丹陈晟陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精Α-环糊精葡萄糖基转移酶转化率
- 重组大肠杆菌生产L-色氨酸发酵条件优化被引量：4
- 2012年
- 为了提高重组大肠杆菌FB-04/pSV-04发酵生产L-色氨酸的产量,减少代谢副产物乙酸的生成,考察了比生长速率和无机盐对重组大肠杆菌发酵生产L-色氨酸的影响。在确定了合适的比生长速率和无机盐浓度之后,乙酸积累很少,L-色氨酸的产量为53.4 g/L,比优化前提高了141.6%。经30 L发酵罐初步放大,L-色氨酸的产量达53.6 g/L,发酵结果稳定,具有工业化应用前景。
- 邹纯陈晟赵志军王磊罗锋吴丹陈坚吴敬
- 关键词：比生长速率无机盐L-色氨酸乙酸
- 化学添加剂提高重组α-环糊精葡萄糖基转移酶酶制剂稳定性被引量：4
- 2011年
- 通过向重组α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)液中添加化学添加剂以提高其热稳定性及贮存稳定性。在不同温度下研究了添加剂对酶液的贮存稳定性影响,并用圆二色谱(CD)研究了CGT酶在近紫外区和远紫外区蛋白质结构与热稳定性的变化关系。当单独加入各种添加剂在50℃水浴1 h和室温放置108 d后,发现含有20%甘油的酶液稳定性最好,与未加任何添加剂的对照酶液相比仍有91%和50%的酶活,对照酶液在50℃水浴1 h后仅有小于10%的活性,室温放置108 d后已经没有酶活。明胶、CaCl2和PEG400也有一定的保护效果。将4种保护剂分别以最佳浓度组合叠加添加到CGT酶发酵液中40℃贮存45 d,CGT酶的残酶活几乎不变,维持在100%左右。通过变温圆二色光谱分析α-CGT酶α-螺旋和β-折叠变化,发现了保护剂可以明显降低高温条件下酶的变性程度,有利于维持其二级结构及天然三维构象,使酶在高温时保持较高的酶活。化学添加剂可以明显提高α-CGT酶酶制剂的稳定性,为CGT酶的工业化应用提供稳定剂复配的方法,同时蛋白质的变温圆二色谱分析也为其他蛋白酶热稳定性研究提供了理论依据。
- 郑贤良吴丹李兆丰陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精葡萄糖基转移酶化学添加剂热稳定性圆二色光谱
- 麦芽糖诱导软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的表达
- 2010年
- 通过PCR扩增软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶基因,将基因片段克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pGJ103中,转化枯草杆菌WB600得基因工程菌进行外源表达。在1.5%的麦芽糖初始发酵培养基上摇瓶培养,48 h后重组枯草杆菌产酶活性为6.1U/ml。通过单因素分析和响应面分析对重组枯草杆菌产CGT酶摇瓶发酵条件进行优化。分析得到培养基关键组分麦芽糖,玉米淀粉和酵母粉三者最佳浓度分别为:15.5g/L,13g/L和20g/L。在此条件下,摇瓶培养36h后α-CGT酶活性为17.6U/m l,5L罐分批发酵30h后酶活达到20U/ml(水解活性为1.4×104IU/ml)。
- 张佳瑜吴丹陈晟陈坚吴敬
- 关键词：枯草杆菌响应面优化发酵
- 重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件初步研究被引量：1
- 2010年
- 为提高重组毕赤酵母(P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl)生产β-葡萄糖苷酶的产量,在摇瓶条件下对重组P.pastoris产β-葡萄糖苷酶的发酵过程进行了优化,得到最佳的条件:生长阶段甘油浓度为30 g/L,接种量为10%,诱导阶段甲醇的初浓度为4%,过程补加甲醇0.5%,诱导温度30℃,pH7.5,诱导周期120 h,酶活可达到245 U/mL。在此基础上,在3 L发酵罐上进行初步放大,流加甘油提高细胞密度至OD_(600)为170,开始流加甲醇诱导,最终BGL酶活达到1 175 U/mL。比摇瓶提高了4.8倍,为β-葡萄糖苷酶工业化生产打下了坚实的基础。
- 刘玲玲吴丹朱威陈晟陈坚吴敬
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶重组毕赤酵母发酵优化
- 温度两阶段控制策略发酵生产重组角质酶被引量：16
- 2009年
- 为进一步提高重组Bacillus subtilis WSHB06-07发酵生产角质酶的产量和生产强度,在pH两阶段控制策略的基础上,考察了温度(27～40℃)对菌体生长和产酶的影响.研究发现,37℃适于菌体生长而30℃适于菌体产酶.通过分析发酵过程中菌体比生长速率及产物比合成速率的变化,确定了温度两阶段控制策略,即0～4h时控制温度37℃,4h后将温度调至30℃.通过采用这一优化策略,角质酶酶活和生产强度分别可达312.5U/mL和13.02kUL-1h-1,相比恒定温度37℃控制模式下分别提高了83.4%和10.9%.
- 张芙华华兆哲陈坚吴敬
- 关键词：比生长速率
- 来源于软化芽孢杆菌的环糊精葡萄糖基转移酶在毕赤酵母和枯草杆菌中的表达被引量：14
- 2009年
- 通过PCR扩增软化芽孢杆菌α-CGT酶基因,将基因片段分别克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K和大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pMA5中,分别转化毕赤酵母KM71和枯草杆菌WB600。结果表明,重组毕赤酵母发酵上清液中α-CGT酶活性仅0.2U/mL,重组枯草杆菌产酶达到1.9U/mL。对重组枯草杆菌发酵条件进行了优化,当以TB为出发培养基,初始pH6.5,温度为37oC时,摇瓶培养24h后α-CGT酶环化活性达到4.5U/mL(水解活性为3200IU/mL),是野生菌株软化芽孢杆菌表达量的9.8倍。
- 张佳瑜吴丹李兆丰陈晟陈坚吴敬
- 关键词：毕赤酵母枯草杆菌
- 重组大肠杆菌生产硫磺矿硫化叶菌β-半乳糖苷酶发酵条件初步研究被引量：2
- 2012年
- 为了实现来源于S.solfataricus的β-半乳糖苷酶的高效表达,对E.coli BL21(DE3)/pT7-7-lacS基因工程菌的发酵培养基进行优化,获得最优的发酵培养基为:甘油浓度为10 g/L,蛋白胨浓度为18 g/L,酵母膏浓度为18g/L,磷酸盐浓度为15 mmol/L,Mg^(2+)离子浓度为5 mmol/L,乳糖诱导浓度为5 g/L。在优化条件下,β-半乳糖苷酶的酶活由初始的43.0 U/mL提高到83.4 U/mL。在此基础上,在3 L发酵罐上进行了初步放大,于DD_(600) 50时开始流加乳糖诱导,最终酶活达172.4U/mL,为摇瓶水平的2倍,为β-半乳糖苷酶的工业化生产奠定基础。
- 吴玉飞钱磊张帆陈晟吴敬
- 关键词：Β-半乳糖苷酶重组大肠杆菌发酵优化
