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国家高技术研究发展计划(2006AA100309): 作品数：11 被引量：58H指数：4; 相关作者：孙修勤闫秀英史成银吴灶和简纪常更多>>; 相关机构：国家海洋局第一海洋研究所中国海洋大学广东海洋大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

RNA干扰对LCDV-cn在牙鲆体内复制的影响被引量：2: 2013年; 海水养殖生物病毒病是世界性难题,淋巴囊肿病毒中国分离株(LCDV-cn)是牙鲆(Paralichthys olivaceus)淋巴囊肿病的病原。以mcp基因为靶基因,设计siRNA-mcp1、siRNA-mcp2、siRNA-mcp3等3条siRNA序列,研究RNA干扰(RNAi)对淋巴囊肿病毒在牙鲆体内复制的影响。结果表明,牙鲆体内注入siRNA-mcp1和siRNA-mcp3后,mcp基因的表达有所下调;统计分析表明,注入siRNA-mcp1后,mcp基因的表达下调明显,具有显著性差异(p<0.05),注入siRNA-mcp2、siRNA-mcp3后,mcp基因的表达下调不明显,差异不显著(p>0.05)。本实验中初步实现了RNAi对LCDV-cn复制的抑制作用。; 闫秀英邢明清郑风荣孙修勤简纪常吴灶和; 关键词：RNA干扰

蛙虹彩病毒一个序列保守基因(RGV-12L)的克隆表达及定位分析被引量：2: 2010年; 从蛙虹彩病毒(Rana grylio virus,RGV)中克隆出一个虹彩病毒科的序列保守基因RGV-12L,序列分析表明该基因全长894 bp,编码一个含297个氨基酸的多肽,分子量为33 kD。构建包含该基因全长的原核表达载体,进行原核表达,获得了分子量约53 kD的融合蛋白。将融合蛋白经腹腔注射免疫小鼠,制备出鼠抗RGV-12L血清。通过RT-PCR和Western blotting分析RGV感染细胞后RGV-12L的转录时序,感染4h可以在RNA水平检测到RGV-12L的转录,感染8h可以在蛋白水平检测到RGV-12L的表达。用DNA复制抑制剂阿糖胞苷(Arac)进行药物抑制实验,鉴定出RGV-12L是一个晚期基因。免疫荧光分析显示RGV-12L分布于感染细胞的细胞核和细胞质中,在病毒加工厂中也有该蛋白的分布,提示该基因可能与病毒的装配、释放有关。; 何利波柯飞张奇亚; 关键词：原核表达 RT-PCR WESTERN BLOTTING 免疫荧光

血液指标在鱼类学研究中的应用被引量：38: 2010年; 血液是动物体内的一种重要组织,与机体的代谢、营养状况及疾病有着密切的关系。通过分析鱼类血液生理指标和生化指标,对血液指标在鱼类中的研究进行综述。; 韩娜娜史成银; 关键词：血液鱼类生理指标生化指标

鱼类淋巴囊肿病毒的分子生物学研究进展被引量：1: 2013年; 鱼类淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)遍布全球,且宿主范围广,给水产养殖业造成了严重的损失。国内外学者对LCDV进行了系统的研究。随着对LCDV分子生物学研究的深入,将会建立更加有效防控淋巴囊肿病的途径。对鱼类淋巴囊肿病毒的分子生物学特征、多样性及分子系统学、比较基因组学、功能基因、分子生物学致病机理和病鱼自愈机制及淋巴囊肿病检测、诊断和预防等的分子生物学方法等进行了综述。; 闫秀英孙修勤; 关键词：DISEASE 分子生物学

淋巴囊肿病毒锌指蛋白基因lcn140的原核表达与结构分析被引量：1: 2009年; 应用生物信息学分析方法,预测到中国牙鲆淋巴囊肿病毒分离株(LCDV-cn)的lcn140基因编码锌指蛋白。为了进一步研究lcn140基因的功能,本文对lcn140基因进行了原核表达与结构分析。首先将lcn140基因克隆到pET24a(+)原核载体,再以E.coliBL21(DE3)为宿主菌表达目的蛋白;通过生物信息学软件分析,了解其结构与序列特征。结果表明,lcn140基因在原核载体中得到成功表达,表达的his标签融合蛋白主要以包涵体形式存在;在结构和序列方面,lcn140基因编码C3H1型锌指蛋白,其含有4个C3H1锌指结构和4段简单重复序列。该结果为LCDV-cn的发生、发展提供了分子基础。; 闫秀英孙修勤; 关键词：淋巴囊肿病毒锌指蛋白原核表达

大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达被引量：6: 2009年; 依据大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I和Not I酶切位点,从而将PCR扩增得到的TRBIV MCP基因双酶切后定向克隆到真核表达载体pGAPZαA的GAP启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin筛选、PCR、EcoR I和Not I双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor信号肽的真核重组表达载体pGAPZαA MCP。重组表达质粒pGAPZαA MCP经Avr Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹分析。结果显示,TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72h诱导培养后,重组TRBIV MCP的表达量高达60.2μg/ml左右。; 吴成龙史成银黄倢孔晓瑜; 关键词：大菱鲆红体病虹彩病毒毕赤酵母

牙鲆淋巴囊肿病自愈过程中细胞因子的表达研究被引量：2: 2010年; 中国北方养殖牙鲆的淋巴囊肿病一般发生在水温较低的10~12月,之后随水温的升高肿瘤脱落、出现自愈现象。搞清自愈机理,是有效抑制和减少淋巴囊肿病的重要科学内容。本文研究了不同饲育水温下健康和患淋巴囊肿病牙鲆细胞因子的表达变化,初步探讨了细胞因子在肿瘤自愈中的作用。通过模拟养殖中的水温变化,采用荧光定量PCR（re-al-time fluorescence quantitative PCR）技术,检测了14,18,22和26℃下牙鲆肝、脾、头肾组织中6种细胞因子（白细胞介素1β（IL-1β）、Mx蛋白（Mx）、肿瘤坏死因子（TNF）、肿瘤坏死因子受体（TNFR）、趋化因子（IL-8）和趋化因子受体（IL-8R））表达变化。结果表明,患病牙鲆肝、脾、头肾组织中的IL-8、IL-8R、Mx、IL-1β、TNF和TNFR-1表达量随温度升高而显著升高;健康牙鲆上述细胞因子的表达基本未出现随温度升高而显著上升的现象。本试验结果响应了养殖水温升高肿瘤脱落的现象,提示上述细胞因子在淋巴囊肿病自愈过程中可能发挥了抗病毒作用。; 邢明青孙修勤郑风荣郑明刚洪旭光曲凌云吴谡琦; 关键词：淋巴囊肿病细胞因子温度自愈

淋巴囊肿病毒中国分离株基因组序列和结构分析被引量：4: 2011年; LCDV-cn是分离自中国养殖牙鲆的淋巴囊肿病病原,给中国牙鲆养殖业带来了严重危害。通过PCR、克隆和测序,获得了LCDV-cn部分基因的序列,证明LCDV-cn与LCDV-C的基因组序列是一致的。比较基因组学分析发现,LCDV-cn基因组中有137个ORF是其独有的、与LCDV-1及其它虹彩病毒无同源区域。对LCDV-cn基因组进行生物信息学分析发现,在LCDV-cn独有的ORF中,有的编码与宿主同源的蛋白,有的编码与DNA复制相关的蛋白,某些ORF编码的蛋白含有跨膜区等。LCDV-cn的独有基因或许对其毒力和宿主范围有关。; 闫秀英吴灶和简纪常鲁义善孙修勤; 关键词：比较基因组学生物信息学

Application of quantitative PCR method in detection of Lymphocystis disease virus China (LCDV-cn) in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus): 2007年; Lymphocystis disease causes serious economic losses in the fish farming industry. The causative agent of the disease is Lymphocystis disease virus China (LCDV-cn), which has a wide range of hosts. Based on competitive quantitative PCR technology, we established a method to quantify the LCDV-cn in tissue. Results demonstrate that the average amount of LCDV-cn in the peripheral blood of infected flounder with evident tumors is about 106virions/ml while the average amount in those flounder with no evident tumor but cultured with the flounder with evident tumor is about 104virions/ml. No virus was found in the negative samples of flounder.; 昝金东孙修勤张之文曲凌云张进兴

RNA干扰技术在水生生物研究中的应用被引量：5: 2008年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物体内1种抑制特定基因表达的机制,在果蝇、线虫、真菌和哺乳动物等很多类生物中存在。RNAi也存在于虾、斑马鱼、海鞘等水生生物中,斑马鱼、海鞘等的研究结果证明:RNAi技术是研究水生生物胚胎发育和基因功能的有效方法。众所周知,海水养殖生物病毒病的防治是世界性难题,利用RNAi技术对病毒的特定基因进行干扰,将是1种新型抗病毒治疗方法。为了积极推动该项技术在中国的应用,文中介绍了RNAi在国际水生生物研究中的状况,分析了应用效果与前景。; 孙修勤闫秀英; 关键词：RNA干扰水生生物基因功能抗病毒

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