解放军总医院科技创新苗圃基金(01YM30)
- 作品数：7 被引量：53H指数：4
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- 缺氧诱导因子-1在缺氧预处理心肌保护中的作用及其机制研究被引量：15
- 2004年
- 目的:研究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在缺氧预处理(HPC)心肌细胞保护中的作用及其机制。方法:在培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型上,观察HPC对于24h后心肌细胞H/R损伤的影响,以MTT法测定心肌细胞存活率,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性。制备心肌细胞蛋白提取物,以磷酸化的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抗体测定HPC后不同时间ERK1/2活性,以聚丙烯酰胺电泳迁移实验观察HIF-1α磷酸化,并观察蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059对于HPC诱导的HIF-1α磷酸化以及心肌细胞保护作用的影响。结果:HPC可以提高心肌细胞H/R后存活率、减少LDH漏出,并激活ERK1/2,使HIF-1α发生磷酸化;蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶MEK抑制剂PD98059可以消除HPC诱导的HIF-1α磷酸化和心肌细胞保护作用。结论:HPC可以提高乳鼠心肌细胞对于H/R的耐受性,其机制涉及ERKs介导的HIF-1α磷酸化。
- 刘秀华武旭东蔡莉蓉刘凤英
- 关键词：缺氧预处理心肌缺氧诱导因子-1
- 改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法被引量：17
- 2006年
- 目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4min,用100μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养。用内皮细胞的重要标记物VIII因子相关抗原鉴定细胞,并通过3H-TdR掺入法观察培养细胞对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的反应性。结果:细胞的获得率为1.2×106细胞/g心肌组织,显微镜观察培养细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征;VIII因子免疫细胞化学染色呈阳性;证实获得的是内皮细胞。bFGF刺激后3H-TdR掺入率与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:本研究利用改良的酶消化法,缩短了消化时间,提高了细胞获得率,同时培养的内皮细胞对生长因子具有良好反应性,表明该方法是一种比较理想的体外心肌微血管内皮细胞培养体系。
- 李玉珍刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：心肌微血管内皮细胞分离培养方法大血管内皮细胞人脐静脉内皮细胞主动脉内皮细胞血管相关疾病
- 串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2006年
- 目的观察串珠素对bFGF诱导的心肌微血管内皮细胞增殖的影响。方法分离并培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,经VIII因子相关抗原抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照组、bFGF组、缺氧组、缺氧+bFGF组、PD98059组和串珠素阻断组,以[3H]-TdR掺入法测定内皮细胞增殖反应。结果缺氧+bFGF组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较对照组和bFGF组明显升高,是对照组的11.12倍(P<0.05),bFGF组的4.05倍(P<0.05),表明串珠素和bFGF联合作用可以明显刺激内皮细胞增殖,这种联合作用较单独的串珠素或bFGF作用明显;PD98059组内皮细胞[3H]-TdR掺入率较缺氧+bF-GF组下降了93.40%(P<0.05),表明PD98059可以抑制串珠素与bFGF对内皮细胞的增殖作用。结论串珠素可以增强bFGF对心肌微血管内皮细胞的增殖作用,ERK介导了串珠素对bFGF的作用。
- 李玉珍刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：心肌微血管内皮细胞串珠素BFGF增殖
- 鼠尾胶为贴黏剂的微血管内皮细胞培养被引量：6
- 2005年
- 目的:以鼠尾胶为贴黏剂,建立一种成本低且生长状态良好的微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下制作鼠尾胶,并均匀铺在培养皿中。分离收集脑微血管段,接种于铺有鼠尾胶的培养皿中进行培养。用内皮细胞的两种重要标记物VIII因子相关抗原和γ-谷氨酰转酞酶(-γglutamyl-transpeptidase,γ-GT)鉴定细胞,并以3H-TdR掺入法观察培养细胞对血清刺激的增殖反应性。结果:显微镜观察从脑微血管段生长出的细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征和接触生长抑制;VIII因子免疫组织化学染色呈阳性;培养上清含有大量的γ-谷氨酰转酞酶[(5.01±0.07)IU/L];证实鼠尾胶做为贴黏剂获得的是内皮细胞。10%胎牛血清刺激后3H-TdR掺入率较对照组增加87.5%(P<0.05)。结论:本研究用鼠尾胶做为贴黏剂,降低微血管内皮细胞培养成本,且细胞生长状态良好,表明该方法是一种比较经济可靠的微血管内皮细胞培养体系。
- 蔡莉蓉李玉珍刘秀华
- 关键词：毛细血管细胞培养
- 串珠素的生理与病理生理作用被引量：10
- 2004年
- 串珠素 (perlecan)是细胞外基质中主要的蛋白聚糖之一 ,由核心蛋白和硫酸肝素侧链组成 ,可以通过调节生长因子的结合和活性影响血管壁细胞的增殖、迁移 ,并影响细胞与基质的粘附 ,在机体心血管和软骨发育。
- 刘秀华
- 关键词：串珠素发育血管生成细胞外基质
- 串珠素对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及其机制的研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察串珠素对于大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖反应的影响以及细胞信号转导机制。方法以3H-TdR掺入法测定VSMCs增殖,Westernblot方法检测FAK表达。结果Perlecan加强碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)引起的VSMCs增殖反应,并诱导粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)表达上调。Perlecan抗体消除Perle-can促进bFGF致VSMCs增殖反应,并抑制FAK表达。结论串珠素增强bFGF致大鼠平滑肌细胞的增殖反应,其机制涉及FAK表达上调。
- 付艳刘秀华蔡莉蓉
- 关键词：串珠素血管平滑肌细胞增殖粘着斑激酶
- 低氧诱导因子-1Α参与低氧预处理诱导的心肌血管生成被引量：4
- 2005年
- 目的:研究低氧诱导因子-1Α(HIF-1Α)在低氧预处理(HPC)诱导心肌血管生成中的作用,并探讨其细胞信号转导的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组和HPC组。动物置于低氧仓内,持续通入100% O2和 90％ N2 4H复制低氧预处理模型。用Ⅷ因子免疫组化染色检测HPC后7 D和21 D心肌组织微血管密度。制备心肌组织蛋白提取物,分别以磷酸化的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抗体和HIF-1Α抗体检测HPC后1 D、7 D和21 D P -ERK1/2活性及HIF-1Α表达。结果:HPC后7D和21D心肌组织微血管密度分别较对照组高36．99％和37．76％ (均P<0．01);P-ERK1/2活性在HPC后1D较对照组高18．67％;HPC诱导HIF-1Α的表达,其表达高峰出现在HPC 后1D。结论:HPC可以促进心肌微血管生成,其机制涉及ERKS活化和HIF-1Α表达上调。
- 李玉珍蔡莉蓉孙胜刘凤英刘秀华
- 关键词：低氧诱导因子-1Α低氧预处理
